高壓氧對(duì)新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：利用新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)動(dòng)物模型,觀察HIBD以及高壓氧(hyperbaric oxygen,HBO)干預(yù)后新生大鼠不同時(shí)間點(diǎn)腦組織大體及其細(xì)胞形態(tài)變化、生長(zhǎng)相關(guān)蛋白(growth-associated protein-43,GAP-43)及神經(jīng)生長(zhǎng)抑制因子Nogo-A的合成情況,從而探討HBO干預(yù)對(duì)新生大鼠HIBD的保護(hù)作用及機(jī)制,為高壓氧治療新生兒缺氧

2、缺血性腦病(hypoxic ischemic encephalopathy,HIE)提供新的理論依據(jù)。 方法：7日齡Wistar大鼠144只,雌雄不限,體重12～18g,隨機(jī)分為3組：對(duì)照組(CON組),HIBD組和HBO組,各48只,后兩組制成模型后根據(jù)處死動(dòng)物的時(shí)間不同隨機(jī)分為缺血缺氧后1、4、7、10、14、21d天6個(gè)亞組,每組8只,CON組不做任何處理,也在相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)分為6個(gè)亞組,每組8只。模型采用阻斷右側(cè)頸總動(dòng)脈后

3、置于含8％O2的低氧環(huán)境中2h制備而成。HBO組于缺血缺氧1h后行HBO處理：壓力為2.0ATA、60min/次、1次/d,1、4d亞組連續(xù)治療至動(dòng)物處死,其余亞組連續(xù)治療7d。各組大鼠于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)斷頭取腦后肉眼觀察右側(cè)腦組織大體,光鏡下觀察各組右側(cè)腦組織HE染色的病理改變,免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)三組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)右側(cè)大腦皮層GAP-43和Nogo-A的表達(dá)。 結(jié)果：(1)缺血缺氧后新生大鼠出現(xiàn)不同程度的行為異常。(2)缺血缺氧后

4、肉眼可見(jiàn)腦組織大體有不同程度的異常改變,HBO治療后上述改變減輕。(3)HE染色:CON組腦組織細(xì)胞層次清楚、形態(tài)正常,無(wú)神經(jīng)細(xì)胞缺失；HIBD組術(shù)后1d可見(jiàn)右側(cè)大腦皮層細(xì)胞腫脹明顯,出現(xiàn)變性、壞死；術(shù)后4d壞死明顯；術(shù)后7d神經(jīng)元數(shù)量明顯減少,膠質(zhì)細(xì)胞增生、排列紊亂。術(shù)后14d、21d神經(jīng)元大量丟失,膠質(zhì)細(xì)胞增生明顯。HBO組各時(shí)間點(diǎn)病理變化較HIBD組輕,細(xì)胞排列尚規(guī)則。(4)GAP-43的表達(dá):GAP-43陽(yáng)性染色呈棕黃色的細(xì)顆粒

5、沉積,陽(yáng)性細(xì)胞廣泛表達(dá)于大腦皮層和海馬,陽(yáng)性著色主要位于神經(jīng)元胞體和突起,三組GAP-43陽(yáng)性產(chǎn)物表達(dá)高峰均在術(shù)后第10d對(duì)應(yīng)的時(shí)間,同組不同時(shí)間點(diǎn)陽(yáng)性細(xì)胞平均灰度值比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。HIBD組各時(shí)間點(diǎn)GAP-43免疫陽(yáng)性顆粒染色較CON組深,數(shù)量多,陽(yáng)性細(xì)胞平均灰度值較CON組低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);HBO組各時(shí)間點(diǎn)GAP-43免疫陽(yáng)性顆粒染色較HIBD組深,數(shù)量多,陽(yáng)性細(xì)胞平均灰度值較HIBD組低

6、,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);(5)Nogo-A表達(dá):Nogo-A陽(yáng)性染色呈棕黃色的細(xì)顆粒沉積,廣泛分布于大腦皮層,陽(yáng)性著色主要位于少突膠質(zhì)細(xì)胞,隨日齡增加染色逐漸加深,同組不同時(shí)間點(diǎn)陽(yáng)性細(xì)胞平均灰度值比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。HIBD組各時(shí)間點(diǎn)Nogo-A免疫陽(yáng)性顆粒最多,染色最深,各時(shí)間點(diǎn)陽(yáng)性細(xì)胞平均灰度值均較CON組和HBO組低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論：1、從病理學(xué)和大體上證實(shí)HBO