一種新的乳腺癌細(xì)胞粘附分子LSECtin的功能研究.pdf

1、C—型凝集素超家族是一類能選擇性識別糖并與之非共價(jià)可逆結(jié)合的非酶、非抗體蛋白，其活性依賴Ca2+，在機(jī)體的抗感染、抗腫瘤、抗原提呈、免疫調(diào)節(jié)、移植排斥及炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要功能。LSECtin是一個(gè)新的C—型凝集素家族糖識別分子，特異的表達(dá)在肝臟竇內(nèi)皮細(xì)胞和淋巴結(jié)竇內(nèi)皮細(xì)胞，并在這些細(xì)胞上發(fā)揮特異的功能。LSECtin與已知的C—型凝集素DC—SIGN、DC—SIGNR和CD23具有相似的功能結(jié)構(gòu)域和相似的空間結(jié)構(gòu)排列，具有典型的糖基識

2、別功能結(jié)構(gòu)域(CRO)，依賴鈣離子結(jié)合糖。 腫瘤是生物體內(nèi)一些正常細(xì)胞生長失去控制，出現(xiàn)異常分化的細(xì)胞群。細(xì)胞癌變時(shí)伴有細(xì)胞膜的改變，細(xì)胞膜上的糖基也會產(chǎn)生相應(yīng)的變化，糖基發(fā)生廣泛多樣的變化，成為凝集素在腫瘤研究中的重點(diǎn)。DC—SIGN是DC病原體模式識別和粘附受體，又作為DC特征性多功能免疫分子，參與DC免疫調(diào)節(jié)作用。DC可通過DC—SIGN識別腫瘤癌胚樣抗原(CEACarcinoembryonic—like antigen)

3、特異性糖基，并結(jié)合結(jié)腸腫瘤細(xì)胞參與抗腫瘤的免疫反應(yīng)，同時(shí)腫瘤細(xì)胞也可通過DC—SIGN負(fù)調(diào)節(jié)并抑制DC成熟，從而逃脫機(jī)體的免疫監(jiān)視。已有大量研究發(fā)現(xiàn)，凝集素可作為腫瘤組織源性的標(biāo)記、腫瘤特異性診斷的標(biāo)志、腫瘤惡性的標(biāo)記和不同腫瘤的分化標(biāo)記。LSECtin同家族成員DC—SIGN、DC—SIGNR的生物學(xué)功能研究以及它們在空間結(jié)構(gòu)上的高度相似強(qiáng)烈提示：LSECtin可能在機(jī)體免疫的反應(yīng)中發(fā)揮至關(guān)重要的作用，值得深入研究。 LSE

4、Ctin與活化T細(xì)胞上的CD44相互作用。CD44是參與細(xì)胞一細(xì)胞相互作用、淋巴細(xì)胞歸巢和腫瘤轉(zhuǎn)移的粘附分子，是廣泛表達(dá)于細(xì)胞表面的Ⅰ型跨膜糖蛋白。人類CD44分兩型，只有組成型外顯子的CD44為標(biāo)準(zhǔn)型CD44(CD44s或CD44H)。由組成型外顯子和變異區(qū)(V區(qū))拼接的外顯子二者組成的為CD44變異型。 (1)C—型凝集素以及LSECtin的家族成員在腫瘤發(fā)生中發(fā)揮作用；(2)LSECtin在T細(xì)胞上的配體分子為CD44；(

5、3)CD44與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。鑒于以上幾點(diǎn)，本論文的研究目的：闡明LSECtin是否結(jié)合乳腺癌細(xì)胞；鑒定LSECtin在乳腺癌細(xì)胞表面的配體分子；確定LSECtin乳腺癌細(xì)胞上識別配體分子特異的糖結(jié)構(gòu)。方法：我們采用RT—PCR和免疫組化檢測LSECtin的組織分布，采用流式細(xì)胞儀分析Fc—LSECtin重組蛋白是否結(jié)合乳腺癌細(xì)胞，通過Western Blotting結(jié)合流式分析乳腺癌細(xì)胞表面CD44的表達(dá)以及CD44抗體封閉

6、實(shí)驗(yàn)鑒定LSECtin乳腺癌細(xì)胞表面上識別的候選配體分子。進(jìn)而采用特異的ELISA實(shí)驗(yàn)確證LSECtin與乳腺癌細(xì)胞表面分子CD44的相互作用。在此基礎(chǔ)上，我們用突變體結(jié)合實(shí)驗(yàn)明確LSECtin與乳腺癌細(xì)胞表面分子CD44的相互作用模式。結(jié)果：本研究揭示LSECtin能結(jié)合高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞MDA—MB-231、MDA—MB-435s和MCF-7，進(jìn)一步證實(shí)了LSECtin是一個(gè)腫瘤細(xì)胞粘附分子：Western Blotting結(jié)合流式分

7、析以及CD44抗體封閉實(shí)驗(yàn)初步證明CD44為乳腺癌細(xì)胞上LSECtin識別的候選配體分子；ELISA實(shí)驗(yàn)確證LSECtin在乳腺癌細(xì)胞上的配體分子為CD44s；突變體蛋白結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明LSECtin和乳腺癌細(xì)胞表面分子CD44之間通過蛋白—糖鏈相互作用。結(jié)論：LSECtin是一種新的腫瘤細(xì)胞粘附分子，可通過蛋白—糖鏈模式識別高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞MDA—MB-231、MDA—MB-435s和MCF-7上的配體分子CD44，很可能在乳腺癌的轉(zhuǎn)