簡介：徐佳奶牛乳腺炎葡萄球菌種類、毒力基因及抗性基因與耐藥性的調(diào)查分析奶牛乳腺炎葡萄球菌種類、毒力基因及抗性基因與耐藥性的調(diào)查分析博士研究生徐佳導(dǎo)師孫懷昌摘要乳腺炎是制約世界奶牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的最重要疾病之一。奶牛乳腺炎的病原微生物種類繁多，但以葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌為主，其中金黃色葡萄球菌是接觸傳染性病原菌，而且具有公共衛(wèi)生意義；凝固酶陰性葡萄球菌COAGULASENEGATIVESTAPHYLOCOCCI，CNS有20多種，已成為許多國家奶牛乳腺炎的主要病原菌，但不同國家流行的CNS種類不同。葡萄球菌毒力基因多達(dá)數(shù)十種，但具體的致病作用知之甚少。奶牛乳腺炎主要靠加強飼養(yǎng)管理和使用抗菌藥物進(jìn)行控制，但隨著抗生素的長期、盲目使用，細(xì)菌耐藥現(xiàn)象日益嚴(yán)重。國內(nèi)對奶牛乳腺炎葡萄球菌的系統(tǒng)研究較少，本研究對乳腺炎葡萄球菌的種類、毒力基因、抗性基因及其與耐藥表型的關(guān)系進(jìn)行了系統(tǒng)的調(diào)查分析，旨在為奶牛乳腺炎葡萄球菌致病與耐藥機制的深入研究奠定基礎(chǔ)。一、奶牛乳腺炎葡萄球菌的分離與種類鑒定根據(jù)臨床檢查和乳汁體細(xì)胞檢測結(jié)果，在2012年6月到2014年6月期間采集乳腺炎陽性奶樣209份，接種血瓊脂平板培養(yǎng)后挑取疑似菌落，根據(jù)菌落形態(tài)和革蘭氏染色鏡檢結(jié)果，篩選到104份葡萄球菌感染陽性奶樣。在分離的104株葡萄球菌中，所有菌株均為過氧化氫酶試驗陽性，29株279％為耐熱核酸酶試驗陽性，27株260％為凝固酶試驗陽性，24株231％為耐熱核酸酶基因檢測陽性，28株269％為凝固酶基因檢測陽性。綜合上述結(jié)果，將28株269％初步鑒定為金黃色葡萄球菌，76株731％鑒定為CNS。用PCR擴增葡萄球菌蛋白翻譯TU延伸因子ELONGATIONTUFACTORTUF和16SRRNA基因片段并進(jìn)行序列測定，以同源性298％為種的區(qū)分標(biāo)準(zhǔn)，將28株確認(rèn)為金黃色葡萄球菌，76株CNS分為13個種，其中阿爾萊特葡萄球菌1SARLETTAE、松鼠葡萄球菌＆SCIURI、木糖葡萄球菌SXYLOSUS和產(chǎn)色葡萄球菌SCHROMOGENES為優(yōu)勢CNS，分別占158％；表皮葡萄球菌SEPIDERMIDIS、模仿葡萄球菌SSIMULANS、馬胃葡萄球菌＆EQUORUM、溶血性葡萄球菌SHAEMOLYTICUS和沃氏葡萄球菌SWARNERI次之，豬葡萄球菌＆HYICUS、腐生葡萄球菌SSAPROPHYTICUS、琥珀葡萄球菌＆SUCCINUS和蒼蠅葡萄球菌SMUSCAE為次要CNS，各占13％。這些研究結(jié)果表明，葡萄球菌是徐佳奶牛乳腺炎葡萄球菌種類、毒力基因及抗性基因與耐藥性的調(diào)查分析3菌株攜帶多個抗性基因組合，其中表皮葡萄球菌的抗性基因組合最多。藥敏試驗分析結(jié)果顯示在28株金黃色葡萄球菌中，100％對兩種或以上抗生素耐藥；821％對青霉素耐藥，與BLAZ基因密切相關(guān)464％對鏈霉素耐藥，與AACAAPHD、AAC6／APH2’，或未知基因相關(guān)；357％對卡那霉素和妥布霉素耐藥，321％對慶大霉素耐藥，與AACAAPHD或AAC6／APH2’，基因相關(guān)；321％對頭孢西丁耐藥，主要與B腳MECA基因相關(guān)；143％對紅霉素耐藥，與ERMC或未知基因相關(guān)；107％對四環(huán)素耐藥，與紀(jì)敝或未知基因相關(guān)。在76株CNS中，794％對兩種或以上抗生素耐藥；868％對青霉素耐藥，與BLAZ或未知基因相關(guān)；487％對紅霉素耐藥，與ERM、聊盯或未知基因相關(guān)；461％對鏈霉素耐藥，276％對卡那霉素耐藥，132％對慶大霉素耐藥，118％對妥布霉素耐藥，與AACAAPHD、AAC6／APH27’或未知基因相關(guān)；395％對四環(huán)素耐藥，與TETG基因密切相關(guān)；303％對克林霉素耐藥，與ERMB、ERMC、LINA或未知基因相關(guān)；276％對頭孢西丁耐藥，與MECA、6堿未知基因相關(guān)。這些研究結(jié)果表明，本研究的葡萄球菌B腳MECA基因檢出率均顯著高于國內(nèi)外報道，可能與該奶牛場長期使用青霉素進(jìn)行乳腺炎防治和場內(nèi)耐藥菌株循環(huán)傳播有關(guān)。部分抗生素抗性與未知基因相關(guān)，提示葡萄球菌耐藥機制的復(fù)雜性。關(guān)鍵詞奶牛乳腺炎；葡萄球菌；種類毒力基因；抗性基因

簡介：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包括其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包括為獲得我?；蚱渌逃龣C構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學(xué)位論文與資料若有不實之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名筮歪』蠹日期篷2竺笪絲內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本入完全了解內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱。學(xué)校可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容保密內(nèi)容除外，采用影印、縮印或其他手段保存論文?！撐淖髡吆灻c型童指導(dǎo)教師簽名≤垂星薹蘭曼羅EL期叢蟹多上，／摘要本研究分別采用兩種試驗動物，研究不同日糧模式對泌乳奶山羊及奶牛的乳成分，乳及動靜脈血中脂肪酸濃度以及乳腺中乳脂肪酸代謝的影響和機理。