簡(jiǎn)介：肝纖維化HEPATICFIBROSIS是由于各種慢性肝病反復(fù)損傷導(dǎo)致的以細(xì)胞外基質(zhì)EXTRACELLULARMATRIX，ECM過(guò)度沉積為特征的病理生理過(guò)程，其病因主要包括病毒感染、非酒精或酒精性脂肪性肝炎、免疫損傷和膽汁淤積等。包括肝星狀細(xì)胞HEPATICSTELLATECELLS，HSCS在內(nèi)的不同來(lái)源的肝臟肌成纖維細(xì)胞是此病理生理過(guò)程的主要驅(qū)動(dòng)因素。靜態(tài)的HSCS富含維生素A，位于肝細(xì)胞及竇內(nèi)皮細(xì)胞之間的狄氏間隙。肝臟受到損傷時(shí)，細(xì)胞內(nèi)維生素A脂滴消失，靜態(tài)HSCS轉(zhuǎn)化為肌成纖維樣細(xì)胞。這一轉(zhuǎn)化過(guò)程對(duì)肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展至關(guān)重要，稱作靜態(tài)HSCS的“激活”?；罨腍SCS被賦予了多種能力，包括增殖速度加快、ECM分泌增加、遷移能力提高等。目前，肝纖維化尚缺乏有效治療手段。肝纖維化逆轉(zhuǎn)需要纖維瘢痕降解消退，此基于膠原分泌細(xì)胞數(shù)量減少、能力弱化。已有研究證實(shí)活化的HSCS是最主要的促纖維化因素，因此，清除活化的HSCS、抑制其增殖、誘導(dǎo)凋亡、抑制其膠原分泌及遷移能力，是逆轉(zhuǎn)肝纖維化的關(guān)鍵治療靶點(diǎn)和重要策略。星型膠質(zhì)細(xì)胞升高基因1ASTROCYTEELEVATEDGENE1，AEG1，也被稱作異粘蛋白METADHERIN，MTDH，于2002年在人類免疫缺陷病毒HUMANIMMUNODEFICIENCYVIRUS，HIV及腫瘤壞死因子ΑTUMNECROSISFACTTNFΑ感染的星型膠質(zhì)細(xì)胞中首次被發(fā)現(xiàn)。在過(guò)去的十余年間，對(duì)AEG1的研究多集中在與腫瘤的關(guān)系上，包括乳腺癌、惡性膠質(zhì)瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤及肝癌等。研究認(rèn)為，AEG1能夠促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，與腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)，被認(rèn)為是一種癌基因。例如，AEG1在肝細(xì)胞癌中高表達(dá)，且表達(dá)量與癌癥分期相關(guān)，表達(dá)越高則預(yù)后較差。近年來(lái)，隨著國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)AEG1的功能并非只是局限在腫瘤范圍，在非腫瘤的生理、病理過(guò)程中也發(fā)揮著重要作用，如生長(zhǎng)發(fā)育、炎癥、神經(jīng)退行性變等。這也促進(jìn)人們對(duì)此基因功能譜的認(rèn)識(shí)及內(nèi)在機(jī)制的研究日益深入。AEG1可通過(guò)多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路發(fā)揮作用，最重要的有磷脂酰肌醇3激酶PHOSPHATIDYLINOSITOL3KINASE，PI3KAKT、核因子ΚBNUCLEARFACTΚB，NFΚB、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶EXTRACELLULARREGULATEDKINASE，ERK等通路，而這些通路在肝纖維化發(fā)生、發(fā)展中均發(fā)揮重要作用。研究證明，在多種細(xì)胞中過(guò)表達(dá)AEG1可促進(jìn)細(xì)胞的增殖及侵襲、遷移能力，抑制其凋亡。更重要的是，上調(diào)AEG1能促進(jìn)細(xì)胞的炎癥反應(yīng)及血管新生能力，而這些也是肝纖維化形成的關(guān)鍵因素。但迄今為止，AEG1與肝纖維化及HSCS之間的關(guān)系尚無(wú)報(bào)道。本課題旨在研究AEG1在肝纖維化形成及活化HSCS中的表達(dá)，應(yīng)用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾RNAINTERFERENCE，RNAI技術(shù)下調(diào)AEG1表達(dá)后，觀察其對(duì)HSCS細(xì)胞活化、凋亡和遷移等生物學(xué)行為的影響，并進(jìn)一步研究導(dǎo)致此些影響所涉及的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。本學(xué)位論文由以下四部分組成第一部分、星形膠質(zhì)細(xì)胞升高基因1在肝纖維化大鼠肝組織及活化HSCS中的表達(dá)目的研究AEG1在大鼠纖維化肝臟及促纖維化因子刺激后HSCS中的表達(dá)。方法應(yīng)用膽總管結(jié)扎BILEDUCTLIGATION，BDL及二甲基亞硝胺DIMETHYLNITROSAMINE，DMN腹腔注射兩種方法建立大鼠肝纖維化模型。BDL模型組結(jié)扎膽總管，假手術(shù)組只分離膽總管不結(jié)扎，均于術(shù)后2WK取材。DMN模型組腹腔注射1％DMN，每周連續(xù)3D，對(duì)照組腹腔注射生理鹽水，均于4WK后取材。肝組織石蠟切片經(jīng)HE與天狼星紅染色SIRIUSRED檢測(cè)肝臟病理變化。免疫組織化學(xué)法IMMUNOHISTOCHEMISTRYIHC觀察AEG1的表達(dá)及定位。WESTERNBLOT及RTREALTIMEPCR檢測(cè)AEG1蛋白及MRNA的表達(dá)。采用原位灌流、梯度密度離心技術(shù)分離大鼠原代HSCS，倒置熒光顯微鏡觀察剛分離靜止的大鼠原代HSCS，應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)ΑSMA表達(dá)以鑒定活化的大鼠原代HSCS。應(yīng)用細(xì)菌脂多糖LIPOPOLYSACIDE，LPS∶0ΜGML，05ΜGML，15ΜGML及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子ΒTRANSFMINGGROWTHFACTBETA，TGFΒ∶0NGML，5NGML，10NGML刺激HSCT624H，應(yīng)用LPS15ΜGML或TGFΒ10NGML刺激HSCT6或原代大鼠HSCS0H，24H或48H，WESTERNBLOT檢測(cè)干預(yù)前后AEG1蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果①HE與天狼星紅染色結(jié)果證明BDL和DMN誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化模型成功建立。