煙曲霉殼聚糖酶基因的克隆與畢赤酵母表達.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩50頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

1、為了實現(xiàn)殼聚糖酶產(chǎn)業(yè)化的目的，本研究希望構建一種穩(wěn)定、高效表達的工程菌。 本研究在比較傳統(tǒng)提取總RNA方法的基礎上針對煙曲霉 (Aspergillusfumigatus)的一些特點獲得一種改進的提取總RNA的新方法，并利用這種方法從已知的產(chǎn)酶菌中提取了高質(zhì)量的總RNA。根據(jù)酶蛋白N端測序的結果結合Getaebank中發(fā)布的殼聚糖酶基因序列設計出一對引物T<,3>、T<,4>，以提得的煙曲霉總RNA為模板利用RT-PCR的手段成功

2、調(diào)取殼聚糖酶的基因。為了使以后的純化簡單點，本項研究采用了畢赤酵母分泌表達系統(tǒng)作為酶的表達生產(chǎn)工具。用限制性內(nèi)切酶Not Ⅰ及Avr Ⅱ雙酶切目的基因及空載體pPIC9K，用連接酶將兩者連接構建重組載體。將構建的載體pPIC9K-Csn克隆進大腸桿菌DH5 α進行陽性克隆子的挑選和測序。將測序正確的重組載體用sal Ⅰ線性化，經(jīng)去磷酸化后電轉(zhuǎn)化入宿主菌GS115，通過重組，帶有目的基因的載體被整合到宿主菌的染色體。然后用MD平板及酵落P

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論