主要研究結(jié)果如下1試驗采用8只安裝有陰外動脈及腹部皮下靜脈血插管的經(jīng)產(chǎn)泌乳關(guān)中奶山羊BW456425KG，DIM90士12D，試驗設(shè)計為22交叉試驗設(shè)計。試驗動物飼喂同種精料不同粗料，精粗比同為4060。每期實驗持續(xù)三周，于每個實驗期的最后3D采樣，分別采集乳樣、陰外動脈EPA及乳腺靜脈SAV血樣進(jìn)行脂肪酸分析。最后一天采集乳腺活體組織進(jìn)行脂肪合成關(guān)鍵酶MRNA表達(dá)量的測定。試驗結(jié)果表明，混合粗飼料處理組MF組的乳脂率高于秸稈處理組CS組分別為304％和284％；P001，但乳脂的日產(chǎn)量沒有差異分別為153G／D和L45G／D。與CS組相比，MF組中乳腺對于長鏈脂肪酸L6C的萃取率有提高的趨勢分別為350％和330％，P016。但脂肪酸濃度及組成在陰外動脈血和乳腺靜脈血中兩組間無差異。然而，MF組乳中的飽和脂肪酸所占比例717％較之CS組734％有降低的趨勢P015，而不飽和脂肪酸所占比例MF組相對CS組有升高的趨勢分別為2829％和2659％，P015，這對于乳中脂肪酸的組成朝著更合理及對于人體更健康的方向可能有著積極的作用。與CS組相比，MF組中無論是陰外動脈中還是乳腺靜脈中的總脂肪酸濃度都有升高的趨勢，特別是CL80和C182C6在乳腺靜脈血漿中的濃度都有可能達(dá)到顯著的趨勢分別為P012；P011。飼喂MF組日糧的奶山羊乳腺中FASN、ACACA、LPL和SCD的MRNA基因表達(dá)量分別升高了20％、18％、39％和50％，LPL和SCD的MRNA基因表達(dá)量在兩組之間產(chǎn)生了顯著性差異。結(jié)果表明優(yōu)質(zhì)粗飼料MF組可以提高泌乳奶山羊乳脂含量、產(chǎn)量已經(jīng)乳脂合成相關(guān)基因表達(dá)。2試驗選用9頭經(jīng)產(chǎn)23胎的泌乳荷斯坦奶牛，BW6L7421；DIM120420，采用33拉丁方試驗設(shè)計，日糧設(shè)計為兩組粗料均為秸稈，精料不同但精粗比均為6040的日糧分別稱之為CSA和CSB，另一組飼料為混合粗料，精粗比為4060MF。每期試驗為2L天適應(yīng)期和7天樣品采集期，血液分別采集尾動脈，陰外動脈及乳靜脈血進(jìn)行脂肪酸濃度分析。試驗結(jié)果為飼喂三組日糧的奶牛在乳產(chǎn)量及乳組成沒有顯著區(qū)別，MF組的產(chǎn)乳效率顯著高于CSA和CSB組。動脈和靜脈血漿中長鏈脂肪酸和總脂肪酸濃度MF組均顯著高于CSA和CSB組，特別是MF組的C183N3

簡介：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文奶牛泌乳曲線模型及昆明小鼠乳腺細(xì)胞凋亡與泌乳相關(guān)酶表達(dá)的研究姓名聶向飛申請學(xué)位級別碩士專業(yè)動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)指導(dǎo)教師王中華20090616山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文主要試驗結(jié)果為高脂肪日糧處理顯著降低了小鼠生產(chǎn)性能PO05。關(guān)鍵詞泌乳曲線；生產(chǎn)記錄間隔；擬合效果；日糧；血清激素；MRNA表達(dá)量

簡介：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌基因工程蛋白的純化及其免疫原性研究姓名張海燕申請學(xué)位級別碩士專業(yè)臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師馬衛(wèi)明20090616奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌基因工程蛋白的純化及其免疫原性研究純化及活性檢測金黃色葡萄球菌毒素基因流行情況的調(diào)查報道顯示，金黃色葡萄球菌分泌的儀一溶血素和凝固酶能協(xié)同作用引發(fā)小鼠乳腺炎。其分泌的黏附素能識別細(xì)胞表面組分并與之結(jié)合，促使細(xì)菌粘附到細(xì)胞表面，從而定居和繁殖。這兩種毒素在金黃色葡萄球菌感染及致病的過程中具有重要作用。本試驗將成功表達(dá)的0C一溶血素和黏附素蛋白從表達(dá)宿主菌株中通過凝膠過濾層析法分離純化出來并檢測其生物學(xué)活性。試驗三奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌僻溶血素基因工程疫苗的制備及實驗室免疫效力評價以小白鼠為試驗?zāi)Ｐ?，檢測金黃色葡萄球菌曠溶血素基因工程蛋白亞單位疫苗的抗體效價和免疫保護(hù)力，初步評價此亞單位疫苗的免疫效力。我們建立了ELISA方法測定抗體效價，并且通過攻毒得出疫苗免疫保護(hù)力。所有試驗小鼠在首免一周后采集的血清中都檢測到了特異性抗體，抗體效價呈逐漸上升趨勢，達(dá)最高值后逐漸降低，由此可見蛋白疫苗作用機體產(chǎn)生的抗體水平符合抗體消長規(guī)律。試驗四奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌FNBPA基因工程疫苗的制備及實驗室免疫效力評價以小白鼠為試驗?zāi)Ｐ停瑱z測金黃色葡萄球菌FNBPA基因工程蛋白亞單位疫苗的抗體效價水平和免疫保護(hù)力。培養(yǎng)MDBK細(xì)胞通過吸附抑制試驗檢測蛋白活性，建立ELISA方法檢測被免疫的小鼠血清中抗體效價，并且通過腹腔攻毒得出疫苗免疫保護(hù)得到力。結(jié)果細(xì)菌黏附抑制試驗發(fā)現(xiàn)被目的蛋白預(yù)處理過的MDBK細(xì)胞周圍的金黃色葡萄球菌數(shù)量明顯減少，差異顯著所有試驗小鼠在首免一周后采集的血清中都檢測到了特異性抗體，而抗體效價開始時呈逐漸上升趨勢，達(dá)最高值后隨時間延長逐漸降低，蛋白疫苗作用機體產(chǎn)生的抗體水平符合抗體消長規(guī)律且表現(xiàn)了良好的免疫保護(hù)力。關(guān)鍵詞金黃色葡萄球菌；乳腺炎；僅溶血素；FNBPA；分離純化；基因工程亞單位疫苗；免疫效力2

