菊花高頻再生體系建立及根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化.pdf

1、菊花(Dendranthemamorifolium)是多年來經(jīng)過人工培育和天然種間雜交而來，高度雜合及多倍化和種下變異機(jī)制是菊花品種豐富性的來源。菊花的品種多，葉、花型、瓣型變化很大，是色、香、姿、韻俱佳的我國傳統(tǒng)名花，與梅、蘭、竹共稱為“花卉四君子”，菊花不僅受國人的珍惜和推崇，而且也受到世界各國的關(guān)注和喜愛。多年來常規(guī)育種方法在菊花育種中已經(jīng)取得巨大成就，但其存在著不能利用其它物種基因資源的局限性。隨著菊花遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立發(fā)展、外

2、源基因在細(xì)胞中的表達(dá)、轉(zhuǎn)化方法的進(jìn)步等，定向修飾它的某些目標(biāo)性狀并保留原有性狀，使其在花色、花期、花型、抗性等方面都得到了極大的改觀和發(fā)展。由于國內(nèi)外菊花品種分類標(biāo)準(zhǔn)存在的差異，國外文獻(xiàn)報(bào)道的一些菊花品種的遺傳轉(zhuǎn)化的體系并不適合我國的一些傳統(tǒng)菊花品種，因此研究適合我國菊花品種的遺傳轉(zhuǎn)化體系有十分重要的意義。 本研究以菊花(Dendranthemamorifolium)‘黃冠’、‘久米榮’、‘山城之光’、‘冬桔’四個(gè)品種為試驗(yàn)材料

3、，利用9種分化培養(yǎng)基，研究了不同基因型，不同激素濃度配比，預(yù)培養(yǎng)時(shí)間，不同外植體類型對(duì)菊花愈傷組織誘導(dǎo)、不定芽發(fā)生的影響。優(yōu)化了菊花的再生條件，獲得了菊花葉片的高效再生體系。結(jié)果表明葉片最適分化培養(yǎng)基分別為：‘黃冠’MS+6BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L；‘久米榮’MS+6BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L；‘山城之光’MS+6BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L；‘冬桔’MS+6BA2.0mg/L+NAA0.2mg

4、/L。比較四個(gè)品種的再生能力，發(fā)現(xiàn)‘黃冠’，‘久米榮’相當(dāng)，最高再生率能達(dá)到100.0﹪，‘山城之光’為95.9﹪，‘冬桔’最差為90.6﹪。 在建立了四個(gè)菊花品種高頻再生體系的基礎(chǔ)上，利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化研究。比較了四個(gè)菊花品種分別在被三種的農(nóng)桿菌侵染后的轉(zhuǎn)化效率差異。將供試的四個(gè)菊花品種分別確定了卡那霉素選擇壓力，頭孢霉素濃度，菌液濃度，侵染時(shí)間，共培養(yǎng)時(shí)間，延遲篩選時(shí)間，不同農(nóng)桿菌菌株的影響，生根篩選

5、濃度等因素，得出四個(gè)菊花品種‘黃冠’、‘冬桔’、‘山城之光’、‘久米榮’的卡那霉素選擇壓力分別為20mg/L，30mg/L，30mg/L，40mg/L；頭孢濃度確定為100mg/L；菌液濃度OD600=0.5；侵染時(shí)間為20min；共培養(yǎng)時(shí)間為2天；延遲篩選時(shí)間為4天；生根篩選濃度為1/2MS+15mg/LKM。通過以上因素的確定，得出了品種黃冠在被三種根癌農(nóng)桿菌菌株侵染后能獲得最大再生率，品種山城之光最差。農(nóng)桿菌菌株LBA4404對(duì)四