適配體、穿膜肽、聚乙二醇共修飾明膠硅氧烷結(jié)合siRNA轉(zhuǎn)染C6細胞抑制EGFR基因表達的研究.pdf

1、目的:腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見的惡性腫瘤，其預(yù)后差，治療效果不佳，患者平均生存期短一直是世界性難題。近年來，隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展，基因治療廣受醫(yī)學(xué)界的關(guān)注。RNA干擾(RNAi)是目前極具前景的腦膠質(zhì)瘤基因治療手段之一。腦膠質(zhì)瘤基因治療的關(guān)鍵因素之一在于基因載體系統(tǒng)。理想的基因載體系統(tǒng)，應(yīng)具有能夠穿透血腦屏障的能力、較高的基因轉(zhuǎn)染效率、良好的膠質(zhì)瘤細胞靶向性和生物相容性以及較高的穩(wěn)定性和安全性等優(yōu)點。本課題以明膠硅氧烷納米粒子(G

2、S NPs)修飾上親水性聚乙二醇(PEG)，再修飾上具有高特異性靶向腦膠質(zhì)瘤細胞的適配體(TTA1)以及具有強效穿膜能力的穿膜肽(Tat)，設(shè)計成一種新型的基因載體——TTA1-Tat-PEG-GS NPs，結(jié)合上作用于表皮生長因子受體(EGFR)的小干擾RNA(siRNA)轉(zhuǎn)染鼠膠質(zhì)瘤C6細胞，探討其干擾C6細胞EGFR表達的效果。為腦膠質(zhì)瘤基因治療的進一步研究提供理論依據(jù)。
　　方法:1.根據(jù)鼠EGFR的mRNA序列設(shè)計合成s

3、iRNA-EGFR以及陰性對照siRNA-scr（無意義序列）。2.TTA1-Tat-PEG-GS NPs載體通過靜電作用結(jié)合siRNA。實驗分4組，Control組，TTA1-Tat-PEG-GS NPs/siRNA-Scr組，TTA1-Tat-PEG-GS NPs/siRNA-EGFR組及X-tremeGENE/siRNA-EGFR組。除Control組外，其余三組均在體外對C6細胞進行轉(zhuǎn)染。3.利用Real-Time PCR、We

4、stern blot分別檢測細胞EGFR mRNA及蛋白表達情況;CCK-8法檢測細胞增殖情況;流式細胞儀分析細胞凋亡情況。
　　結(jié)果:1.與Control組及 TTA1-Tat-PEG-GS NPs/siRNA-Scr組相比，TTA1-Tat-PEG-GS NPs/siRNA-EGFR組在體外細胞水平上能有效抑制C6細胞EGFR mRNA及蛋白的表達，同時抑制C6細胞的增殖并促進其凋亡。2.與X-tremeGene/siRNA-