簡介：分類號R7343密級公開UDC610編號20171410510104220142014級攻讀臨床醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位研究生畢業(yè)論文級攻讀臨床醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位研究生畢業(yè)論文青海地區(qū)青海地區(qū)乳腺浸潤性導(dǎo)管乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中癌中BCL2、BAX基因的基因的表達(dá)及臨床意義表達(dá)及臨床意義EXPRESSIONCLINICALSIGNIFICANCEOFBCL2BAXOFBREASTINVASIVEDUCTALCARCINOMAINQINGHAI指導(dǎo)教師祁玉娟祁玉娟主任醫(yī)師主任醫(yī)師學(xué)生姓名劉五甲劉五甲學(xué)科專業(yè)名稱學(xué)科專業(yè)名稱內(nèi)科學(xué)（腫瘤病學(xué)）內(nèi)科學(xué)（腫瘤病學(xué)）研究方向惡性腫瘤內(nèi)科治療惡性腫瘤內(nèi)科治療學(xué)院學(xué)院系、部系、部醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)院二零一七年五月獨創(chuàng)性聲明獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名日期2017年06月02日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定本人授權(quán)青海大學(xué)可以將本學(xué)位論文的內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索并釆用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本論文。同意學(xué)校向國家有關(guān)機構(gòu)及部門遞送復(fù)印件及電子版，并編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫。本論文屬于請在相對應(yīng)的方框內(nèi)打“√”1保密□在年解密后適用本授權(quán)書。2不保密作者簽名導(dǎo)師簽名日期2017年06月02日日期2017年06月02日

簡介：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文優(yōu)得樂對金黃色葡萄球菌和無乳鏈球菌混合感染小鼠乳腺炎的治療作用姓名王娜娜申請學(xué)位級別碩士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師王家鑫20090607THERAPEUTICEFFECTSOFYOUDELEONMASTITISCAUSEDBYSTAPHYLOCOCCUSAUREUSGROUPBSTREPTOCOCCUSINMOUSEMODELAUTHWANGNANASUPERVISPROFESSWANGJIAXINMAJPREVENTATIVEVETERINARYMEDICINEABSTRACTASTRAINOFSTAPHYLOCOCCUSAUREUSGROUPBSTREPTOCOCCUSWEREISOLATEDFROMTHEMILKOFDAIRYCOWSSUFFERINGFROMCLINICALMASTITISLACTATINGMICEWERECHALLENGEDBYINOCULATIONOFSTAPHYLOCOCCUSAUREUSGROUPBSTREPTOCOCCUSSUSPENSIONTHROUGHTHETEATCANALTODEVELOPMASTITISMODELTHEIMMUNERESPONSEOFMAMMARYGLSTRIGGEREDBYSTAPHYLOCOCCUSAUREUSGROUPBSTREPTOCOCCUSINFECTIONTHEEFFECTOFYOUDELEONMASTITISWERESTUDIEDTHROUGHCFUCOUNTSHISTOLOGICALHISTOCHEMICALIMMUNOHISTOCHEMICALTECHNIQUESELISATHERESULTSOFTHISSTUDYPROVIDEDANEWIDEAWAYTOSTUDYNATURALMEDICINETOTREATBOVINEMASTITISTHERESULTSSHOWTHATAPEAKOFCOLONIZATIONINMAMMARYGLS766013LGCFUGMAMMARYGLTISSUESWASOBSERVEDAT24HAFTERCHALLENGETHEBACTERIALNUMBERDECREASEDAFTER24HTHESTEATOSISWASINVESTIGATEDAT12HPOSTCHALLENGEPATHOLOGYOFMAMMARYGLSBECAMEMESERIOUSWITHTHEDEVELOPMENTOFMAMMARYINFECTIONMOUSEMASTITISMODELWASDEVELOPEDAT24HAFTERINOCULATIONOFBACTERIAITWASCLEARLYSHOWNTHATNEUTROPHILSHEAVILYOCCUPIEDTHEDILATEDALVEOLITHEINTERLOBULARBLOODVESSELSWEREACTERISTICOFCONGESTIONTHEEPITHELIALCELLSOFSOMEALVEOLIDISPLAYEDMARKEDLYNECROTICFEATUREASIGNIFICANTINCREASEP001INTHENUMBEROFMASTCELLSDEGRANULATEDMASTCELLSWASDETECTEDINMAMMARYGLSOFTHEMODELMICECOMPAREDTOTHECONTROLMICEATTHEINDICATEDTIMEPOINTSTHENUMBEROFMASTCELLSDEGRANULATEDMASTCELLSINCREASEDWITHTHEPROGRESSOFINFECTIONTHEPOSITIVESTAININGINTENSITYOFBOTHINDUCIBLENOSYNTHASEINOS3NITROTYNOSINE3NTINCREASEDWITHTHEPROGRESSOFINFECTIONHADASIGNIFICANTDIFFERENCECOMPAREDTOTHECONTROLGROUPAT48HPOSTCHALLANGETHECONTENTSOFTNFΑIFNΓINMAMMARYGLSOFTHEMODELGROUPREACHEDTHEMAXLMUMAT6HPOSTCHALLANGEDECREASEDATTHEMININUM36HPOSTCHALLANGEBOTHOFTHEMINCREASEDAT48HPOSTCHALLANGEREACHEDTHEMAXLMUMAT72HPOSTCHALLANGEDEGRADEDATTHELASTTIMETHECONTENTOFIL4CREASEDTHEMAXLMUMAT24HDEGRADEDTHEMININUMAT36HPOSTCHALLANGEITREACHEDTHEMAXLMUMAT48HPOSTCHALLANGESECONDTIMEINCREASEDATTHELASTTIMEASIGNIFICANTDECREASEP005INTHENUMBEROFBACTERIAWASDETECTEDINMAMMARYGLSOFTHETREATEDGROUPMICECOMPAREDTOTHEMODELGROUPMICEAT12H5D

簡介：西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文豬傳染性胃腸炎病毒S基因乳腺特異性真核表達(dá)載體構(gòu)建的研究姓名彭樹英申請學(xué)位級別碩士專業(yè)臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師張涌20040601豬傳染性胃腸炎病毒5基因乳腺特異性真核表達(dá)載體構(gòu)建的研究CONSTRUCTIONOFSWINESTRANSMISSIBLEGASTROENTERITISVIRUSSGENEMAMMALIANGLANDSPECIALEUKARYOTICEXPRESSINGPLASMIDPOSTGRADUATEPENGSHUYINGSUPERVISORPROFZHANGYONGCOLLEGEOFANIMALSCIENCEANDTECHNOLOGYNORTHWESTSCITECHUNIVERSITYOFAGRICULTUREANDFORESTRYYANGLINGSHAANXICHINAP凡712100ABSTRACTTRANSMISSIBLEGASTROENTERITISTGEWHICHISAKINDOFACUTE，HIGHLYINFECTIOUSDISEASEWASCAUSED勿TRANSMISSIBLEGASTROENTERITISVIRUSOFSWINETGEVBELONGSTOTHEFAMILYCORONAVIRIDAEITSTYPICALLYCLINICALMANIFESTATIONSCONSISTOFOMITTINGSEVEREDIARRHEAANDLOSSWATERALLKINDSANDAGESOFPIGSCANBEINFECTEDPARTICULARTHEMORTALITYNEWBORNPIGLETSMAYREACH100CURRENTLYVACCINATIONISTHEEFECTIVEMEANSFORTHEPREVENTIONOFTGETRADITIONALVACCINEINCLUDESATENUATEDANDINACTIVEVACCINEHOWEVERTHEYHAVEMANYDEFICIENCIESSUCHASRECOVERYOFVIRULENCEDISSEMINATIONOFVIRULENCENEEDFORADJUVANTETCTHEREFOREITISURGENTFORPREVENTINGFUNDAMENTALLYTGETOEXPLOITASAFEANDEFECTIVEGENETICVACCINEINTHISSTUDY，TAKINGTHESAFE，EFECTIVEANDLOWCOSTPROSPECTOFMAMMARYGLANDBIOREACTORPRODUCINGMEDICALPROTEINASTHESTARTINGPOINTTHEEUKARYOTICEXPRESSINGPLASMIDORGENEVACCINEOFTGEVWASCONSTRUCTEDBYTGEVANTIGENSPIKEPROTEINGENEANDTHEGENERALGLANDEXPRESSINGVECTORCONTAININGBETACASEINPROTEINPROMOTER1ACCORDINGTOSPIKEPROTEINSGENESEQUENCEOFTRANSMISSIBLEGASTROENTERITISVIRUSOFSWINETGEVINGENEBANK5PRIMERSWEREDESIGNEDTOAMPLIFYCDNASEQUENCEOFSGENE飾RTPCRFROMENTERITISTISSUETHEPRODUCTSOFPCRWERENAMED2127BYS1AND2450BYS2RESPECTIVELYTHEYWEREINTEGRATEDINTOPN4DL8TVECTORRECOMBINANTPLASMIDPMDS1ANDPMDS2WERETESTEDBYRESTRICTENDONUCLEASEREANDSEQUENCINGTHESEQUENCINGRESULTINDICATEDTHATTHESEQUENCEHOMOLOGYCOMPARINGWITHCORRESPONDINGSEQUENCINGOFDIFERENTSTRAINSARE94ORSOTHESEQUENCINGOF4496BYSGENEWASAMPLIFIEDBYRECOMBINANTPCRITSTEMPLATEWASTHEMIXTUREOFSLANDS2ITSPRIMERSWERE5FLANKINGOFS2FRAGMENTAND5FLANKINGOFS1FRAGMENTSGENEWASCLONEDINTOPGEMTEASYVECTORANDNAMEDPGEMSTHERESULTAFIRMEDTHATRECOMBINANTPLASMIDCONTAININGSGENEWASIDENTIFIEDBYREANDPCR2APAIROFPRIMERTS1‘ANDTA2WASDESIGNEDACCORDINGTOMULTIPLECLONINGSITESOF

