Tat及其介導(dǎo)的納米粒子的穿膜機(jī)制研究.pdf

1、Tat多肽來源于HW—1，能介導(dǎo)多種外源性物質(zhì)如基因、蛋白、多肽、化學(xué)合成的納米顆粒性物質(zhì)等進(jìn)入細(xì)胞甚至細(xì)胞核，它是一種很有前途的載體材料，可能成為基因治療和藥物治療的載體。然而迄今為止，有關(guān)Tat及其介導(dǎo)的物質(zhì)的穿膜遞送機(jī)制仍然不清楚。本文首先提取骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)，一方面為研究穿膜機(jī)制提供細(xì)胞，另一方面為提取的干細(xì)胞及其誘導(dǎo)分化奠定基礎(chǔ)；然后探討了Tat及其介導(dǎo)的明膠-硅氧烷、Au—Au2S和Au納米粒子作為潛在的基因和藥

2、物釋放載體在BMSCs和Hela細(xì)胞的穿膜遞送作用。 本文的主要研究結(jié)果如下： 1)密度梯度離心法分離和培養(yǎng)得到了較為純化的兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)，并成功地誘導(dǎo)其分化為成骨細(xì)胞。 2)Tat在＜25μM濃度范圍時(shí)無細(xì)胞毒性；穿膜效率隨濃度的增加而提高，但當(dāng)濃度在10μM時(shí)達(dá)到飽和，無血清培養(yǎng)比有血清培養(yǎng)內(nèi)化效率高，破壞ATP和4℃時(shí)內(nèi)化效率下降；Tat以脂筏介導(dǎo)的巨胞飲方式進(jìn)入BMSCs和Hela細(xì)胞。

3、 3)Tat介導(dǎo)的明膠—硅氧烷納米粒子的穿膜遞送在4℃時(shí)受到抑制并具有ATP依賴性；以脂筏介導(dǎo)的巨胞飲方式進(jìn)入BMSCs，而以clathrin蛋白受體介導(dǎo)的內(nèi)化方式和脂筏介導(dǎo)的巨胞飲兩種途徑進(jìn)入Hela細(xì)胞。 4)Tat介導(dǎo)的近紅外敏感的Au—Au2S納米粒子穿膜遞送在4℃受到抑制并具有ATP依賴性；以clathrin蛋白受體介導(dǎo)的內(nèi)化方式和脂筏介導(dǎo)的巨胞飲兩種途徑進(jìn)入BMSCs，而以脂筏介導(dǎo)的巨胞飲內(nèi)化方式進(jìn)入Hela細(xì)