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1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文適冷海洋細(xì)菌Pseudoalteromonas sp.MB-1內(nèi)切葡聚糖酶基因的克隆和表達(dá)姓名:游銀偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):微生物學(xué)指導(dǎo)教師:汪天虹20040401適冷海洋細(xì)菌P s e u d o a l t e r o m o n a ss p .M B —l 內(nèi)切葡聚糖酶基因的克隆和表達(dá)摘要海洋適冷微生物生活在自然界的低溫環(huán)境中( O ℃或接近0 ℃) ,歷經(jīng)長(zhǎng)期的環(huán)境適應(yīng)( 高壓、高鹽、低溫、低營(yíng)養(yǎng)、低光照
2、等) ,具有特殊的遺傳和代謝特性。自海洋微生物中分離得到的酶等生物活性物質(zhì),結(jié)構(gòu)新穎,功能獨(dú)特,是陸地生物所不具有的,其中占主導(dǎo)地位的海洋細(xì)菌所產(chǎn)的生物活性物質(zhì)種類最為豐富。長(zhǎng)期生活在低溫環(huán)境中的海洋微生物所產(chǎn)的酶大多數(shù)具有低溫催化和對(duì)熱不穩(wěn)定的特征,這些酶的最適反應(yīng)溫度在3 0 。C 左右并且在低溫下( 0 ℃一4 “ C ) 仍保持高比例的活性,因此稱為低溫酶。纖維素酶在釀酒、飼料、食品加工工業(yè)中有著廣泛的用途,研究開發(fā)適冷海洋細(xì)菌
3、的低溫纖維素酶,既有理論意義,也有一定的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)室從黃海的深海海底泥樣中篩選出一株產(chǎn)纖維素酶的革蘭氏陰性的桿菌M B 一1 ,它的最適生長(zhǎng)溫度為2 0 。C ,最高生長(zhǎng)溫度為4 0 ℃,在O “ C 也能生長(zhǎng),因此是典型的適冷菌。該菌所產(chǎn)的內(nèi)切B 一1 ,4 - 葡聚糖酶的最適反應(yīng)溫度為3 5 。C ,在1 0 “ ( 2 下仍有較高的酶活,屬于適冷酶,最適反應(yīng)p H 值為6 .0 ,屬于酸性酶。細(xì)菌的1 6 Sr D N
4、A 序列具有兩端保守,中間可變的特點(diǎn),根據(jù)可變區(qū)可對(duì)其進(jìn)行分類鑒定,利用1 6 Sr D N A 序列鑒定細(xì)菌已經(jīng)成為一個(gè)廣泛而有效的方法。本文克隆和分析了海洋細(xì)菌M B 一1 的1 6 S r D N A 序列,將其鑒定為交替假單胞菌( P s o u d o a ] t e r o m o H 8 s ) ,命名為P s e u d o a ] t e r o m o n a ss p .M B —l ,同時(shí)對(duì)P s e u d o
5、 a ] t e F o M o n s ss p .M B 一1 的1 6 Sr D N A序列進(jìn)行了系統(tǒng)發(fā)育樹分析。交替假單胞菌屬是1 9 9 5 年根據(jù)1 6 Sr D N A 序列的特點(diǎn)從交替單胞菌屬( A ] t e z ' 。m o n a s ) 中分離出來(lái)的一個(gè)屬,目前對(duì)它的研究還不多,因此,對(duì)P s e u d o a ] t e r o m o n a ss o .M B 一1 做進(jìn)一步的研究是很有意義的。采
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