電針調(diào)控下丘腦SIRT1-NF-κB信號通路改善ZDF大鼠胰島素抵抗的機制研究.pdf

1、目的：
　　盡早對胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)進(jìn)行干預(yù)不僅是治療2型糖尿病的關(guān)鍵，對預(yù)防高血壓、代謝綜合征及相關(guān)心血管疾病同樣具有重要意義。在前期研究的基礎(chǔ)上，考慮到胰島素抵抗與機體慢性低水平炎癥狀態(tài)的密切相關(guān)性，基于 SIRT1/NF-κB在炎癥調(diào)節(jié)中的重要作用，本實驗以遺傳性胰島素抵抗大鼠-ZDF大鼠為研究對象，研究電針對ZDF大鼠下丘腦SIRT1、乙?；?NF-κB表達(dá)及其下游炎癥因子的影響，探討電針通過調(diào)控中樞炎癥改善胰島素抵抗的分子機

2、制，為臨床運用電針防治胰島素抵抗及其相關(guān)性疾病提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　采用7周齡雄性ZDF大鼠12只，同窩未變異背景對照瘦鼠（Zucker+/?）4只，以隨機數(shù)字表法，將12只ZDF大鼠分為3組：模型對照組、非電針刺激組和電針組，每組4只。4只背景瘦鼠為空白對照組。電針和非電針刺激組，選取足三里、關(guān)元、中脘和豐隆四穴。電針干預(yù)方法：選用0.30×13mm規(guī)格不銹鋼毫針，針刺深度為3-5mm，其中足三里和豐隆直刺，關(guān)元

3、向劍突方向斜刺，中脘向恥骨聯(lián)合方向斜刺。針刺后接通韓式電針儀，強度為1mA，頻率為2Hz，每次通電10分鐘，每周3次，其中足三里和豐隆兩穴為左右交替采用，共治療3周。非電針刺激組進(jìn)針后連接韓式電針儀，但不通電。除對電針組和非電針刺激組大鼠進(jìn)行干預(yù)之外，對空白對照組及模型對照組也在同樣的時間進(jìn)行抓取固定。
　　干預(yù)期間，每周測量并記錄進(jìn)食量、體重、空腹血糖和餐后血糖。干預(yù)結(jié)束后，取血清測hs-CRP水平，取下丘腦組織，采用免疫印跡法

4、檢測SIRT1、乙?；疦F-κB p65及其下游炎性因子TNF-α和IL-6蛋白表達(dá)，免疫熒光雙標(biāo)法測定SIRT1及乙酰化NF-κB p65蛋白在下丘腦共表達(dá)情況，并采用實時熒光定量PCR測定SIRT1、TNF-α和IL-6的基因表達(dá)水平，并對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.電針對ZDF大鼠胰島素抵抗進(jìn)食量、體重、血糖及血清hs-CRP的影響
　　第0周時，模型對照組、非電針刺激組及電針組大鼠進(jìn)食量無明顯差異

5、（P＞0.05），而空白對照組進(jìn)食量則明顯少于另外3組（P＜0.01）。第1周時，非電針刺激組和電針組大鼠進(jìn)食量雖少于模型對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。治療2周后，電針組大鼠進(jìn)食量明顯少于模型對照組（P＜0.01），非電針刺激組進(jìn)食量較模型對照組也有所減少（P＜0.05）。治療3周后，電針組和非電針刺激組與模型組相比，進(jìn)食量顯著減少（P＜0.01）。
　　第0周時，模型對照組、非電針刺激組和電針組大鼠體重?zé)o明顯差異，

6、具有可比性，而空白對照組大鼠體重則明顯輕于另外3組（P＜0.01）。治療1周后，非電針刺激組和電針組大鼠體重雖少于模型對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。治療2周后，電針組大鼠體重較模型對照組明顯減少（P＜0.05），非電針刺激組大鼠體重較模型對照組無明顯差異（P＞0.05）。治療3周后，電針組大鼠體重仍顯著小于模型對照組（P＜0.05），而非電針刺激組大鼠體重雖較模型對照組有所減少，但差異缺乏統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

7、>　　第0周時，模型對照組、非電針刺激組和電針組大鼠空腹血糖明顯高于空白對照組（P＜0.05），而前三組大鼠空腹血糖之間無明顯差異（P＞0.05）。第1周和第2周時，各組大鼠空腹血糖均有上升，且空白對照組大鼠空腹血糖明顯低于其他三組（P＜0.01），而其他三組空腹血糖無明顯差異（P＞0.05）。第3周時，電針組大鼠空腹血糖較模型對照組明顯下降（P＜0.05），非電針刺激組大鼠空腹血糖雖有下降，但無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　