簡介：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文王不留行、黃芪對奶牛乳腺上皮細(xì)胞體外增殖與分泌功能影響的研究姓名丁月云申請學(xué)位級別博士專業(yè)動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)指導(dǎo)教師王恬20080601博士學(xué)位論文王不留行、黃芪對奶牛乳腺上皮細(xì)胞體外增殖與分泌功能影響的研究期的轉(zhuǎn)換完成的4王不留行與黃芪對奶牛乳腺上皮細(xì)胞體外分泌性能的影響本試驗研究了中草藥黃芪、王不留行對奶牛乳腺上皮細(xì)胞體外分泌性能的影響。以23代奶牛乳腺上皮細(xì)胞CMEC為試驗?zāi)Ｐ?，研究中草藥黃芪、王不留行作用前后細(xì)胞內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)的變化、細(xì)胞裂解液中氨基酸總濃度及組分的變化規(guī)律，以及細(xì)胞裂解液中蛋白總濃度的變化試驗結(jié)果表明，與空白對照組相比，王不留行10MG／ML、黃芪20MG／ML、王不留行與黃芪配伍10MG／ML20MG／ML作周于細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)發(fā)生了重塑，表現(xiàn)出更多功能分泌分化的特征標(biāo)志；細(xì)胞裂解液中氨基酸的總濃度均得到提高P005；結(jié)果提示，中草藥黃芪、王不留行可通過對乳腺細(xì)胞內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)的重塑、促進(jìn)乳腺細(xì)胞吸收胞外游離氨基酸，使乳腺細(xì)胞蛋白合成增多。5王不留行與黃芪對奶牛乳腺上皮細(xì)胞合成乳鐵蛋白和酪蛋白的影響本試驗以23代奶牛乳腺上皮細(xì)胞CMEC為試驗?zāi)Ｐ停瑧?yīng)用熒光定量RTPCR技術(shù)研究了中草藥王不留行、黃芪對乳腺細(xì)胞ASL酪蛋白、13酪蛋白和乳鐵蛋白基因表達(dá)的影響；應(yīng)用ELISA競爭抑制性法檢測，王不留行、黃芪作用前后乳腺細(xì)胞裂解液中ASL酪蛋白、B酪蛋白和乳鐵蛋白含量的變化。試驗結(jié)果表明，與空白對照組相比，王不留行黃芪配伍10MG／ML20MG／ML、王不留行10MG／ML均極顯著提高ASL酪蛋白MRNA的表達(dá)P005；王不留行黃芪配伍10MG／ML20MG／RNL、王不留行10MG／ML均顯著提高B酪蛋白MRNA的表達(dá)P005；王不留行黃芪配伍10MG／ML20MG／ML濕著提高乳鐵蛋白MRNA的表達(dá)P005。ASL酪蛋白合成量的檢測結(jié)果表明，黃芪20MG／ML王不留行10MG／ML配伍作用效果較明顯，其組內(nèi)乳腺細(xì)胞ASL酪蛋白合成量顯著高于空白對照P005。B酪蛋白合成量的檢測結(jié)果表明，黃芪20MG／ML王不留行10MG／ML配伍組和王不留行10MG／ML組細(xì)胞B酪蛋白合成量顯著高于空白對照組P00511

簡介：石河子大學(xué)博士學(xué)位論文奶山羊乳腺消減文庫構(gòu)建及差異表達(dá)基因的研究姓名孫杰申請學(xué)位級別博士專業(yè)動物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師李大全羅軍20090401依賴的蛋白激酶磷酸化位點，凝集因子VLSPR重復(fù)位點；SPARC是一種小分子的糖蛋白，結(jié)構(gòu)域N端274286處含有EFHAND鈣結(jié)合位點，可能與乳腺中鈣的代謝有關(guān)；GHITM是一種跨膜蛋白，有8個強跨膜區(qū)域，推測該基因可能與乳成分的跨膜轉(zhuǎn)運有關(guān)；SSAT是細(xì)胞內(nèi)維持代謝平衡的關(guān)鍵酶，有1個GCN5乙酰胺基轉(zhuǎn)移酶功能域與SSAT的催化作用密切相關(guān)。3、以13ACTIN為內(nèi)標(biāo)，采用實時定量PCR技術(shù)測定西農(nóng)薩能奶山羊在一個泌乳周期泌乳初期、盛期、中期、后期、末期和干奶期中PPARGCLA、OPN、SPARC、GHITM和SSAT基因的表達(dá)豐度變化規(guī)律，結(jié)果表明PPARGCLA和SSAT基因的變化趨勢與泌乳曲線基本一致，推測它們是乳腺泌乳周期性變化的調(diào)節(jié)因子；OPN在泌乳初期的表達(dá)豐度相對值最高，依次是泌乳后期、末期、盛期、中期和干奶期，其中泌乳初期相對表達(dá)水平約為末期高39倍左右，進(jìn)一步說明，在妊娠后期OPN基因就開始表達(dá)，OPN基因可能在乳成分變化中發(fā)揮重要的生理功能；SPARC在泌乳初期的表達(dá)豐度相對值最高，隨后一直下降，在干奶期表達(dá)量最低；D刪在泌乳初期的表達(dá)豐度相對值最高，依次是泌乳后期、盛期、末期和干奶期表達(dá)量最低。4、構(gòu)建OPN基因真核表達(dá)重組質(zhì)粒PCDNA31／MYCHIS一AOPN，與空質(zhì)粒同時轉(zhuǎn)染MCF一7細(xì)胞，利用MTT試驗檢測OPN基因?qū)CF7細(xì)胞生長的影響，結(jié)果表明轉(zhuǎn)染PCDNA31。OPN細(xì)胞比轉(zhuǎn)染PCDNA31細(xì)胞和對照細(xì)胞組活性明顯升高，細(xì)胞的生長速度明顯加快P005，且轉(zhuǎn)染目的基因組PCDNA31OPN的細(xì)胞增殖率為1114％，高于未轉(zhuǎn)染目的基因組PCDNA31的1013％，說明OPN基因的表達(dá)對MCF7細(xì)胞的增殖具有促進(jìn)作用。關(guān)鍵詞奶山羊；乳腺；抑制性消減雜交；差異表達(dá)基因IL

