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簡介:碩士學(xué)位論文論文題目KISS1基因?qū)θ焉镒甜B(yǎng)細胞生物學(xué)行為影響及其在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中作用機制的研究研究生姓名田冀雯指導(dǎo)教師姓名張弘專業(yè)名稱婦產(chǎn)科學(xué)研究方向生殖內(nèi)分泌論文提交日期2014年3月
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簡介:分類號R71UDC密級重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目TGFΒ1對宮頸癌對宮頸癌SIHA細胞生物學(xué)行為的影響細胞生物學(xué)行為的影響作者姓名毛敏毛敏申請學(xué)位級別碩士學(xué)科、專業(yè)名稱婦產(chǎn)科學(xué)婦產(chǎn)科學(xué)論文答辯年月2015年5月2015年5月指導(dǎo)教師姓名(職稱、單位名稱)胡麗娜胡麗娜教授教授重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文1英漢縮略語名詞對照英漢縮略語名詞對照英文縮寫英文縮寫英文名稱英文名稱中文名稱中文名稱TGFΒ1TRANSFMINGGROWTHFACTΒ1轉(zhuǎn)化生長因子Β1EMTEPITHELIALMESENCHYMALTRANSITION上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化MMP2MATRIXMETALLOPROTEINASE2基質(zhì)金屬蛋白酶2VEGFVULARENDOTHELIALGROWTHFACT血管內(nèi)皮生長因子CFTRCYSTICFIBROSISTRANSMEMBRANECONDUCTANCEREGULAT囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)因子SGFSARCOMAGROWTHFACT肉瘤生長因子PI3KPHOSPHATIDYLINOSITOL3KINASE磷脂酰肌醇3激酶HGFHEPATOCYTEGROWTHFACT肝細胞生長因子IGFINSULINLIKEGROWTHFACT胰島素樣生長因子EGFEPIDERMALGROWTHFACT表皮生長因子TSP1THROMBOSPONDIN1凝血酶敏感蛋白1PBSPHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖液RPMI1640ROSWELLPARKMEMIALINSTITUTERPMI1640培養(yǎng)基BSABOVINESERUMALBUMIN牛血清白蛋白KCLKCL氯化鉀NAOHNAOH氫氧化鈉DMSODIMETHYLSULPHOXIDE二甲基亞砜ECMEXTRACELLULARMATRIX細胞外基質(zhì)
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簡介:鄭州大學(xué)博士學(xué)位論文APP轉(zhuǎn)基因小鼠神經(jīng)干細胞的生物學(xué)特性及人參皂苷RB1的治療作用研究姓名李國棟申請學(xué)位級別博士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師邢瑩20090501鄭州大學(xué)2009年博士研究生論文摘要PRECURSORPROTEIN,APP基因,通過APP蛋白在大腦中過量表達,導(dǎo)致AB產(chǎn)生增加,產(chǎn)生老年斑,從而造成小鼠老年性癡呆轉(zhuǎn)基因模型。該模型為研究APP代謝、AD的發(fā)生和發(fā)展及藥物對發(fā)病進程的干預(yù)提供了良好的研究基礎(chǔ)。抑制A13沉積和TAU蛋白異常磷酸化是治療AD最根本的措施之一。目前AD的傳統(tǒng)治療措施主要采用作用于膽堿能系統(tǒng)的藥物、雌激素、神經(jīng)營養(yǎng)因子、非甾體抗炎藥、抗氧化劑、N.甲基.D.天冬氨酸N.METHYL.D.ASPARTATE,NMDA受體拮抗劑、抗A13藥物、改善腦代謝的藥物等,但對AD均無滿意的效果。我們推測這可能至少有兩方面的原因一是AD的發(fā)病機制尚需進一步的探討,二是需要探索新的治療藥物和治療時機。