8、第0周時，模型對照組、非電針刺激組和電針組大鼠餐后血糖無明顯差異，且空白對照組大鼠餐后血糖明顯低于其他三組（P＜0.01）。治療1周后，非電針刺激組和電針組大鼠餐后血糖雖低于模型對照組，但無顯著性差異（P＞0.05）。治療2周和3周后，非電針刺激組和電針組大鼠餐后血糖明顯低于模型對照組（P＜0.05）。
　　干預(yù)結(jié)束后，與空白對照組比較，模型對照組ZDF大鼠的血清hs-CRP水平明顯升高（P＜0.05），而非電針刺激組和電針組與之

9、相比則無明顯差異；與模型對照組相比，電針組ZDF大鼠血清hs-CRP則明顯降低（P＜0.05）。
　　2.電針對ZDF大鼠下丘腦SIRT1和乙?；疦F-κB p65蛋白表達(dá)水平的影響
　　非電針刺激組和模型對照組大鼠下丘腦 SIRT1蛋白表達(dá)水平明顯低于空白對照組（P＜0.01），而電針組大鼠與空白對照組相比，則無明顯差異（P＞0.05）。
　　與模型對照組相比，空白對照組、非電針刺激組和電針組大鼠下丘腦乙酰化NF-κ

10、B p65蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.01），且空白對照組大鼠乙?；疦F-κB p65表達(dá)水平顯著低于非電針組（P＜0.05），而與電針組大鼠無明顯差異（P＞0.05）。
　　3.電針對ZDF大鼠下丘腦SIRT1和乙?；疦F-κB p65蛋白表達(dá)部位和關(guān)系的影響
　　空白對照組和電針組SIRT1的細(xì)胞個數(shù)多于乙?；疦F-κB p65，而模型對照組和非電針刺激組SIRT1的細(xì)胞個數(shù)則明顯少于乙?；疦F-κB p65。從SIR

11、T1/Ac-NF-κB p65的比值來看，空白對照組和電針組大于1，且空白對照組表達(dá)差異更為明顯，而模型對照組和非電針刺激組比值小于1，且模型對照組表達(dá)差異更小。從高倍鏡下可以觀察到 SIRT1和乙酰化NF-κB p65在下丘腦的表達(dá)較為豐富，且多為核表達(dá)。在部分細(xì)胞內(nèi)存在SIRT1和NF-κB p65共定位，其共定位在細(xì)胞核。
　　4.電針對ZDF大鼠下丘腦SIRT1 mRNA表達(dá)水平的影響
　　與空白對照組比較，模型對照

12、組、非電針刺激組和電針組 SIRT1 mRNA表達(dá)水平較低（P＜0.01），而與模型對照組比較，電針組 SIRT1 mRNA表達(dá)水平則明顯升高（P＜0.01）。
　　5.電針對ZDF大鼠下丘腦TNF-α和IL-6蛋白表達(dá)的影響
　　與空白對照組比較，模型對照組ZDF大鼠TNF-α和IL-6蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.01），而與模型對照組比較，非電針刺激組和電針組大表達(dá)水平則明顯降低（P＜0.01）。
　　6.電針對

13、ZDF大鼠下丘腦TNF-α和IL-6 mRNA表達(dá)水平的影響
　　與空白對照組比較，模型對照組、非電針刺激組和電針組 ZDF大鼠TNF-α和IL-6mRNA表達(dá)水平明顯升高（P＜0.01），而與模型對照組比較，非電針刺激組和電針組大鼠表達(dá)水平雖有所降低，但缺乏統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.電針干預(yù) ZDF大鼠可以起到控制飲食、減輕體重、降低空腹血糖和餐后血糖的作用，且電針和非電針刺激的干預(yù)結(jié)果明顯無

14、差異，提示兩者均可以起到減輕胰島素抵抗的作用。
　　2.電針干預(yù)ZDF大鼠可以顯著降低外周hs-CRP水平，提示電針具有改善機體系統(tǒng)性炎癥的作用。
　　3.電針可以通過上調(diào) ZDF大鼠下丘腦 SIRT1表達(dá)，進(jìn)而去乙?；疦F-κB，起到調(diào)控其下游相關(guān)基因表達(dá)的作用。
　　4.電針可以通過ZDF大鼠下丘腦SIRT1/NF-κB途徑，降低下游炎癥因子TNF-α和IL-6表達(dá)水平，減輕中樞炎癥。
　　5.從電針和非電針