簡介：璺J關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個人或集體，均在文中明確說明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留和按要求向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文，同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，并向社會公眾提供信息服務(wù)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。論文作者簽名為、形丸辮導(dǎo)師簽名必勿竿’日期趔歷／Y縮寫ACCAPL●BETAJCAMPDEPCDEXDMEMEE2FASGGHHIGF．IIGFBP5INSPIUPRLRSTAT5II“4一TG符號說明英文名稱ACETYLCOACARBOXYLASEACTIVATORPROTEIN1BETAMETHASONECYCLICADENOSINEMONOPHOSPHATEDIETHYPYROCARBONATEDEXAMETHASONEDULBECCOMINIMUMESSENTIALMEDIUMESTROGENESTRADIOLFATTYACIDSYNTHASEGLUCOCORTICOIDGROWTHHORMONEHYDROCORTISONEINSULINLIKEGROWTHFACTORIINSULINLIKEGROWTHFACTORBINDINGPROTEIN5INSULINPROLACTINPROLACTINRECEPTORI1LILLIIILLL11111IIIY2116896中文名稱乙酰輔酶A羧化酶激活蛋白L倍他米松環(huán)腺苷酸焦碳酸二乙酯地塞米松培養(yǎng)基雌激素雌二醇脂肪酸合成酶糖皮質(zhì)激素生長激素0氫化可的松胰島素樣生長因子I．胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白5胰島素催乳素催乳素受體SIGNALTRANSDUCERSANDACTIVATORSOFTRANSCRIPTION5信號轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子5THYROXINE甲狀腺素TRIGLYCERIDE甘油三酯

簡介：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文奶牛乳腺上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)及應(yīng)用姓名王治國申請學(xué)位級別碩士專業(yè)動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)指導(dǎo)教師王加啟20070601ABSTRACTBASEDONOPTIMIZEDCULTUREOFBOVINEMAMMARYEPITHELIALCELLSSMEC3，EXPERIMENTSWERECONDUCTEDTOINVESTIGATETHEEFFECTS011THEGROWTHOFBMEC,THEAECMNULATIONOFLIPIDDROPLETSINCYTOSOL，BIOSYNTHESISOFFATTYACIDANDGENEEXPRESSIONOFELLZYME,WITHFREEFATTYACIDINCLUDINGPALMIFIATE,STCMINTE,OLDATCANDLINOLEINTEJNCELTURESOLUTION．RESEARCHINGTHEEFFECTSOFTHEINVITROCULTUREFORBOVINEMAMMARYEPITHELIALCELLSBMECWITHDIFFERENTMETHODTO∞P{IRA塢CULTUREANDPURIFY．THERESULTSSHOWEDTHATTHELARGENUMBERSOFBMECCOULDBESEPARATEDFROMMAMMARYTISSUEINOCULATIONANDD／GESTEDWIM0．25％IRYPSINAGEAND100U／MLHYALURONIDASEFOR3HAT37℃．BMECGROWEDWELLINDMEMCULTURESOLUTIONWITH10％FETALCALFSENNA,100UG／MLANTIBIOTICS,EPITHELIALGROWTHFACTOREGF10NG／ML，INSULIN0．5UG／ML，HYDROCORTISONETUG／ML，TRANSFERRINGSUG／ML，GTUTAMINEO．3MG／MLANDPREGNENDIONETUG／ML．THETIGHTMICROSCOPESTRUCTUREINDICATEDTHATTHEREWEIEDIFFERENTTYPECELLINVITRO,ANDMOSTOFTHEMW∞POLYGON,THECELLSCONNECTEDWILHEACHOTHERPROPERLY,THEBOUNDARYOFTHECELLSWASCLEAR,BUTPARTOFTHEIRBOUNDARYWASNOTCLEAR．USINGTHEWESTERNBLOTTINGTECHNIQUETODETECTTHEBETACASEINPROTEINSECRETIONBYBMECINVITRO，WHICH鋤IDENTIFYTHENORMALPHYSIOLOGICALFUNCTIONOFBMEC；GARYOTYPEANALYSISIDENTIFYTHENUMBERANDFIGUREOFCHGOLNOSOMEOFBMECCULTUREDINVITRO．THERESULTSSHOWEDCONTAININGBETACASEINPROTEININCULTUREMEDIUMOFBOVINEMAMMARYEPITHELIALCELLSINVITROINDICATEDTHATTHEMMMARYEPITHELIALCELISWITHNORMALPHYSIOLOGICALCONDITION；THENUMBEROFCHROMOSOMESWASNOLMAL，ITWAS60，ANDTHEKARYOTYPEAGREEDWILHTHEMAMMALIANCHROMOSOMEMAP．