雖然已有報道表明,乙酰膽堿等神經(jīng)遞質(zhì)的變化在AD的發(fā)病過程中起重要作用、但是中樞眾多的遞質(zhì)改變尚不清楚,尤其是氨基酸類中樞遞質(zhì)和組胺遞質(zhì)在AD中的變化無人研究。因此,本研究首先采用APP轉(zhuǎn)基因小鼠作為研究對象,通過在體內(nèi)外的研究探索APP轉(zhuǎn)基因小鼠在發(fā)育過程中,神經(jīng)細胞的生長發(fā)育特征和中樞氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)、組胺的動態(tài)變化,進一步揭示AD的發(fā)病機制。中藥具有多途徑、多靶點、多層次的整合效應(yīng),結(jié)合現(xiàn)代藥理學(xué)的優(yōu)勢可能為治療AD找到的有效藥物。人參皂苷RBL是人參和西洋參的主要成分之一,具有廣泛的生理活性和藥用價值,具有促智、抗氧化、提高免疫力和增強記憶力等作用,尤其是在改善學(xué)習(xí)記憶能力和保護神經(jīng)方面有很好的作用。本實驗室前期的體外實驗中證實人參皂苷RBL可以改善A1325旬5導(dǎo)致的TAU蛋白過磷酸化,也有一些研究報道了人參皂苷RBL對AB生成、代謝的影響,但所采用的AD模型大多為鋁制劑、半乳糖、A13等誘導(dǎo),不僅不能較好地模擬體內(nèi)病理改變,而且還缺乏系統(tǒng)研究,尤其是對氨基酸類中樞遞質(zhì)和組胺遞質(zhì)的影響未見報道。因此,本研究在APP轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)實驗中,探索了RBL對AD動物行為學(xué)、病理學(xué)和神經(jīng)遞質(zhì)表達的綜合治療作用,以期為AD的治療尋求一條有效的途徑。Ⅱ
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簡介:目的為深入研究絲素蛋白在修復(fù)大鼠皮膚缺損過程中的作用機理,用免疫組織化學(xué)方法分別檢測CD90、’FGFΒ1、ΑSMA、Ⅰ、Ⅲ型膠原在天蠶絲素材料、家蠶絲素材料和海綿材料修復(fù)大鼠皮膚缺損過程中的表達水平,探討材料對主要修復(fù)細胞的影響,分析成纖維細胞CD90表達及其增殖、合成、收縮等功能的相關(guān)性。方法1、雄性SD清潔級大鼠144只,隨機分為3組。A組為天蠶絲素材料組,N48;B組為家蠶絲素材料組,N48;C組為海綿材料組,N48;應(yīng)用3組材料復(fù)合大鼠自體刃厚皮片修復(fù)大鼠背部皮膚缺損(2CM2CM)。分別在術(shù)后5D、10D、15D和25D各組取材,標(biāo)本固定,石蠟包埋,組織切片,HE染色。2、根據(jù)HE染色結(jié)果確定取材部位,每個組織蠟塊中選取1個采樣點,不同時間點分別構(gòu)建4塊組織芯片蠟塊,陣列均為66。每塊芯片包含同一時間點的36點組織標(biāo)本。3、組織芯片行免疫組織化學(xué)染色,檢測CD90、TGFΒ1、ΑSMA、Ⅰ、Ⅲ型膠原在不同時間點各組材料修復(fù)大鼠皮膚缺損過程中的表達水平,將所得結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。4、分析成纖維細胞CD90表達與TGFΒ1ΑSMA、Ⅰ、Ⅲ型膠原4種蛋白表達的相關(guān)性。結(jié)果1、移植術(shù)后A、B兩組復(fù)合皮片生長良好、全部存活;C組移植皮片大部分變黑、結(jié)痂,并有脫落。2、成功構(gòu)建絲素蛋白材料修復(fù)大鼠皮膚缺損實驗的組織芯片,用于免疫組化染色。3、免疫組織化學(xué)染色顯示術(shù)后第10D、15D時A、B兩組CD90陽性成纖維細胞表達較多,25D時有所下降,A、B兩組相比無顯著意義(P005);與C組相比較差異均有顯著意義(P005),兩者與C組相比較均有非常顯著意義(P005),與C組比較有顯著意義(P結(jié)論1、天蠶絲素和家蠶絲素作為真皮支架材料沒有明顯差別,移植后局部炎性反應(yīng)均較輕,具有良好的組織相容性,都可用作真皮缺損的修復(fù)材料。2、組織芯片具有效率高、質(zhì)控好的優(yōu)點,適合多因素比較研究,可用于修復(fù)大鼠真皮缺損的相關(guān)實驗研究。3、絲素蛋白支架材料作為真皮模板早期能誘導(dǎo)創(chuàng)面周圍和基底的成纖維細胞長入,后期可使CD90陽性成纖維細胞降低,可能減少成纖維細胞向肌成纖維細胞分化,減輕瘢痕攣縮。4、實驗結(jié)果提示在絲素蛋白支架材料修復(fù)大鼠真皮缺損中成纖維細胞CD90表達和TGFΒ1、ΑSMA表達具有相關(guān)性,三者之間可能存在一定的協(xié)同關(guān)系。
