誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的研究.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的研究姓名：顧文佳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：發(fā)育生物學(xué)指導(dǎo)教師：龐希寧200404012 ．4 采用A f f y m e t r i xM O E 4 3 0 A 小鼠表達(dá)譜芯片進(jìn)行未分化及分化后第4 、1 0 天細(xì)胞基因表達(dá)譜差異的分析。2 ．5 誘導(dǎo)分化前后細(xì)胞端粒酶活性檢測(cè)( T R A P )結(jié) 果1 ．使用序貫誘導(dǎo)法可將E S C s 大比例誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞未分化的E

2、S C s 聚集成團(tuán)狀生長(zhǎng)，細(xì)胞排列緊密，集落邊界清楚，堿性磷酸酶染色呈強(qiáng)陽(yáng)性，胞漿布滿(mǎn)棕黑色顆粒。使用序貫誘導(dǎo)法可將E S C s大比例誘導(dǎo)分化為神經(jīng)樣細(xì)胞，光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)均一、胞體圓亮、突起細(xì)長(zhǎng)。分化細(xì)胞表達(dá)多種神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)志物，免疫熒光示N S E 陽(yáng)性率>8 0 ％，G F A P < 1 ％。2 ．基因芯片檢測(cè)到未分化E S C s 、神經(jīng)干細(xì)胞及成熟神經(jīng)細(xì)胞的相關(guān)基因，并由半定量R T —P C R 證實(shí)基因芯

3、片檢測(cè)未分化細(xì)胞表達(dá)胚胎干細(xì)胞特異基因；誘導(dǎo)后第4 天細(xì)胞高表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞特異性基因；誘導(dǎo)后第1 0 天細(xì)胞高表達(dá)成熟神經(jīng)細(xì)胞特異性基因，且有G A B A 受體、谷氨酸脫羧酶( G A D ) 表達(dá)，說(shuō)明誘導(dǎo)后細(xì)胞大多為G A B A 能神經(jīng)元。膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志基因G F A P 、M b p 未檢測(cè)到，其他胚層的標(biāo)志性基因也沒(méi)有表達(dá)。半定量R T —P C R 亦證實(shí)上述結(jié)果。3 ．端粒酶活性隨分化逐漸下降未分化E S C s 端粒酶活