INDICATEDTHATTHECELLLINEINVITROCULTURECONDITIONSHADNOTNANSFORMATEDWEEXAMINEDTHEEFFECTS011THEGROWTHOFBMEC，THEACCUMULATIONOFLIPIDDROPLETSINCYTOSOLANDTHEEXPRESSIONOFMRNAFORACC、FAS、FAT／CD36ANDSCD，WITHFREEFATTYACIDINCLUDINGPALMITIATE,STENRIATE,OLEIATEANDIINOLDATEINACONCENTRATIONDEPENDENTMCRFROM100TO400UMADDITIONTOTHEMEDIUMBATHINGBⅣ疃C．THERESULTSSHOWEDTHATPALMITIATE,STEARINTE．OLEISTEANDLINOLDATEINHIBITEDTHECELLGROWTH．WHICHWASPOSITIVELYCORRELATEDINTHECONTENTA8WELL∞THESATURATIONLEVELOFFA；LIPIDDROPLETSFORMATIONWORESIGNIFICANTLYINCREASEDBYTHEADDITIONOFOLCISTEANDLINOLDATE；ACCANDSC33MRNAEXPRESSIONWAGINHIBITEDBYPALMITINM，STEARIATE,OLEIATEANDLINOLEIATE,BUTFAS，F(xiàn)AT／CD36INRNAEXPRESSION硼INCREASED．KEYWORDBOVINEEPITHELIALCELLSINVITROCULTUREFREEFATTYACID

簡介：POLYMORPHISMSOFGIYCAM1GENEANDITSRELATIONSHIPWITHMASTITISINCATTLESTHESISSUBMITTEDTOQINGDAOAGRICULTURALUNIVERSITYINFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTFORTHEDEGREEOFMASTEROFAGRONOMYLIJINGDEPARTMENTOFANIMALSCIENCEANDTECHNOLOGYSUPERVISORPROF．LIUNANQINGDAO．CHINAJUNE,0093．3中國荷斯坦牛、魯西黃牛、渤海黑牛GIYCAMI基因多態(tài)性分析????????????．．333．4中國荷斯坦牛GIYCAML基因多態(tài)性與乳腺炎相關(guān)性分析???????????????．．344．討論??????????????????????????．?????????????．374．1單核苷酸多態(tài)性SNP???????．．?????????????????????。374．2卿CAML基因的多態(tài)性??????????????????????????????．．384．3群體多態(tài)信息含量、群體雜合度??????????????????????????384．4HARDYWEINBERG平衡狀態(tài)分析???????????????????????????394．5GIYCAMI基因與中國荷斯坦牛乳腺炎關(guān)聯(lián)性的分析??????????????????．394．6PCI礦增及PCRSSCP的注意事項??????????????????????????395結(jié)論????????????????????????????????????????41參考文獻(xiàn)??????????????????????????????????????42

簡介：西南大學(xué)碩士學(xué)位論文一種新的乳腺癌細(xì)胞粘附分子LSECTIN的功能研究姓名曹紅梅申請學(xué)位級別碩士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師劉力賀福初20090601『撕南人學(xué)碩卜’產(chǎn)伊論文摘硬只有組成型外顯子的CD44為標(biāo)準(zhǔn)犁CD44CD44S或CD441T。由組成型外顯子和變異區(qū)V區(qū)拼接的外顯子二者組成的為CD44變異犁。1C一型凝集素以及LSECTIN的家族成員在腫瘤發(fā)生中發(fā)揮作用2LSECTIN在T細(xì)胞上的配體分子為CD44；3CD44與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。鑒丁二以上幾點，本論文的研究目的闡明LSECTIN是否結(jié)合乳腺癌細(xì)胞；鑒定LSECTIN在乳腺癌細(xì)胞表面的配體分子；確定LSECTIN乳腺癌細(xì)胞上識別配體分子特異的糖結(jié)構(gòu)。方法我們采用RTPCR和免疫組化檢測LSECTIN的組織分布，采用流式細(xì)胞儀分析FCLSECTIN重組蛋白是否結(jié)合乳腺癌細(xì)胞，通過WESTERNBLOTTING結(jié)合流式分析乳腺癌細(xì)胞表面CD44的表達(dá)以及CD44抗體封閉實驗鑒定LSECTIN乳腺癌細(xì)胞表面上識別的候選配體分子。進(jìn)而采用特異的ELISA實驗確證LSECTIN與乳腺癌細(xì)胞表面分子CD44的相互作用。在此基礎(chǔ)上，我們用突變體結(jié)合實驗明確LSECTIN與乳腺癌細(xì)胞表面分子CD44的相互作用模式。結(jié)果本研究揭示LSECTIN能結(jié)合高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞MDAMB231、MDAIDB435S和MCF一7，進(jìn)一步證實了LSECTIN是一個腫瘤細(xì)胞粘附分子WESTERNBLOTTING結(jié)合流式分析以及CD44抗體封閉實驗初步證明CD44為乳腺癌細(xì)胞上LSECTIN識別的候選配體分子；ELISA實驗確證LSECTIN在乳腺癌細(xì)胞上的配體分子為CD44S；突變體蛋白結(jié)合實驗結(jié)果證明LSECTIN和乳腺癌細(xì)胞表面分子CD44之間通過蛋白一糖鏈相互作用。結(jié)論LSECTIN是一種新的腫瘤細(xì)胞粘附分子，可通過蛋白一糖鏈模式識別高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞MDAMB一23L、MDAMB一435S和MCF一7上的配體分子CD44，很可能在乳腺癌的轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。關(guān)鍵詞LSECTIN細(xì)胞識別乳腺癌細(xì)胞CD44II