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簡介:分類號VDC博士學(xué)位論文L738583密級食管鱗癌酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)分析及MYH9SIRNA對食管鱗癌細胞生物學(xué)行為的影響INVESTIGATIONOFTYROSINEPHOSPHORYLATIONPROTEOMICSINHUMANESOPHAGEALSQUAMOUSCANCERANDTHEEFFECTOFMYH9SIRNAONTHEBIOLOGICALBEHAVIOROFESOOHA2EALCANCERCELLLIN,EIIAVLORCANRCELLLINE作者姓名學(xué)科專業(yè)學(xué)院系、所指導(dǎo)教師夏振坤外科學(xué)湘雅二醫(yī)院尹邦良教授答辯委員會主新留繕中南大學(xué)二。一。年五月原創(chuàng)性聲明本人聲明,所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進作及取得的研究成果。盡我所知,除了論文中特別加以標(biāo)地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均己在論文中作了明確的說明。作者簽名墨溘恥日期業(yè)年毒月上日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文,允許學(xué)位論文被查閱和借閱;學(xué)??梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容,可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫,并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。作者簽名蜱導(dǎo)
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簡介:骨髓間充質(zhì)干細胞BONEMESENCHYMALSTEMCELLS,BMSCS是現(xiàn)階段研究廣泛的一種重要的成體干細胞。因其具有良好的生長、分化能力以及向多種細胞分化的潛能,成為研究骨再生工程中重要的種子細胞,它對骨組織缺損的修復(fù)有著良好的效果。但是BMSCS向成骨細胞分化并修復(fù)骨組織缺損是一個復(fù)雜的過程,是由許多細胞外因子共同作用產(chǎn)生的結(jié)果。近年來的研究證實DDR2(DISCOIDINDOMAINRECEPT2)作為I型膠原的特異性受體,在成骨細胞的分化中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。而對于其在BMSCS向成骨細胞的分化過程中所起到的作用還鮮有研究,對其作用機理尚不明確。本實驗通過DDR2基因缺失小鼠BMSCS的分離、培養(yǎng)和鑒定,初步探索DDR2基因缺失對小鼠BMSCS成骨分化能力的影響,為進一步研究BMSCS的成骨分化能力奠定理論基礎(chǔ)。研究內(nèi)容與方法1DDR2基因缺失小鼠BMSCS細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定。2DDR2對于BMSCS細胞特異性分化特性的影響作用。3DDR2基因缺失對于BMSCS增殖、凋亡、分化的調(diào)控作用。4DDR2基因缺失對于BMSCS成骨能力的影響。5DDR2基因缺失對BMSCS在動物體內(nèi)骨組織修復(fù)能力的影響。我們采用了利用改良型全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)DDR2基因缺失小鼠及野生型小鼠的BMSCS,觀察對比兩種細胞形態(tài);流式細胞技術(shù)檢測兩種細胞表面標(biāo)記分子的表達;MTT分析檢測細胞生長周期流式細胞技術(shù)檢測細胞凋亡情況,將兩種細胞進行成骨、成脂誘導(dǎo)后,REALTIMEPCR檢測兩種BMSCS成骨誘導(dǎo)3714天后,其成骨相關(guān)基因的表達量變化;以及對成骨分化相關(guān)蛋白的檢測;包括ALP、茜素紅染色及OCN、ALP蛋白定量檢測。最后采用小鼠顱骨缺損的模型,將BMSCS與支架材料HATCP復(fù)合后植入骨缺損區(qū),在成骨6周后進行MICROCT掃描及HE染色,觀察DDR2基因缺失對小鼠成骨能力的影響研究結(jié)果與結(jié)論1成功分離培養(yǎng)出DDR2基因缺失小鼠的BMSCS,其生長狀態(tài)與正常野生小鼠的BMSCS相同,外形均呈長梭形,可見細胞成旋渦狀緊密排列生長,其表面標(biāo)記物的表達符合間充質(zhì)干細胞的特點,細胞具有體外誘導(dǎo)成骨與成脂分化的能力,證明培養(yǎng)的細胞是BMSCS。2DDR2基因缺失后,對BMSCS的凋亡略有抑制作用,但并不影響其正常的生長與傳代。3體外對兩種BMSCS進行成骨和成脂誘導(dǎo)分化后發(fā)現(xiàn),DDR2基因缺失后,BMSCS的成骨分化能力明顯減弱,對其成脂分化能力略有減弱。4兩種BMSCS經(jīng)成骨誘導(dǎo)以后,發(fā)現(xiàn)DDR2基因缺失后BMSCS的堿性磷酸酶活性降低,OCN分泌減少,對其成骨相關(guān)基因的表達量有明顯的抑制作用。5體內(nèi)實驗證實了DDR2基因缺失的BMSCS的骨修復(fù)能力明顯低于正常野生型小鼠的BMSCS。本研究結(jié)果證實DDR2基因缺失后,對于BMSCS細胞形態(tài)特征生長特性沒有明顯影響。但對其向成骨細胞分化有明顯的抑制作用,可以降低細胞堿性磷酸酶的活性,減少OCN分泌,抑制其成骨相關(guān)基因的表達。體內(nèi)實驗也證實DDR2基因缺失后,BMSCS修復(fù)骨組織缺損的能力明顯減弱。
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簡介:本研究通過懸浮培養(yǎng)和集落再形成等方法,進一步探討了這五個因子組合對純化的CD34細胞的體外擴增效應(yīng),結(jié)果顯示1該組合在擴增CD34早期造血細胞的同時,更原始的細胞成份CD34CD38細胞也保持了一定的比例。2擴增后細胞的體外集落再形成能力優(yōu)于未擴增的CD34細胞,表明此方案在擴增較早期造血細胞的同時,能維持造血細胞潛在的自我更新能力,阻止其分化。同時也證實了GP130信號傳導(dǎo)在早期造血細胞擴增中的重要作用。另外,臍血移植的成功與否除與擴增細胞的量和質(zhì)有關(guān)外,回輸細胞能否歸巢到骨髓也至關(guān)重要。趨化因子通過和表達在造血細胞上的趨化因子受體相互作用而對造血細胞歸巢起調(diào)節(jié)作用。鑒于基質(zhì)細胞在造血調(diào)控中的作用是支持和調(diào)節(jié)造血細胞定居、增殖、分化、發(fā)育和成熟的內(nèi)環(huán)境,我們采用小鼠骨髓來源的基質(zhì)細胞配伍上述五種細胞因子,對臍帶血中CD34早期造血祖細胞體外集落形成效應(yīng)進行了研究,進一步佐證了基質(zhì)細胞配伍細胞因子共培養(yǎng)是體外擴增造血細胞的較佳方案,可達到模擬體內(nèi)造血的作用,具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。
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簡介:上海第二醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文釉基質(zhì)蛋白對MC3T3E1成骨細胞生物學(xué)特性影響的研究姓名鄔春蘭申請學(xué)位級別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)(口腔內(nèi)科學(xué))指導(dǎo)教師束蓉200141L海第一_醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文釉基質(zhì)蛋白對MC3T3E1成骨細胞生物學(xué)特性影響的研究摘要目的YR骨吸收是牙周炎的一個主要病理變化牙周病治療的重要策略是促進牙槽骨再生。成骨細胞作為骨組織的主要功能細胞,通過合成分泌骨的有機質(zhì)和參與類基質(zhì)的鈣化,承擔(dān)著骨的修復(fù)和改建功能。嘗試通過使用生物活性物質(zhì)提高病變部位成骨細胞的機能,是牙周病治療的個新思維。