BDL誘導(dǎo)的纖維化模型可見(jiàn)肝臟結(jié)構(gòu)紊亂，大量膠原沉積，膽管明顯擴(kuò)張和增生DMN誘導(dǎo)的肝纖維化模型除肝臟結(jié)構(gòu)紊亂外，尚可見(jiàn)明顯的出血性壞死、肝竇充血及大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。②免疫組織化學(xué)法染色顯示，BDL及DMN誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠肝臟細(xì)胞AEG1表達(dá)明顯升高，主要定位于細(xì)胞質(zhì)，而對(duì)照組基本無(wú)表達(dá)。③WESTERNBLOT及RTREALTIMEPCR檢測(cè)顯示，BDL及DMN模型組較對(duì)照組AEG1均明顯升高P＜005）。④TGFΒ0NGML，5NGML，10NGML刺激HSCT624H，5NGML刺激組AEG1蛋白水平無(wú)明顯升高，10NGML組AEG1蛋白水平明顯升高。應(yīng)用10NGMLTGFΒ刺激HSCT624H及48H，結(jié)果顯示，48H刺激組較24H組AEG1蛋白水平進(jìn)一步升高P＜005）。⑤LPS0ΜGML05ΜGML15ΜGML刺激HSCT624H05ΜGML刺激組AEG1蛋白水平無(wú)明顯升高，15ΜGML組AEG1蛋白水平明顯升高。應(yīng)用15ΜGMLLPS刺激HSCT624H及48H，結(jié)果顯示，48H刺激組較24H組AEG1蛋白水平進(jìn)一步升高（P＜005）。⑥采用肝臟原位灌注鏈酶和膠原酶，以NYCODENZ為介質(zhì)，密度梯度離心一步法成功分離出大鼠原代HSCS。細(xì)胞得率為10107至15107只，細(xì)胞存活率和純度均大于90％。在倒置顯微鏡下觀察剛分離的HSCS呈圓形，胞漿中富含脂滴，在波長(zhǎng)328NM的熒光顯微鏡下觀察，剛分離的原代HSCS呈自發(fā)藍(lán)色熒光。培養(yǎng)至14D，大鼠HSCS呈活化狀態(tài)，脂滴消失，變成梭形肌成纖維樣細(xì)胞。⑦原代HSCS性質(zhì)鑒定。剛分離的HSCS免疫細(xì)胞化學(xué)染色Α平滑肌肌動(dòng)蛋白ΑSMOOTHMUSCLEACTIN，ΑSMA表達(dá)陰性原代培養(yǎng)14D后ΑSMA陽(yáng)性染色率達(dá)100％。⑧應(yīng)用10NGMLTGFΒ及15ΜGMLLPS刺激原代大鼠HSCS24H及48H，刺激24H組AEG1蛋白表達(dá)無(wú)明顯升高，刺激48H組AEG1蛋白表達(dá)則明顯升高P＜005）。結(jié)論AEG1在大鼠BDL及DMN誘導(dǎo)的肝纖維化組織中明顯升高。TGFΒ及LPS刺激HSCT6及原代大鼠HSCS可使AEG1表達(dá)升高，且呈時(shí)間、劑量依賴性。第二部分、星形膠質(zhì)細(xì)胞升高基因1表達(dá)下調(diào)對(duì)肝星狀細(xì)胞活化的影響目的構(gòu)建慢病毒介導(dǎo)的短發(fā)卡RNASHTHAIRPINRNA，SHRNA下調(diào)AEG1的表達(dá)，觀察其對(duì)HSCT6細(xì)胞增殖、凋亡及膠原合成的影響。方法設(shè)計(jì)并合成可抑制AEG1表達(dá)的SHRNA，根據(jù)轉(zhuǎn)染率摸索出適合靶細(xì)胞的感染復(fù)數(shù)MULTIPLICITYOFINFECTION，MOI，轉(zhuǎn)染進(jìn)入HSCT6細(xì)胞中。利用WESTEMBLOT和RTREALTIMEPCR方法檢測(cè)AEG1蛋白和MRNA表達(dá)情況，篩選出一條抑制效率最高的SHRNA。成功下調(diào)HSCT6的AEG1表達(dá)后，CCK8CELLCOUNTINGKIT8檢測(cè)細(xì)胞增殖流式細(xì)胞學(xué)分析細(xì)胞周期變化WESTERNBLOT和RTREALTIMEPCR方法檢測(cè)Ⅰ型膠原及ΑSMA水平的變化。結(jié)果①通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索出MOI值為20。轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞后，根據(jù)蛋白及MRNA檢測(cè)結(jié)果，所設(shè)計(jì)的3條SHRNA質(zhì)粒片段均可顯著抑制AEG1蛋白及基因的表達(dá)，蛋白干擾的效果分別達(dá)到7522％、6021％及6436％，MRNA表達(dá)分別下降8552％、6996％及7110％，與空白對(duì)照組相比均有顯著性差異P＜005）。②下調(diào)AEG1表達(dá)促進(jìn)了HSCT6細(xì)胞增殖，培養(yǎng)24H，LENTISHAEG1組113±013較LENTISHCON組157±022明顯下降P＜005）。培養(yǎng)48H，LENTISHAEG1組149±019較LENTISHCON組212±024進(jìn)一步下降P＜001）。LENTISHCON組與UNINFECTED組相比均無(wú)明顯變化。③流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)下調(diào)AEG1表達(dá)可影響HSCT6的細(xì)胞周期。LENTISHAEG1組4867±435％較LENTISHCON組2970±308％G0G1期細(xì)胞比例上升P＜005），而G2M期細(xì)胞比例下降490±171VS1507±337，P＜005，表明細(xì)胞被阻滯在G0G1期。④下調(diào)AEG1后，HSCT6的ΑSMA的蛋白031±011VS078±012，P＜005及MRNA057±027VS114±023，P＜005水平較陰性對(duì)照組分別下降了6032％及4134％。⑤Ⅰ型膠原蛋白036±012VS073±023，P＜005及MRNA057±011VS099±011，P＜005水平較陰性對(duì)照組分別下降了5072％及4254％。而兩者的陰性對(duì)照組較未感染組無(wú)明顯變化。結(jié)論成功構(gòu)建靶向AEG1的SHRNA并下調(diào)AEG1表達(dá)。下調(diào)AEG1表達(dá)可抑制HSCT6的活化。第三部分、星形膠質(zhì)細(xì)胞升高基因1表達(dá)下調(diào)誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞凋亡、抑制遷移目的觀察SHRNA下調(diào)AEG1表達(dá)后對(duì)HSCT6細(xì)胞的凋亡和遷移的影響。