米曲霉內(nèi)切葡聚糖酶基因(AoEGLAI)在畢赤酵母中的表達(dá)研究及其酶學(xué)特性分析.pdf

1、上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文上 海 海 洋 大 學(xué)碩 士 學(xué) 位 論 文題 目： 題 目：米曲霉內(nèi)切葡聚糖酶基因（ 米曲霉內(nèi)切葡聚糖酶基因（AoEGLAI）在畢赤酵母中的表達(dá)研究及其酶學(xué)特性分析）在畢赤酵母中的表達(dá)研究及其酶學(xué)特性分析英文題目： 英文題目：Expression and Characterization ofrecombinant endo-β-1,4-glucanase fromAspergillus oryzae in P

2、ichia pastoris專 業(yè)： 專 業(yè)： 生物學(xué) 生物學(xué)研究方向： 研究方向： 生物化學(xué)與分子生物學(xué) 生物化學(xué)與分子生物學(xué)姓 名： 姓 名： 何永梅 何永梅指導(dǎo)教師： 指導(dǎo)教師： 彭日荷 研究員 姚泉洪 研究員 彭日荷 研究員 姚泉洪 研究員學(xué) 校 代 碼 ： 10264研究生學(xué)號： M120209516上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文I米曲霉葡聚糖酶基因（ 米曲霉葡聚糖酶基因（AoEGLAI）在畢赤酵母中的表達(dá)研究及其酶學(xué)特性分析摘 要

3、）在畢赤酵母中的表達(dá)研究及其酶學(xué)特性分析摘 要纖維素是生物界極其重要的一類碳水化合物,伴隨著不可再生資源如煤炭、石油等的日漸枯竭,對可再生資源纖維素的降解和利用逐漸地受到人們的重視。在自然界的生物體，如細(xì)菌、真菌、動(dòng)物體內(nèi)，都存在纖維素酶，它是一類復(fù)合酶的統(tǒng)稱,包括內(nèi)切葡聚糖酶(Endo-1,4-β-D-glucanase),外切葡聚糖酶(Exo-1,4-β-D-glucannase)和β-葡萄糖苷酶(β-1,4-glucosidase

4、)。 其中， 內(nèi)切葡聚糖酶隨機(jī)切割纖維素多糖鏈內(nèi)部的β-1,4-糖苷鍵， 通過與外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶的協(xié)同作用，水解大分子纖維素為葡萄糖并最終轉(zhuǎn)化成乙醇，可用于食品、紡織、造紙、飼料、中藥成分提取等眾多領(lǐng)域，在釀酒、石油開采等方面及生物能源工業(yè)都有很好的應(yīng)用。然而，由于天然微生物產(chǎn)生的纖維素酶活力不夠高,且生產(chǎn)成本也較高，所以通過基因工程手段來提高纖維素酶活性，已成為一個(gè)可以有效降低纖維素酶生產(chǎn)成本的途徑。巴斯德畢赤酵母(Pic

5、hia pastoris)作為甲基營養(yǎng)型酵母的一種， 它能夠在以甲醇作為唯一碳源和能源的培養(yǎng)基上進(jìn)行生長。 巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)表達(dá)系統(tǒng)也是一種最為常用的甲基營養(yǎng)型酵母表達(dá)系統(tǒng)，它有著優(yōu)于其他表達(dá)系統(tǒng)的一些特點(diǎn): 例如它可以經(jīng)外源蛋白進(jìn)行翻譯后修飾、其自身分泌的背景蛋白較少，糖基化程度比較低，易于增加基因拷貝數(shù)目，它對營養(yǎng)的要求較低，可以采用廉價(jià)的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng), 也可以進(jìn)行細(xì)胞高密度發(fā)酵等。這些優(yōu)點(diǎn)為內(nèi)切葡

6、聚糖酶的工業(yè)化生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)，同時(shí)，作為一種在現(xiàn)代分子生物學(xué)研究中極其重要的模型, 巴斯德畢赤酵母越來越受到研究學(xué)者的關(guān)注。近年來， 隨著微生物食品生物工程技術(shù)的不斷發(fā)展， 米曲霉(Aspergillus oryzae)作為發(fā)酵工業(yè)和食品加工業(yè)的重要菌種， 日益成為研究熱點(diǎn)。 2005年， 米曲霉RIB40(ATCC42149)的基因組測序工作由日本幾家科研機(jī)構(gòu)聯(lián)合部分企業(yè)共同完成， 該菌株是研究米曲霉生理調(diào)控的模式菌株，測序結(jié)果表明米