趨化因子Fractalkine及其受體與冠心病相關(guān)性研究.pdf

1、背景:冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(CAD)是一種多因素共同作用而導(dǎo)致的心血管疾病，在其發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中，炎癥至始至終都起著至關(guān)重要的作用。而在這種炎癥過(guò)程中，又以單核巨噬細(xì)胞在血管壁上的聚集和激活最為關(guān)鍵。它不僅發(fā)生在斑塊形成的早期階段，而且還發(fā)生在斑塊破裂和血栓形成階段，其中趨化因子對(duì)單核巨噬細(xì)胞的遷移和募集起著重要的調(diào)控作用。 趨化因子家族是一系列結(jié)構(gòu)相似、分子量約為8～12KD、具有趨化功能的細(xì)胞因子。根據(jù)半胱氨酸殘基的位置

2、結(jié)構(gòu)及其功能，趨化因子可分為CXC、CC、C和CX3C四個(gè)亞族。其中CX3C亞族僅發(fā)現(xiàn)Fractalkine(FKN)一種趨化因子。與其他趨化因子不同的是它的存在形式有兩種：可溶性和膜結(jié)合型。CX3CR1是人FKN特異的、高親和力的受體，主要表達(dá)在單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞上。FKN具有不同于其他趨化因子的特性，它主要通過(guò)與其特異性受體CX3CR1相結(jié)合來(lái)發(fā)揮趨化及整合素非依賴性粘附作用。最近，在連鎖不平衡分析中發(fā)現(xiàn)CX3CR1基因

3、突變點(diǎn)：V249I和T280M。FKN在同種器官移植的研究中再現(xiàn)了其前炎性細(xì)胞因子的特點(diǎn)，小鼠心臟移植物發(fā)生排斥時(shí)可見(jiàn)FKN表達(dá)升高，以抗CX3CR1抗體處理明顯延長(zhǎng)心臟移植物的存活期。有研究表明FKN通過(guò)加強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞和單核細(xì)胞的粘附，參與了血管損傷。其在動(dòng)脈粥樣硬化和血管損傷中的過(guò)度表達(dá)與血小板活化及粘附密切相關(guān)，因而FKN可能促進(jìn)血栓形成。通過(guò)對(duì)剔除了CX3CR1 基因的老鼠研究發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞在血管壁的聚集明顯減少，從而使粥樣斑塊病變

4、明顯減輕，這進(jìn)一步表明FKN在動(dòng)脈粥樣硬化病變過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。還有研究發(fā)現(xiàn)白色人種CX3CR1等位基因工249可降低冠心病的發(fā)病危險(xiǎn)以及改善內(nèi)皮依賴性血管舒張，而日本人群缺血性腦血管疾病的危險(xiǎn)性增高與CX3CR1的基因多態(tài)性沒(méi)有關(guān)聯(lián)，因此研究我國(guó)漢族人群CX3CR1的基因多態(tài)性及其蛋白的表達(dá)情況與冠心病的關(guān)系有其重要意義。 目的：通過(guò)研究趨化因子FKN受體CX3CR1基因多態(tài)性在冠心病病人中的表達(dá)情況，分析不同基因型CX3

5、CR1蛋白的表達(dá)，以及FKN的血清濃度，來(lái)探討趨化因子FKN及其受體CX3CR1與冠心病的關(guān)系，從而為進(jìn)一步確定冠心病的重要遺傳因素以及治療提供依據(jù)。 方法:2005-2006 年度在我院心內(nèi)科住院確診為冠心病病人326例，健康對(duì)照組310例，祖籍湖南，均為漢族。冠心病診斷符合1979年WHO 診斷標(biāo)準(zhǔn)。需排除器官移植、HIV感染、腎臟疾病、其他炎癥性疾病、腫瘤、創(chuàng)傷或手術(shù)兩周內(nèi)、嚴(yán)重肝腎功能不全、腦血管意外一月內(nèi)、免疫系統(tǒng)疾病

6、以及服用免疫調(diào)節(jié)藥物的患者、入院前一周服用他汀藥物者。 取外周血，提DNA，用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)測(cè)其基因型。其中130例行冠狀動(dòng)脈造影檢查，冠脈病變組90例，健康對(duì)照組40例，取外周血，分離單核細(xì)胞，提膜蛋白用免疫印跡(western blot)法測(cè)其蛋白表達(dá)量。另外，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)其血清FNK的表達(dá)水平。 結(jié)果: 1.冠心病組與對(duì)照組比較CX3CR1基因V249I多態(tài)的基因頻率分布有顯

7、著性差異 (P<0.05)，冠心病組I等位基因頻率(0.160)明顯低于對(duì)照組(0.261)，OR值為0.522，95％可信區(qū)間為0.375～0.727。而基因T280M多態(tài)的基因頻率分布冠心病組M等位基因(0.112)亦低于對(duì)照組(0.148)，但兩組差異無(wú)顯著性(P>0.05)。 2.穩(wěn)定型心絞痛組和急性冠脈綜合征組CX3CR1蛋白條帶的相對(duì)光密度值均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，急性冠脈綜合征組與穩(wěn)定型心絞痛組相比高的更

8、明顯(P<0.05)，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.冠心病組和對(duì)照組中基因型為Ⅵ-Ⅱ的其CX3CR1蛋白表達(dá)都要低于基因型為VV的，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 4.穩(wěn)定型心絞痛組和急性冠脈綜合征組血清sFractalkine均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，急性冠脈綜合征組與穩(wěn)定型心絞痛組相比高的更明顯(P<0.05)，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論: 1.冠心病組等位基因I249基因頻率明顯低于對(duì)照組，提示等位