方法下調(diào)HSCT6的AEG1表達(dá)后，膜聯(lián)蛋白ANNEXINⅤ藻紅蛋白PHYCOERYTHRIN，PE聯(lián)合標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HSCS凋亡率末段脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧三磷酸尿苷缺口末段標(biāo)記TERMINALDEOXYNUCLEOTIDYTRANSFERRASEUTPNICKENDLABELINGTUNEL檢測(cè)HSCT6凋亡掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)RTREALTIMEPCR測(cè)定CASPASE3MRNA的表達(dá)劃痕實(shí)驗(yàn)及TRANSWELL小室檢測(cè)細(xì)胞遷移。結(jié)果①下調(diào)AEG1后，HSCT6的TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞率較對(duì)照組提高了193倍（P＜005）。②流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)顯示，下調(diào)AEG1表達(dá)后，LENTISHAEG1組細(xì)胞凋亡率2712±572％較LENTISHCON組（888±320％）及UNINFECTED797±252％組明顯升高P＜001）。③AEG1SHRNA干擾HSCT6細(xì)胞后，與陰性對(duì)照組相比，細(xì)胞體積縮小，細(xì)胞表面微絨毛縮短，偽足縮短或消失。④下調(diào)AEG1升高了CASPASE3的MRNA表達(dá)，LENTISHAEG1組較LENTISHCON組升高了186倍P＜005。⑤劃痕愈合實(shí)驗(yàn)劃痕后培養(yǎng)24H，LENTISHAEG1組劃痕愈合率041±006較LENTISHCON組056±005下降268％P＜005。培養(yǎng)48H后，劃痕愈合率LENTISHAEG1組059±013較LENTISHCON組088±012下降337％P＜005。⑥TRANSWELLASSAY實(shí)驗(yàn)TANSWELL小室中接種細(xì)胞后，細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24H，結(jié)果顯示，LENTISHAEG1組細(xì)胞遷移數(shù)1820±344較LENTISHCON組4660±485，P＜005降低了7121％。結(jié)論下調(diào)AEG1表達(dá)后，可以促進(jìn)HSCT6的凋亡，抑制其遷移。第四部分、星形膠質(zhì)細(xì)胞升高基因1調(diào)控肝星狀細(xì)胞生物學(xué)行為的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制目的研究慢病毒介導(dǎo)SHRNA下調(diào)AEG1表達(dá)對(duì)HSCT6細(xì)胞內(nèi)PI3KAKT、ERK及P38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)節(jié)作用。方法慢病毒介導(dǎo)的SHRNA下調(diào)HSCT6的AEG1表達(dá)后，WESTERNBLOT檢測(cè)PI3KAKT及ERK、P38MAPK磷酸化及總蛋白活化表達(dá)情況。結(jié)果①下調(diào)AEG1表達(dá)可以抑制PI3K、AKT水平，而對(duì)總蛋白無(wú)明顯影響。SHAEG1組與SHCON組比較，PPI3KPI3K、PAKTTHR308AKT和PAKTSER473AKT明顯下調(diào)（P＜005）。②下調(diào)AEG1表達(dá)可以抑制ERK、P38MAPK水平，而對(duì)總蛋白無(wú)明顯影響。SHAEG1組與SHCON組比較，PERKERK和PP38P38明顯下調(diào)（P＜005）。結(jié)論下調(diào)AEG1表達(dá)對(duì)HSCT6生物學(xué)行為的調(diào)控可能是通過(guò)抑制PI3KAKT及ERK、P38的磷酸化實(shí)現(xiàn)的。

簡(jiǎn)介：南方醫(yī)科大學(xué)2010級(jí)碩士學(xué)位論文RUNX2基因突變對(duì)人牙囊細(xì)胞的生物學(xué)特性的研究EFFECTOFR【刀、【【2MUTATIONONCHARACTERIZATIONOFHUMANDENTALFOLLICLECELLSINVITRO課題來(lái)源廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究基金項(xiàng)目編號(hào)A2012106國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目編號(hào)81271160學(xué)位申請(qǐng)人導(dǎo)師姓名專業(yè)培養(yǎng)培養(yǎng)所在名稱類型層次學(xué)院魏迪欣章錦才教授軒東英副教授口腔臨床醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)型碩士研究生廣東省口腔醫(yī)院南方醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院2013年5月6日廣州中文摘要第一章顱骨鎖骨發(fā)育不良綜合癥患者的臨床資料收集和突變檢測(cè)目的收集CCD病例，獲取RUNX2基因突變患者牙囊組織，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)打下基礎(chǔ)。方法對(duì)具有相關(guān)臨床癥狀的先證者詳細(xì)采集病史，明確單發(fā)或家族聚集傾向；利用X線檢查全面了解患者及其父母的全身骨骼發(fā)育情況；詳細(xì)進(jìn)行口腔檢查，記錄恒牙萌出及乳牙遲萌以及埋藏牙、多生牙等典型臨床癥狀；綜合上述臨床資料，明確診斷。取CCD患者及其姐姐的靜脈血，抽提基因組DNA，L％瓊脂糖電泳檢查抽取的DNA質(zhì)量，用核酸及蛋白定量?jī)x對(duì)其進(jìn)行定量，PCR擴(kuò)增RUNX2的序列，純化PCR產(chǎn)物，進(jìn)行雙向直接測(cè)序，對(duì)RUNX2基因測(cè)序結(jié)果進(jìn)行核酸序列同源性比較分析BLASTN，分析突變位點(diǎn)；結(jié)果收集到一例CCD患者，具有明顯的臨床特征，符合臨床診斷。RUNX2基因測(cè)序結(jié)果核酸序列同源性比較分析BLASTN發(fā)現(xiàn)在EXON2上發(fā)現(xiàn)插入TG堿基突變，突變型為C．309310INSTG?；颊呓憬慵案改笩o(wú)明顯CCD臨床表現(xiàn)，患者姐姐基因組DNA未發(fā)現(xiàn)RUNX2突變位點(diǎn)，為散發(fā)病例。結(jié)論發(fā)現(xiàn)RUNX2基因C．