釉基質(zhì)蛋白UPS是近年來研究較多的用來促進牙周組織再生的蛋白質(zhì)之一。許多動物實驗和臨床實驗均證實EMPS能促進牙周韌帶、牙骨質(zhì)和牙槽骨的再生。牙周韌帶細胞和成骨細胞是形成牙周組織的主要細胞,EMPS對人牙周韌帶細胞的作用己明了促進細胞增殖、堿性磷酸酶和膠原蛋白合成以及促進礦化結(jié)節(jié)形成。而EMP。對成骨細胞的作用效果還不明確降驗?zāi)康闹荚谟^察EMP。對成骨細胞圭1的影響,探討EMPS促進牙周組織再生的機制,為EMPS作為牙周再生材料應(yīng)用于臨床提供進一步的實驗依據(jù)。介法通過體夕卜培養(yǎng)MC3T3E1成骨細胞的方法,將EMP以不同濃度加入到培養(yǎng)基中。采用MTT法觀察EMPS對MC3T3E1細胞增殖的影響,酶動力學(xué)方法檢測細胞內(nèi)堿性磷酸酶的合成、3H脯氨酸摻入結(jié)合細菌膠原酶消化法檢測細胞內(nèi)I型膠原蛋白的合成、VONKOSSA染色法檢測細胞的礦化能力以及細胞計數(shù)法衡量細胞的粘附能力。結(jié)果實驗結(jié)果表明體外培養(yǎng)的MC3T3EL成骨細胞經(jīng)過EMPS處理,第二天,細胞數(shù)就明顯高于陰性對照組P005夕一結(jié)論EMPS對MC3T3E1成骨細胞的增殖有促進作用促進成骨細胞合成ALP增強成骨細胞合成I型膠原蛋白的能力,增加未礦化骨基質(zhì)
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簡介:分類號VDC博士學(xué)位論文密級5AZACDR對人膀胱癌細胞株T24細胞生物學(xué)行為的影響及其分子生物學(xué)機制的研究STUDIESOFTHEINFLUENCEOF5AZACDRONTHEBIOLOGICALBEHAVIORSANDTHEMECHANISMOFMOLECULARBIOLOGYTOHUMANBLADDERCARCINOMACELLLINETLINE12?!?。作者姓名胡勝學(xué)科專業(yè)泌尿臨床學(xué)院、系所湘雅二醫(yī)院指教教師楊羅艷論文答辯日期2絲叢£答辯委員會主席磊之磁、、中南大學(xué)二。一。年十月原創(chuàng)性聲明IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIILY1918180本人聲明,所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知,除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均已在論文中作了明確的說明。作者簽名塵出生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文,允許學(xué)位論文被查閱和借閱;學(xué)??梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容,可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫,并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。作者簽名幺L睦導(dǎo)師簽名差塹童壘日期趁絲年止月蘭日作者簽名幺L睦導(dǎo)師簽名』竺L至掣日期趁絲年止月蘭日
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簡介:第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文毛囊真皮成分細胞生物學(xué)特性及其誘導(dǎo)毛囊形成的初步研究姓名位爭偉申請學(xué)位級別碩士專業(yè)皮膚病與性病學(xué)指導(dǎo)教師伍津津20030501第三軍醫(yī)大學(xué)碳珊究生論文進及制約作用,失去凝集生長特性的毛乳頭細胞和真皮成纖維細胞及真皮鞘細胞一樣,能夠促進角質(zhì)形成細胞的分化;5、體外毛囊三維重建能夠形成K6染色陽性的細胞團,證明它具有向毛囊分化的傾向為以后毛囊體外重建的成功指明了方向;6、毛乳頭能夠與自體及異體上皮細胞相互作用,在體內(nèi)誘導(dǎo)毛囊形成。關(guān)鍵詞毛囊毛乳頭殼多糖人工皮膚A一肌動蛋白裸鼠毛囊三維模型凝集性生長VL