簡介：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文奶牛乳腺上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)及TNFΑ對其凋亡影響的研究姓名吳娟申請學(xué)位級別碩士專業(yè)基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師王鳳龍20090401PRIMARYCULTUREOFBOVINEMAMMARYEPITHELIALCELLSANDEFFECTSOFTNFCTONAPOPTOSISOFBOVINEMAMMARYEPITHELIALCELLSABSTRACTCELLAPOPTOSISISANAUTONOMICORDEREDPROGRAMMEDCELLDEATHINORDERTOMAINTAINHOMEOSTASIS，WHICHISCONTROLLEDBYSERIALGENESMANYFACTORSCANINDUCEAPOPTOSIS，TUMORNECROSISFACTORINDUCEDAPOPTOSISOFCELLSTHROUGHDEATHRECEPTORPATHWAYWHICHWEREDIVIDEDINTOTNFAANDN盯13，THEFORMERWASCOMEFROMMONOCYTEMAEROPHAGES，THELATERWASFROMACTIVATEDTCELLSBUTTHEEFFECTSOFTNFAONAPOPTOSISOFBOVINEMAMMARYEPITHELIALCELLSHAVENOTBEENSEENBOTHHOMEANDABROADTHEREWERETHREEKINDSOFMETHODWASUSEDINTHISEXPERIMENT，BOVINEMAMMARYEPITHELIALCELLSWERECULTUREDBYTISSUEBLOCKMETHODANDSINGLECELLISOLATIONMETHOD，ANDWEREPROVEDBYGIEMSASTAININGANDMONOCLONALANTICYTOKERATIN18ANTIBODYIMMUNOHISTOCHEMISTRYPURIFIEDANDPRIMARYEPITHELIALCEILSTAKEN2LSANIMALMODELTOSTUDYTHEEFFECTSOFTNFAONAPOPTOSISMAMMARYEPITHELIALCELLSWEREEXPOSEDTODIFFERENTCONCENTRATIONSANDDIFFERERTTIMEOFN町F噸，COLORIMETRICMETHODWASUSEDTOMEASURECASPASE一3ACTIVITIESNERATIOOFDNAFRAGMENTSTOTHETOTALOFDNADETECTEDBYDIPHENYLAMINEMETHODANDFLOWCYTOMETRYWEREPERFORMEDTOCONFIRMCELLAPOPTOSIS，CELLMORPHOLOGICALANALYSISBYGIEMSASTAININGRESULTSINDICATEDTHATMAMMARYEPITHELIALCELLSAPOPTOSISINDUCEDBYTNFAANDSHOWEDDOSEDEPENDENCE，CELLAPOPTOSISINDIFFERENTPHASESISCLOSELYBOUNDUP晰廿LTIMETNFACOULDINDUCEACTIVITIESOFCASPASE3，THISSTEPMAYBECOMMITTEDSTEPIN1NFAONAPOPTOSISOFBOVINEMAMMARYEPITHELIALCELLS，ANDCASPASE3ACTIVITIESHAPPENEDBEFOREAPOPTOSISCHANGESINBIOCHEMISTRYMAMMARYEPITHELIALCELLSEARLYAPOPTOTICRATETHATOCCURREDMAINLYAT24HOURS，THELATEAPOPTOSISANDNECROSISCELLSRATEOCCURREDMAINLYAT48HOURSAND72HOURS，BUTALLCELLSAPOPTOTICANDNECROSISRATEINCREASED、航T11TIMEAFTER24HOUR111ERATIOOFDNAFRAGMENTSREDUCEDAT6HGROUPBUTGRADUALLYINCREASEDAFTER也她WASTIMEDEPENDENTTHESAMEASA11CELLSAPOPTOTICANDNECROSISRATESOMECELLSAPPEAREDTYPICALAPOPTOSISTYPEBYGIEMSASTAININGNLEEXPERIMENTALPROVIDEDTHECREDIBLETHEORETICALBASISANDTHEBENEFICIALEXPERIMENTBASISFORSTUDYINGTHEPATHOGENESISOFMAMMITISFROMCELLSSIDEANDFINDTHEEFFECTIVEPREVENTIVETHERAPYFORMAMMITISKEYWORDSMAMMARYEPITHELIALCELLS；TUMORNECROSISFACTORADIRECTEDBYPROFWANGFEN西ONG

簡介：揚州大學(xué)碩士學(xué)位論文常用內(nèi)參基因在小鼠乳腺、肝臟、小腸組織中表達(dá)穩(wěn)定性比較姓名董曉麗申請學(xué)位級別碩士專業(yè)動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)指導(dǎo)教師王加啟趙國琦20090501確定了內(nèi)參叢I‘大JSDHA和HPRTL適合用?！啃Ｕ齷I標(biāo)基兇的表達(dá)節(jié)，為研究幼齡小鼠小腸組織基|大L表達(dá)奠定基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞實時定量PCR；內(nèi)參基兇；GENORM樣序；小鼠；乳腺；肝臟；小腸