309310INSTG突變位點(diǎn)為該患者的致病基因突變位點(diǎn)，而且該位點(diǎn)為首次檢出的新的突變位點(diǎn)。第二章RUNX吵／M人牙囊細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定目的建立攜帶RUNX2基因突變位點(diǎn)C．309310INSTG的人牙囊細(xì)胞體外培養(yǎng)體系RUNXZ／MHDFC。方法選取CCD患者埋伏恒牙的牙囊作為實(shí)驗(yàn)組RUNX．．Z／M，要求恒牙上方?jīng)]有滯留乳，牙囊完整；對(duì)照組牙位、年齡、性別與實(shí)驗(yàn)組匹配的正常人埋伏恒牙牙囊，牙囊完整。運(yùn)用組織塊法對(duì)兩組牙囊進(jìn)行體外原代、傳代培養(yǎng)，第3代細(xì)胞制備細(xì)胞爬片進(jìn)行波形絲蛋白和角蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定其細(xì)胞來(lái)源。選取CCD患者RUA冗Z／／M及正常對(duì)照組RUNXZI第3代牙囊

簡(jiǎn)介：復(fù)旦大學(xué)碩士論文姜黃素納米粒NANOCURCTM聯(lián)合索拉非尼對(duì)肝細(xì)胞癌生物學(xué)特性的協(xié)同作用及機(jī)制研究SYNERGISTICEFFECTSANDMECHANISMOFAPOLYMERICNANOPARTICLEFORMULATIONOFCURCUMINNANOCURCTMCOMBINEDWITHSORAFENIBINBIOLOGICALBEHAVIORSOFHEPATOCELLULARCARCINOMA碩士研究生胡博導(dǎo)師徐泱副教授指導(dǎo)組成員楊欣榮博士課題基金資助國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目NO81071661國(guó)家科技重大專項(xiàng)課題2013ZXLO002011004復(fù)旦大學(xué)碩士論文致謝。69論文聲明。封二

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多IL--1β對(duì)大鼠髓核間質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué)特性的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)分類號(hào)學(xué)號(hào)學(xué)號(hào)D201178098學(xué)校代碼學(xué)校代碼10487密級(jí)密級(jí)博士學(xué)位論文士學(xué)位論文谷氨酰胺轉(zhuǎn)運(yùn)體谷氨酰胺轉(zhuǎn)運(yùn)體T2在MYCN擴(kuò)增的擴(kuò)增的神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的生物學(xué)功能及分子調(diào)控機(jī)神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的生物學(xué)功能及分子調(diào)控機(jī)制研究制研究學(xué)位申請(qǐng)人學(xué)位申請(qǐng)人任平任平學(xué)科專業(yè)學(xué)科專業(yè)藥理學(xué)藥理學(xué)指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師卿國(guó)良卿國(guó)良答辯日期答辯日期2014年5月獨(dú)創(chuàng)性聲明獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明，本學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果的總結(jié)。盡我所知，除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果。對(duì)本文的研究做出貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本人將承擔(dān)本聲明引起的一切法律后果。學(xué)位論文作者簽名日期年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在_____年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密□。（請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期年月日日期年月日

簡(jiǎn)介：間充質(zhì)干細(xì)胞MESENCHYMALSTEMCELL，MSCS是一種具有自我更新和多向分化能力的干細(xì)胞，有著良好的臨床應(yīng)用價(jià)值。以往研究主要集中在入骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞，但由于人骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的獲得需要通過(guò)骨髓穿刺，而且其數(shù)量隨年齡的增長(zhǎng)而急劇下降，限制了人骨髓源間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用。因此，越來(lái)越多的研究者開(kāi)始尋找間充質(zhì)干細(xì)胞的其他來(lái)源，例如外周血、臍帶血、臍帶、乳牙以及胎盤。胎盤作為孕婦妊娠后的廢棄物，易于獲得且對(duì)其研究和應(yīng)用無(wú)倫理道德的爭(zhēng)論，成為間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的新的研究熱點(diǎn)。2007年人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞研究國(guó)際會(huì)議對(duì)人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞的臨床應(yīng)用潛能給予了充分肯定。但是MSCS在胎盤組織中的分布以及如何有效地在體外獲得和擴(kuò)增是亟待解決的問(wèn)題。為此，本研究采用常規(guī)方法獲取人胎盤絨毛層間充質(zhì)干細(xì)胞HUMANPLACENTACHIONDERIVEDMSCS，HCMSCS，在此基礎(chǔ)上，對(duì)HCMSCS體外擴(kuò)增的條件及生物學(xué)特性作初步分析，從而為實(shí)驗(yàn)研究和臨床應(yīng)用快速有效提供種子細(xì)胞奠定基礎(chǔ)。第一部分HCMSCS的組織定位及體外分離培養(yǎng)與鑒定目的確定HCMSCS的組織定位，從胎盤絨毛層組織體外分離培養(yǎng)HCMSCS，在此基礎(chǔ)上誘導(dǎo)其向神經(jīng)元樣細(xì)胞和脂肪細(xì)胞分化，為體外優(yōu)化培養(yǎng)HCMSCS提供實(shí)驗(yàn)參數(shù)。方法采用免疫組織化學(xué)染色確定HCMSCS在胎盤絨毛層中的組織定位；選擇性剪取胎盤絨毛層組織，經(jīng)IV型膠原酶消化、貼壁和傳代培養(yǎng)獲得HCMSCS；流式細(xì)胞儀FLOWCYTOMETRY，F(xiàn)CM檢測(cè)其表面標(biāo)志；倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)；采用多種誘導(dǎo)條件分別將其向脂肪細(xì)胞、神經(jīng)元樣細(xì)胞方向誘導(dǎo)以觀察細(xì)胞的分化潛能。結(jié)果1免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，胎盤絨毛層中軸血管周圍富有CD105、CD90陽(yáng)性的間充質(zhì)干細(xì)胞；2采用機(jī)械分離和IV型膠原酶消化法體外分離培養(yǎng)能有效獲得HCMSCS；3倒置顯微鏡觀察HCMSCS呈典型的成纖維樣貼壁生長(zhǎng)，流式細(xì)胞儀分析顯示，HCMSCS高表達(dá)CD73、CD90和CD105，不表達(dá)CD14、CD34、CD45和HLADR；4HCMSCS向神經(jīng)元樣細(xì)胞誘導(dǎo)后，誘導(dǎo)細(xì)胞呈神經(jīng)元樣細(xì)胞形態(tài)，NSE免疫熒光染色呈陽(yáng)性；5HCMSCS經(jīng)成脂誘導(dǎo)2周后，胞內(nèi)有明顯的脂滴出現(xiàn)，油紅染色呈陽(yáng)性。結(jié)論從人胎盤絨毛層組織富集HCMSCS，經(jīng)機(jī)械分離和酶消化法結(jié)合，能有效地獲得HCMSCS，流式細(xì)胞術(shù)及誘導(dǎo)分化結(jié)果提示獲得的HCMSCS具有間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)志及誘導(dǎo)分化能力，可以成為體外優(yōu)化培養(yǎng)的種子細(xì)胞。第二部分細(xì)胞因子對(duì)HCMSCS體外促增殖作用及其生物學(xué)特性的影響目的優(yōu)化HCMSCS的體外培養(yǎng)條件，并對(duì)優(yōu)化培養(yǎng)條件培養(yǎng)的HCMSCS生物學(xué)特性進(jìn)行初步分析，為實(shí)驗(yàn)研究和臨床應(yīng)用快速有效地提供種子細(xì)胞奠定基礎(chǔ)。方法選擇性剪取人胎盤絨毛層組織，通過(guò)01％Ⅳ型膠原酶消化，按常規(guī)培養(yǎng)方法培養(yǎng)兩代后用于細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，MTT法檢測(cè)下列不同濃度不同細(xì)胞因子人白細(xì)胞介素6INTERLEUKIN6，IL6、激發(fā)型鼠抗人IL6信號(hào)傳導(dǎo)鏈GP130GLYCOPROTEIN130，GP130、人巨噬細(xì)胞集落刺激因子MACROPHAGECOLONYSTIMULATINGFACT，MCSF、人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子STEMCELLFACT，SCF、人FLT3配體FLT3LIG，F(xiàn)L、人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子BASICFIBROBLASTGROWTHFACT，BFGF對(duì)HCMSCS的增殖作用；光學(xué)顯微鏡觀察優(yōu)化培養(yǎng)條件下培養(yǎng)的HCMSCS的細(xì)胞形態(tài)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)優(yōu)化培養(yǎng)條件下培養(yǎng)的HCMSCS的細(xì)胞表型；油紅染色及免疫熒光分別鑒定優(yōu)化培養(yǎng)條件下培養(yǎng)的HCMSCS向脂肪細(xì)胞及神經(jīng)元樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化的潛能；RTPCR分析FL的受體FLT3的基因表達(dá)。結(jié)果1MTT法檢測(cè)及細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果表明，比較不同濃度的不同細(xì)胞因子對(duì)HCMSCS體外增殖作用的影響，含BFGF、FL的培養(yǎng)條件均能有效地促進(jìn)細(xì)胞的體外增殖，而FL的促增殖作用更強(qiáng)；2光學(xué)顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)含BFGF、FL的培養(yǎng)條件培養(yǎng)的細(xì)胞呈典型的成纖維樣貼壁生長(zhǎng)；3流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示含BFGF、FL的培養(yǎng)條件培養(yǎng)的HCMSCS高表達(dá)CD73、CD90、CDL05，不表達(dá)CD14、CD34、CD45和HLADR；4含BFGF、FL的培養(yǎng)條件培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)神經(jīng)元樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化后NSE免疫熒光染色呈陽(yáng)性；向脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)后有脂滴的出現(xiàn)；5RTPCR結(jié)果顯示HCMSCS表達(dá)FLT3的MRNA。結(jié)論諸多生物因子中BFGF和FL具有較強(qiáng)的促HCMSCS體外增殖作用而FL作用更為明顯，同時(shí)其能保持HCMSCS的細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞表型及多向分化潛能，因此FL可以作為體外培養(yǎng)HCMSCS的良好生長(zhǎng)因子。本研究明確了人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞在胎盤絨毛層的組織定位，建立了有效分離、體外擴(kuò)增HCMSCS的實(shí)驗(yàn)體系，在此基礎(chǔ)上，證明了FL具有有效地促HCMSCS體外增殖的作用，而且HCMSCS表達(dá)FL的受體FLT3，為下一步研究FL對(duì)HCMSCS促增殖作用的作用機(jī)制研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

簡(jiǎn)介：碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼10023學(xué)號(hào)2012003003腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因LMTAL在食管癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程中的促進(jìn)作用干細(xì)胞培養(yǎng)基成球培養(yǎng)法篩選宮頸癌干細(xì)胞的生物學(xué)特性鑒定THEEFFECTOFTUMORMETASTASISASSOCIATEDGENELMTALONTHEPROCESSOFEMTINESOPHAGEALSQUAMOUSCELLCARCLNOMAISOLATIONANDBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFSPHERECELLSFROMCERVICALCANCERCELLLINE所院腫瘤研究所姓名劉歡指導(dǎo)教師錢海利教授導(dǎo)師小組錢海利教授詹啟敏教授宋詠梅教授學(xué)科專業(yè)細(xì)胞生物學(xué)研究方向分子腫瘤學(xué)完成日期二0一五年五月北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文圖表索G第一部分圖表索引圖1不同食管癌細(xì)胞中MTAL的表達(dá)情況28圖2熒光顯微鏡下確定MTAL過(guò)表達(dá)或敲降的情況29圖3蛋白水平確定MTAL過(guò)表達(dá)或敲降的情況29圖4敲降MTAL對(duì)食管癌增殖能力的影響30圖5過(guò)表達(dá)MTAL對(duì)食管癌增殖能力的影響30圖6敲降VITAL對(duì)食管癌克隆形成能力的影響31圖7過(guò)表達(dá)MTAL對(duì)食管癌克隆形成能力的影響31圖8MTAL在食管癌細(xì)胞中的表達(dá)定位32圖9MTAL表達(dá)水平的改變對(duì)食管癌細(xì)胞中EMT相關(guān)標(biāo)志物表達(dá)的影響32圖10免疫熒光檢測(cè)敲降MTAL對(duì)食管癌細(xì)胞EIDT相關(guān)標(biāo)志物表達(dá)水平的影響33圖1L免疫熒光檢測(cè)過(guò)表達(dá)MTAL對(duì)食管癌細(xì)胞EMT相關(guān)標(biāo)志物表達(dá)水平的影響34圖12MTAL表達(dá)水平的改變對(duì)食管癌細(xì)胞遷移能力的影響35圖13MTAL表達(dá)水平的改變對(duì)SOX2表達(dá)的影響36

簡(jiǎn)介：摘要●_，，’●●目的獲得高轉(zhuǎn)移舌鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞，為建立高轉(zhuǎn)移舌癌動(dòng)物模型奠定基礎(chǔ)。方法采用改良侵襲實(shí)驗(yàn)篩選出高低不同的轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞；采用MTT實(shí)驗(yàn)和平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)兩種細(xì)胞的克隆差異；侵襲性實(shí)驗(yàn)和遷移性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)兩種細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移差異；流式細(xì)胞儀用來(lái)檢測(cè)兩種細(xì)胞生長(zhǎng)周期的差異；采用WESTERNBLOT矛DREALTIMEPCR方法檢測(cè)兩種細(xì)胞ZESTE基因增強(qiáng)子同源物2EZH2的蛋白干HMRNA表達(dá)差異。結(jié)果分離出兩種不同轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞。兩種不同轉(zhuǎn)移細(xì)胞的克隆形成、侵襲和遷移、細(xì)胞周期矛DEZH2蛋酐HMRNA表達(dá)均有顯著性差異T3423～59300，PO05～0001。結(jié)論從舌鱗癌細(xì)胞系中分離得到了兩種不同轉(zhuǎn)移潛能的細(xì)胞亞群，且兩種細(xì)胞具有不同釣生物學(xué)特牲關(guān)鍵詞鱗癌；舌；EZH2；細(xì)胞系研究生劉陽(yáng)口腔頜面外科學(xué)指導(dǎo)老師陳萬(wàn)濤教授英漢縮略名詞對(duì)照英文縮寫英文全稱中文全稱EZH2ENHANCEROFZESTEHOMOLOG2ZESTE基因增強(qiáng)子同源物2MTT3一4，5DIMETHYLTHIAZOL一2Y1一2，53一4，5一二甲基噻嘩一2一2，5PDIPHENYITETRAZOIUMBROMIDE二苯基四氮唑溴鹽PROPIDIUMIODIDE碘化丙啶RPM1640ROSWELLPARKMEMORIALINSTITUTE一1640培養(yǎng)基PBSPHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖溶液RTPCRREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASE逆轉(zhuǎn)錄PCRRNASEACHAINREACTIONRIBONUCLEASE核糖核酸酶PRC2POLYCOMBREPRESSIVECOMPLEX2POLYCOMB抑制復(fù)合物2SUZL2SUPPRESSOROFZESTE12ZESTE抑制子12EEDEMBRYONICECTODERMDEVELOPMENT胚胎外胚層發(fā)育因了EDTAETHYLENEDIAMINETETRAACETICACID乙二胺四乙酸PVDFPOLYVINYLIDENEFLUORIDELITERMMOL／IMOLE／LITER“LMLHMICROLITERMILLILITERHOUR4聚偏二氟乙烯升摩爾濃度毫升小時(shí)微升

簡(jiǎn)介：中山大學(xué)博士學(xué)位論文人牙髓側(cè)群細(xì)胞生物學(xué)特性及體外誘導(dǎo)分化研究姓名王勁茗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師凌均棨20100426人牙髓側(cè)群細(xì)胞生物學(xué)特性及體外誘導(dǎo)分化研究中山大學(xué)博士學(xué)位論文第一章人牙髓細(xì)胞體外培養(yǎng)及SP鑒定目的從人健康恒牙及乳牙牙髓組織中分離、培養(yǎng)牙髓細(xì)胞，檢測(cè)第2代DPCS中SP含量，ABCG2的表達(dá)情況，結(jié)合ABCG2在牙髓組織中的定位，分析ABCG2表達(dá)對(duì)維持牙髓SP細(xì)胞表型所起作用。方法酶消化法原代培養(yǎng)人恒牙及乳牙牙髓細(xì)胞。HOECHST33342染色后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)恒牙牙髓細(xì)胞和乳牙牙髓細(xì)胞中SP比例。用ABCG2抗體進(jìn)行免疫熒光染色，定位ABCG2在人牙髓細(xì)胞中的表達(dá)。采用熒光定量RT．PCR檢測(cè)兩種細(xì)胞中ABCG2基因表達(dá)水平。免疫組化染色確定ABCG2在正常和炎癥牙髓組織中的表達(dá)。結(jié)果體外培養(yǎng)的恒牙和乳牙牙髓細(xì)胞中均檢測(cè)到SP細(xì)胞，其中恒牙SP比例約占1％，乳牙SP約為2％。免疫熒光結(jié)果顯示ABCG2表達(dá)在牙髓細(xì)胞的胞膜。熒光定量RT．PCR檢測(cè)到兩種牙髓細(xì)胞均有ABCG2基因表達(dá)，其中乳牙牙髓細(xì)胞略高于恒牙牙髓細(xì)胞PO．05。免疫組化染色顯示ABCG2在正常牙髓中主要表達(dá)于血管周和成牙本質(zhì)細(xì)胞層，而在炎癥牙髓組織中可見(jiàn)ABCG2細(xì)胞增多。結(jié)論人恒牙和乳牙牙髓細(xì)胞中均可檢測(cè)到SP細(xì)胞及其標(biāo)志物ABCG2的表達(dá)，其中乳牙牙髓SP比例稍高。ABCG2在正常牙髓組織定位于血管周和成牙本質(zhì)細(xì)胞層，炎癥牙髓組織中ABCG2表達(dá)增高。第二章體外缺血培養(yǎng)對(duì)牙髓SP的影響目的本部分將在體外模擬缺血培養(yǎng)牙髓細(xì)胞，檢測(cè)缺血培養(yǎng)對(duì)牙髓SP表型，SP標(biāo)志ABCG2及干細(xì)胞標(biāo)志OCT4的影響。方法確定體外模擬缺血條件2％02AND2％FBS，實(shí)驗(yàn)分三組正常組，24H缺血組，48H缺血組。MTT法檢測(cè)缺血培養(yǎng)對(duì)牙髓細(xì)胞增殖的影響。流式細(xì)胞儀檢測(cè)正常組，24H和48H缺血組SP細(xì)胞比例。細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)三個(gè)實(shí)驗(yàn)組中ABCG2與OCT4的蛋白表達(dá)。熒光定量RTPCR檢測(cè)各組ABCG2和OCT4MRNA表達(dá)。結(jié)果MTT檢測(cè)數(shù)據(jù)顯示從57天開(kāi)始，缺血組細(xì)胞增殖與正常組相比呈明顯抑制趨勢(shì)P0．05，尤其是48H缺血組班0．01。流式檢測(cè)發(fā)現(xiàn)不同培N

簡(jiǎn)介：分類號(hào)單位代碼10752密級(jí)公開(kāi)學(xué)號(hào)201200310寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士碩士專業(yè)專業(yè)學(xué)位論文學(xué)位論文小窩蛋白小窩蛋白1與基質(zhì)金屬蛋白酶與基質(zhì)金屬蛋白酶2在小細(xì)胞小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及生肺癌中的表達(dá)及生物學(xué)意義物學(xué)意義EXPRESSIONOFCAV1MMP2INSMALLCELLLUNGCANCERTHEIRBIOLOGICALSIGNIFICANCE學(xué)位申請(qǐng)人桑迎竹桑迎竹指導(dǎo)教師雷豐豐雷豐豐申請(qǐng)學(xué)位門類級(jí)別醫(yī)學(xué)醫(yī)學(xué)專業(yè)名稱內(nèi)科學(xué)內(nèi)科學(xué)研究方向呼吸病呼吸病學(xué)（肺間質(zhì)纖維化肺間質(zhì)纖維化）所在學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院論文完成日期2015年3月寧夏醫(yī)科大學(xué)研究生院寧夏醫(yī)科大學(xué)研究生院NINGXIAMEDICALUNIVERSITY

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)UDC學(xué)號(hào)416523211503南昌大學(xué)專業(yè)學(xué)位研究生學(xué)位論文NOTCHNOTCH1信號(hào)的激活對(duì)食管鱗狀細(xì)胞癌信號(hào)的激活對(duì)食管鱗狀細(xì)胞癌上皮上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和生物學(xué)的影響間質(zhì)轉(zhuǎn)化和生物學(xué)的影響THEACTIVATIONOFNOTCH1SIGNALTHATEFFECTFTHEEPITHELIALMESENCHYMALTRANSFMATIONTHEBIOLOGYINTHEESOPHAGEALSQUAMOUSCELLCARCINOMA龔強(qiáng)培養(yǎng)單位（院、系）南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱吳起才教授專業(yè)學(xué)位種類臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)領(lǐng)域名稱外科學(xué)（心胸外科）論文答辯日期2014年6月答辯委員會(huì)主席評(píng)閱人2014年6月摘要摘要目的目的探討NOTCH1信號(hào)通路對(duì)ECA109EMT的調(diào)控作用，明確激活NOTCH1信號(hào)通路后對(duì)ECA109的增殖、凋亡、遷移能力的影響。方法方法明確NOTCH1信號(hào)通路調(diào)節(jié)食管鱗狀細(xì)胞癌EMT的作用機(jī)制，將實(shí)驗(yàn)分為CONTROL、DMSO、MOCK、N1ICD、TGFΒ1、DAPTTGFΒ1、DAPT組，N1ICD慢病毒過(guò)表達(dá)載體（LVN1ICD）轉(zhuǎn)染ECA109上調(diào)NOTCH1信號(hào)通路。72H后根據(jù)分組情況分別加入5NGMLTGFΒ1誘導(dǎo)ECA109發(fā)生EMT和15ΜMOLMLDAPT抑制ECA109發(fā)生EMT，48H后CCK8檢測(cè)細(xì)胞活力；WESTERN–BLOTTING檢測(cè)ECADHENRIN、VIMENTIN、NOTCH1、HES1、HEY1、JAGGED1蛋白的表達(dá)變化；5周后用結(jié)晶紫染液對(duì)克隆細(xì)胞進(jìn)行染色并計(jì)數(shù)；觀察ECA10924H內(nèi)遷移能力的變化；ANNEXINVPI對(duì)ECA109染色并檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果結(jié)果1CCK8檢測(cè)細(xì)胞活力結(jié)果示ECA109在N1ICD組中增殖活力最強(qiáng)，與CONTROL組、MOCK組、TGFΒ1、TGFΒ1DAPT、DMSO、DAPT組比較具有顯著性差異（P005）。