高壓氧聯(lián)合memantine治療對大鼠局灶性腦缺血損傷的神經(jīng)保護效應(yīng).pdf

1、腦血管意外已成為我國第二大致死疾病。其中，缺血性腦卒中約占70％～80％，且死亡率、致殘率高，嚴重危害人類健康。大量的動物實驗和臨床研究探索了防治缺血性腦損傷的措施，但這些措施的效果仍然有限。因此，尋找新的防治策略是一項亟待解決的課題。
　　高壓氧（HBO）已被證明是一種安全有效的治療缺血性腦卒中的方法，然而，只有在腦缺血后6小時內(nèi)實施HBO治療，才能發(fā)揮其神經(jīng)保護效應(yīng)，過短的治療時間窗限制了HBO在缺血性腦卒中病人中的廣泛應(yīng)用。

2、而目前唯一被FDA批準應(yīng)用于臨床的非競爭性NMDA受體阻斷劑memantine（MEM），也已經(jīng)被證明對腦缺血性損傷有良好神經(jīng)保護作用。然而，較大劑量的MEM會引起較明顯的副作用，限制了其在臨床的應(yīng)用。因此，本研究采用大鼠大腦中動脈阻閉（Middle Cerebral Artery Occlusion，MACO）模型，探討聯(lián)合使用HBO和MEM治療，是否有協(xié)同的神經(jīng)保護作用，即在延長HBO的治療時間窗的同時，降低MEM產(chǎn)生神經(jīng)保護作用的

3、劑量。并初步探討了兩者產(chǎn)生協(xié)同神經(jīng)保護作用的機制。為HBO聯(lián)合MEM治療應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù)。
　　第一部分：高壓氧聯(lián)合memantine治療對大鼠局灶性腦缺血損傷的神經(jīng)保護效應(yīng)
　　實驗一HBO治療對大鼠局灶性腦缺血損傷的神經(jīng)保護效應(yīng)及治療時間窗
　　目的：驗證HBO治療對大鼠局灶性腦缺血損傷的神經(jīng)保護效應(yīng)及治療時間窗。
　　方法：50只雄性SD大鼠，體重280-320g，隨機分為5組(n=10)：對照組(C

4、on)：即單純局灶性腦缺血組；高壓氧治療組(T1h、T3h、T6h、T12h)：即分別于局灶性腦缺血再灌注后1h、3h、6h、12h行高壓氧治療(1h，2.5ATA，100％O2)。采用線栓法制作大鼠局灶性腦缺血模型(MCAO)。腦缺血再灌注后24h行神經(jīng)行為學(xué)評分(Garcia法)，評分后處死動物，取大腦行2,3,5-氯化三苯四唑(TTC)染色，測量腦梗死容積百分比。
　　結(jié)果：T1h組、T3h組、T6h組神經(jīng)功能學(xué)評分明顯優(yōu)于

5、對照組，但三組間無顯著性差異(P<0.01)，T12h組與對照組比較無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。T1h組、T3h組、T6h組梗死容積百分比明顯小于對照組，但三組間無顯著性差異(P<0.01)，T12h組與對照組之間無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。
　　實驗二MEM治療對大鼠局灶性腦缺血損傷的神經(jīng)保護效應(yīng)
　　目的：探討MEM治療對大鼠局灶性腦缺血損傷的神經(jīng)保護效應(yīng)。
　　方法：40只雄性SD大鼠，體重280-320g，隨機分為4組(n=10)

6、：溶劑對照組(CON)：腦缺血后15min腹腔注射2％生理鹽水1ml；MEM治療組(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg)：分別于腦缺血后15min腹腔注射MEM5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg(溶于1ml生理鹽水)。采用線栓法制作大鼠局灶性腦缺血模型(MCAO)。腦缺血再灌注后24h行神經(jīng)行為學(xué)評分(Garcia法)，評分后處死動物，取大腦行2,3,5-氯化三苯四唑(TTC)染色，測量腦梗死容積百分比。
　　

7、結(jié)果：MEM10mg/kg組(P<0.05)、MEM20mg/kg(P<0.01)組神經(jīng)功能學(xué)評分明顯優(yōu)于溶劑對照組，MEM20mg/kg組神經(jīng)功能學(xué)評分優(yōu)于MEM10mg/kg組(P<0.01)，MEM5mg/kg組與溶劑對照組組間比較無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。MEM10mg/kg組、MEM20mg/kg組腦梗死容積明顯小于溶劑對照組(P<0.01)，MEM20mg/kg組腦梗死容積小于MEM10mg/kg組(P<0.05)。MEM5mg/k

