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文檔簡介
1、該文首先采用剛果紅染色從瑞氏木霉cDNA文庫中分離得到一株具有CMCase活性陽性克隆,測序結果顯示該基因所編碼的蛋白質為瑞氏木霉內切葡聚糖酶Ⅲ(EndoglucanaseⅢ,EGⅢ).然后利用PCR方法從瑞氏木霉cDNA文庫中擴增出內切葡聚糖酶I(EndoglucanaseI,EGI)全長因因并克隆到釀酒酵母非整合型表達載體,pAJ401上,轉化到釀酒酵母中表達出具有活性的EGI酶蛋白.檢測了釀酒酵母蛋白質分泌系統(tǒng)組分SSO2和SEB
2、1對EGⅢ分泌的影響.該文利用重組PCR技術將包含編碼內切葡聚糖酶Ⅲ信號肽、纖維素結合結構域和鏈接區(qū)的基因片段與編碼內切葡聚糖酶I催化結構域的基因片段重組為雜合酶基因,轉入釀酒酵母中表達出活性蛋白.與其親本相比,雜合酶對纖維素的吸附及降解能力都顯著降低.建立了雙層平板篩選由定向進化方法產生的瑞氏木霉內切葡聚糖酶Ⅲ突變體文庫的方法,根據水解圈在平板上形成的速度判斷酶活高低.利用定向進化方法隨機突變溫纖維素酶瑞氏木霉EGⅢ的基因,得到了一株
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