海洋細(xì)菌paenibacillussp.bme14內(nèi)切葡聚糖酶和甘露聚糖酶基因的克隆、表達(dá)與酶學(xué)分析

1、分類 號(hào) 密級(jí) 無華 中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文海 洋細(xì) 菌 P a e n i ba c i l l uss P .B M E 一 1 4 內(nèi)切 葡聚糖 酶 和 甘露聚糖酶基 因的克 隆、表達(dá) 與酶 學(xué)分析C lo n in g ， ex P re ssio na n dc h a r a ete r iz a tio no fe n d o g lu e a n a sea n dm a n n a n a sefr o mth em

2、a rin eb a cte riu mPa en ib a eillu ssP .B M E 一 1 4研 究 生 : 傅 曉瑜指 導(dǎo) 教 師 : 劉 子鐸 教授指 導(dǎo) 小 組 : 劉 子鐸 教授洪玉枝 副教授專 業(yè) : 生物 化 學(xué) 與 分 子 生物 學(xué)獲 得 學(xué)位 名 稱 : 理 學(xué) 碩 士研 究 方 向: 酶 分 子 工程獲 得 學(xué)位 時(shí) 間 : 2009 年 6 月華 中農(nóng)業(yè) 大學(xué) 生命 科 學(xué)與技術(shù) 學(xué) 院二 0 0 九 年

3、 六 月海洋細(xì)菌 尸 aeni bacil u: sP.B M E 一 14 內(nèi)切葡聚糖酶和甘露聚糖酶基 因的克隆、表達(dá)與酶學(xué)分析目 錄摘 要 . …， ……， 二 ， …… ， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

4、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …… IA b stra ct.....................……， ............................................................................................…… 111縮 略 語 表 . . . .

5、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . .

6、……V1 前 言. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …… ，

7、 . . . . . . . . . . . . . ……11. 1 纖維 素 半纖維 素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

8、. . . . . . . . ……11. 2 纖 維 素 酶 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . .

9、. ……， ……31. 2.1 纖 維 素 酶 的來 源 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……31. 2. 2 纖維 素酶 的結(jié)構(gòu) .

10、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……41， 2. 3 纖維 素酶基 因 的克 隆 與表 達(dá) . . . . . . . . . . .

11、. . . ……， . . . . ……， 二 ， ， ， . ……， . . …， ……， . . ……， ， ， 二 61. 2. 4 纖維 素酶 的應(yīng) 用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

12、 . . . . . . . . ……， . . …71. 3 甘 露聚糖酶 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …… ， . . . . . . . . . . . . ……， …， . . …

13、 …81. 3.1 甘 露聚糖 酶 的來 源 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……81. 3. 2 甘露聚糖酶 的特性 . . . . . . .

14、. . . . . …… ， . . …， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……91. 3. 3 甘露聚糖酶 的應(yīng)用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

15、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …… ， . . . . . . . . . . . . . ……n1. 4 本研 究 目的和意 義 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

16、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……122 材 料和 方 法 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

17、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……132. 1 材 料 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …… ， . . . . . . . . . . . .

18、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……132. 1. 1 菌株 與質(zhì)粒 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

19、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……132.1. 2 試 劑 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

20、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……132. 1. 3 培養(yǎng) 基 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

21、. . . . . . . . . . . . . . . . . . ……132. 1. 4 溶 液 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

22、. . . . . . . . ……132 . 2 方 法 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . ， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

23、. . . . . . . . . . . . ……巧2. 2. 1 內(nèi)切 葡 聚糖 酶 ，甘 露 聚糖 酶 活性 菌株 的篩選 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……巧2 . 2 . 2 基 因 組 D N A 的 提 取 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

24、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……巧2. 2. 3 菌 株 鑒 定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

25、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . …巧2. 2. 4 堿 裂 解 法 抽 提 質(zhì) 粒 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

26、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……162. 2. 5 大 腸 桿 菌 電轉(zhuǎn) 感 受 態(tài) 的制 備 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……162. 2. 6 基 因組 文 庫(kù) 的建 立 . . . .

27、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……162. 2. 7 陽性 克 隆 的 篩 選 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .