細胞穿膜肽Scp01-b穿膜效率及其介導質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞的實驗研究.pdf

1、目的：
　　細胞穿膜肽(Cell Penetrateing Peptide,CPPs)是一類新式非病毒基因載體。Scp01-b是結(jié)合課題組前期研究成果及最新研究進展設計、合成一種新的細胞穿膜肽。本實驗旨在研究細胞穿膜肽Scp01-b穿膜效率及檢測Scp01-b介導pcDNA3.1-EGFP質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染細胞的效率，為更好地利用Scp01-b這一新型細胞穿膜肽遞送工具提供更多理論支持。
　　方法：
　　(1)從CPPs肽

2、庫中篩選并設計出實驗所用肽序列，分別合成帶有熒光標記的Scp01-b-FITC、NCO-FITC等短肽。將Scp01-b、NCO等與細胞體外共孵育，熒光標記定位分析細胞內(nèi)熒光分布，熒光酶標儀定量分析細胞內(nèi)的熒光量，并檢測Scp01-b在不同條件下細胞內(nèi)熒光量的變化。
　　(2)通過紅細胞裂解實驗、乳酸脫氫酶（LDH）釋放實驗檢測Scp01-b對細胞膜完整性的影響，通過MTT實驗檢測Scp01-b對細胞增殖的影響。
　　(3)

3、按照肽-質(zhì)粒不同的氮-磷比值，使一定量肽與pcDNA3.1-EGFP質(zhì)?；旌喜⑥D(zhuǎn)染細胞，并檢測質(zhì)粒在細胞內(nèi)的表達情況。
　　結(jié)果：
　　(1)不同濃度的Scp01-b均能穿透細胞膜進入細胞內(nèi)部，且分布于胞漿與胞核，細胞內(nèi)熒光量隨著濃度增加而增多。
　?。?）Scp01-b穿膜效率在一定時間范圍內(nèi)（0.5 h-2.0 h），細胞內(nèi)熒光量隨著隨著時間延長而增多。
　?。?）Scp01-b的穿膜作用沒有細胞選擇特異性，

4、且Scp01-b穿膜效率受到多種因素影響，10％DMSO可以明顯提高Scp01-b的穿膜效率，0.6M蔗糖、葡萄糖對Scp01-b的穿膜效率提高不明顯；低溫可以抑制Scp01-b的穿膜效率；Scp01-b的穿膜作用對細胞膜完整性及細胞活性沒有明顯影響。
　　4、血清的存在可以抑制Scp01-b的穿膜效率，CPPs穿膜抑制劑肝素、MβCD可以抑制Scp01-b的穿膜效率，而NaN3、NH4Cl對Scp01-b的穿膜效率抑制不顯著。<