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簡介:研究認(rèn)為,人子宮內(nèi)膜功能層和基底層中存在子宮內(nèi)膜干細胞ENDOMETRIALSTEMCELLS,ENSCS,ENSCS與子宮內(nèi)膜的生理性再生及子宮內(nèi)膜異位癥、子宮內(nèi)膜息肉等疾病有明顯的相關(guān)性,另外ENSCS在子宮內(nèi)膜再生、盆腔臟器脫垂、膀胱尿道組織修復(fù)等已有廣泛的研究。當(dāng)前國內(nèi)外主要從正常子宮內(nèi)膜中獲取ENSCS,而由于刮宮、炎癥等引起的子宮內(nèi)膜重度損傷患者,ENSCS的獲取將成為困難。研究認(rèn)為宮腔粘連的發(fā)生主要由子宮內(nèi)膜基底層中ENSCS的不足或功能異常引起,所以我們嘗試從蛻膜中提取ENSCS并儲存,該方法具有操作方便并且不受倫理限制等優(yōu)點,可為日后的相關(guān)疾病中組織修復(fù)的應(yīng)用提供可靠的細胞基礎(chǔ)。本研究從蛻膜組織中分離、純化、擴增、培養(yǎng)ENSCS,并對ENSCS進行干細胞特性鑒定,通過體外誘導(dǎo)觀察ENSCS的多向分化的潛能,為ENSCS在子宮內(nèi)膜損傷、盆腔臟器脫垂、陰道重建等組織修復(fù)應(yīng)用和子宮內(nèi)膜異位癥、子宮內(nèi)膜息肉、子宮內(nèi)膜癌等子宮內(nèi)膜相關(guān)疾病提供可行的細胞模型。目的1、研究人蛻膜組織中子宮內(nèi)膜干細胞的分離及體外培養(yǎng)方法,并對所分離的子宮內(nèi)膜干細胞的生物學(xué)特性進行初步研究。2、研究人蛻膜組織中子宮內(nèi)膜干細胞的生物學(xué)特性,通過體外誘導(dǎo)的方法研究人蛻膜組織子宮內(nèi)膜干細胞向成骨細胞和平滑肌細胞的分化能力。方法1、取行人工流產(chǎn)患者的蛻膜組織,用胰酶和膠原酶消化蛻膜組織,分離子宮內(nèi)膜細胞,計數(shù)后,以極低密度接種于10CM培養(yǎng)皿,分離單克隆貼壁生長的細胞,倒置顯微鏡觀察子宮內(nèi)膜干細胞形態(tài)變化及克隆形成情況。2、采用CCK8法繪制子宮內(nèi)膜干細胞生長曲線,并計算倍增時間。3、流式細胞儀分析子宮內(nèi)膜干細胞的細胞周期及細胞表面抗原CD29、CD31、CD34、CD44、CD45、CD73、CD90、CD105、CD146表達情況。4、通過成骨誘導(dǎo)液和平滑肌誘導(dǎo)液研究子宮內(nèi)膜干細胞向成骨細胞和平滑肌分化的潛能。5、通過堿性磷酸酶染色、茜素紅染色對子宮內(nèi)膜干細胞誘導(dǎo)分化的成骨細胞進行鑒定免疫熒光和蛋白印跡對子宮內(nèi)膜干細胞誘導(dǎo)分化的平滑肌細胞進行鑒定。結(jié)果1、子宮內(nèi)膜干細胞呈長梭形,成纖維細胞樣,可見粗細不等的胞質(zhì)突起,增殖至8090%呈漩渦狀生長,其克隆形成率分別為391%和914%2、ENSCS生長曲線呈“S”型,接種48H至60H后進入對數(shù)生長期,于第9天達到平臺期,倍增時間為3752H。3、流式細胞儀測定ENSCS細胞表面抗原CD299913%,CD449739%,CD739968%,CD909676%,CD1058964%,CD1467796%呈陽性表達,而CD31130%,CD34068%,CD45126%呈陰性表達,4、流式細胞儀分析子宮內(nèi)膜干細胞的細胞周期提示,有6179%的細胞處于G0G1期,2237%的細胞處于SG2M期。5、通過成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基及平滑肌誘導(dǎo)培養(yǎng)基可以成功將子宮內(nèi)膜干細胞向成骨細胞和平滑肌細胞進行誘導(dǎo)分化。結(jié)論采用組織消化法分離單克隆貼壁生長的子宮內(nèi)膜細胞,能夠獲得純化的子宮內(nèi)膜干細胞,并能在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基及平滑肌誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)下,成功向成骨細胞和平滑肌細胞分化。
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上傳時間:2024-03-10
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