8、g組與溶劑對照組組間比較無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。
　　實驗三HBO聯(lián)合MEM對大鼠局灶性腦缺血/再灌注損傷的神經(jīng)保護效應(yīng)
　　目的：探討HBO聯(lián)合MEM對大鼠局灶性腦缺血/再灌注損傷的神經(jīng)保護效應(yīng)。
　　方法：30只雄性SD大鼠，體重280-320g，隨機分為3組(n=10)：對照組(CON)：即單純局灶性腦缺血組；HBO聯(lián)合MEM治療A組(T1h+MEM20mg/kg)：腦缺血后15min腹腔注射MEM20mg/kg，再灌

9、注1h后行高壓氧治療；HBO聯(lián)合MEM治療B組(T12h+MEM5mg/kg)：腦缺血后15min腹腔注射MEM5mg/kg，再灌注12h后行高壓氧治療。采用線栓法制作大鼠局灶性腦缺血模型(MCAO)。再灌注后24h行神經(jīng)行為學(xué)評分(Garcia法)，評分后處死動物，取大腦行2,3,5-氯化三苯四唑(TTC)染色，以測量腦梗死容積百分比。
　　結(jié)果：HBO聯(lián)合MEM治療A組和HBO聯(lián)合MEM治療B組神經(jīng)行為學(xué)評分優(yōu)于對照組(P<0

10、.01)，但兩組間并無統(tǒng)計學(xué)差異。HBO聯(lián)合MEM治療A組和HBO聯(lián)合MEM治療B組梗死容積百分比明顯小于對照組(P<0.01)，但兩組間并無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　第二部分，高壓氧聯(lián)合memantine治療后大鼠血腦屏障通透性的改變
　　實驗四HBO聯(lián)合MEM治療后大鼠血腦屏障通透性的改變
　　目的：研究HBO聯(lián)合MEM治療后大鼠血腦屏障通透性的改變。
　　方法：48只雄性SD大鼠，體重280-320g，隨機分為8組

11、(n=6)：假手術(shù)組(Sham)、局灶性腦缺血組(CON)、高壓氧治療T1h和T12h組，MEM治療5mg/kg和20mg/kg組，HBO聯(lián)合MEM治療A組(T1h+20mg/kg)和HBO聯(lián)合MEM治療B組(T12h+5mg/kg)。采用線栓法制作大鼠大腦中動脈阻閉局灶性腦缺血模型(MCAO)。分別于腦缺血再灌注即刻尾靜脈注射2％伊文氏蘭（EB）(4ml/kg)。腦缺血再灌注后24h處死動物，檢測血腦屏障通透性。
　　結(jié)果：缺血

12、半球：對照組EB含量明顯高于假手術(shù)組；高壓氧治療T12h組和MEM5mg/kg組EB含量與對照組相比無統(tǒng)計學(xué)差異；HBO治療T1h組，MEM20mg/kg組及HBO聯(lián)合MEM治療A組及B組的EB含量明顯低于對照組(P<0.01)，但它們之間無顯著性差異。非缺血半球各組間EB含量無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　實驗五HBO聯(lián)合MEM治療后大鼠腦組織中炎癥因子含量的變化
　　目的：探討HBO聯(lián)合MEM治療后大鼠腦組織中炎癥因子含量的變化。<

13、br>　　方法：48只雄性SD大鼠，體重280-320g，隨機分為8組(n=6)：假手術(shù)組(Sham)、局灶性腦缺血組(CON)、HBO治療T1h和T12h組，MEM治療5mg/kg和20mg/kg組，HBO聯(lián)合MEM治療A組(T1h+20mg/kg)和HBO聯(lián)合MEM治療B組(T12h+5mg/kg)。采用線栓法制作大鼠大腦中動脈阻閉局灶性腦缺血模型(MCAO)。腦缺血再灌注后24h取腦組織，采用ABC-ELISA法檢測IL-1β、T

14、NFα、IL-6、IL-8、IL-10的含量。
　　結(jié)果：對照組較假手術(shù)組腦組織中炎癥因子IL-1β、TNFα、IL-6、IL-8、IL-10含量顯著升高(P<0.05)。HBO治療T1h組、MEM20mg/kg、HBO聯(lián)合MEM治療A組及B組均較對照組腦組織中的炎癥因子IL-1β、TNFα、IL-6、IL-8含量明顯降低，IL-10含量顯著升高(P<0.05)，但它們之間無顯著性差異。HBO治療T12h組、MEM5mg/kg組較

15、對照組腦組織中的炎癥因子IL-1β、TNFα、IL-6、IL-8、IL-10含量無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：1.再灌注后6h內(nèi)進行HBO治療對大鼠局灶性腦缺血損傷具有神經(jīng)保護效應(yīng)。2.MEM對大鼠局灶性腦缺血損傷有神經(jīng)保護效應(yīng)，且該效應(yīng)具有劑量依賴性。3.HBO聯(lián)合MEM治療可將HBO治療時間窗延長至再灌注后12h并將MEM的治療劑量從20mg/kg降低到5mg/kg。4.HBO治療和MEM治療均能抑制腦缺血后血腦屏