2細(xì)胞克隆計(jì)數(shù)結(jié)果示N1ICD組與CONTROL組、MOCK組、TGFΒ1、DAPTTGFΒ1和DMSO、DAPT組比較，ECA109克隆形成率及數(shù)量最多，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異比較明顯（P005）。3劃痕試驗(yàn)結(jié)果顯示N1ICD組與CONTROL組、MOCK組、TGFΒ1、TGFΒ1DAPT和DMSO、DAPT組比較，ECA109細(xì)胞劃痕愈合明顯，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異明顯（P005）。4細(xì)胞自動(dòng)分析和分選裝置檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果示N1ICD組與CONTROL組、MOCK組、TGFΒ1、DAPTTGFΒ1和DMSO、DAPT組比較，ECA109細(xì)胞凋亡率顯著減少，有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P005）。5WESTERNBLOTTING檢測(cè)結(jié)果顯示在N1ICD組中，ECADHERIN蛋白表達(dá)量明顯減少，與CONTROL組、MOCK組、TGFΒ1、DAPT、DAPTTGFΒ1和DMSO組比較有顯著性差異（P005）；VIMENTIN、NOTCH1、HES1、HEY1、JAGGED1

簡(jiǎn)介：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文MIR181A表達(dá)載體的驗(yàn)證及其對(duì)胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響姓名朱玥璐申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師陳杰20090601ABSTRACTBACKGROUNDPANCREATICCANCERISAKINDOFMALIGNANTTUMORWITHPOORSURVIVALANDHIGHMORTALITYTHATISDIFFICULTFORDIAGNOSISANDTREATMENT，F(xiàn)ORTHATNOVELTUMORBIOMARKERSANDEFFECTIVETHERAPEUTICSTRATEGESAREURGENTLYNEEDEDMICRORNASMIRNASARESMALLRNASWITHALENGTHRANGEBETWEEN2024NUCLEOTIDESWHICHPARTICIPATELIFEPROGRESSASNEGATIVEPOSTTRANSCRIPTIONALREGULATORSMIRNASMAYBECOMETHENEWMARKERSANDTHERAPEUTICTARGETSACCORDINGTOITSABNORMALITYINTHEEXPRESSIONPATTERNSAMONGTHEDIFFERENTCANCERTISSUESTHEHIGHEL“EXPRESSIONLEVELOFMIR181AINPANCREATICADENOCARCINOMARELATIVETOCHRONICPANCREATITISANDNORMALPANCREASMAYREVEALTHEROLEOFTHISMIRNAINPANCREATICCARCINOGENESISTOSOMEEXTENTOBJECTIVEEVALUATETHEEFFECTOFEETOPICMIR一181AEXPRESSIONONBIOLOGICALBEHAVIOROFPANCREATICCANCERCELLMETHODTRANSFECTTHERECOMBINANTVECTORWITHPREMIR181ASEQUENCEANDBLANKCONTROLVECTORINTOTHEPANCREATICCANCERCELLMIAPACA2，RESPECTIVELYCONFIRMTHEEFFICIENCYOFTHEINSTANTEXPRESSIONUSINGREALTIMEPCRANDLUCIFERASEASSAYSYSTEMCOMPARETHEDIFFERENCEOFCELLGROWTH，CELLCYCLES，APOPTOSIS，MIGRATIONANDINVASIONBETWEENTHEGROUPSRESULTTHEREALTIMEPCRANDLUCIFERASEASSAYDEMONSTRATEDSUCCESSFULCONSTRUCTIONOFMIR181AOVEREXPRESSIONMODELINVITROBYTHERECOMBINANTVECTOR咖NSFECTIONOVEREXRESSIONOFMIR181AENHANCEDTHEINVASIONOFTHEPANCREATICCANCERCELLMIAPACA2WHILETHEREWERENOSIGNIFICANTEFFECTSONCELLGROWTH，CELLCYCLE，APOPTOSISANDMIGRATIONBYECTOPICEXPRESSIONOFMIR181ACONCLUSIONTHEOVEREXPRESSIONOFMIR181ACOULDPROMOTEINVASIONOFTHEPANCREATICCANCERCELLSBYTHETRANSFECTIONOFRECOMBINANTVECTORKEYWORDSPANCREATICCANCER；MICRORNA；RECOMBINANTVECTOR；GENEEXPRESSION4

簡(jiǎn)介：碩士學(xué)位論文CPGODN107增強(qiáng)人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞放射敏感性的體內(nèi)外生物學(xué)活性及機(jī)制研究劉丹劉丹指導(dǎo)教師周紅教授導(dǎo)師組成員培養(yǎng)單位第三軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院申請(qǐng)學(xué)位類別碩士學(xué)術(shù)學(xué)位專業(yè)名稱藥理學(xué)論文提交日期2013年5月論文答辯日期2013年5月答辯委員會(huì)主席評(píng)閱人二〇一三年五月分類號(hào)分類號(hào)R965密級(jí)公開(kāi)學(xué)開(kāi)學(xué)號(hào)2002010293學(xué)校代碼學(xué)校代碼90031目錄縮略語(yǔ)表1英文摘要2中文摘要7論文正文CPGODN107增強(qiáng)人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞放射敏感性的體內(nèi)外生物學(xué)活性及機(jī)制研究11第一章前言1111研究背景1112研究?jī)?nèi)容13第二章CPGODN107增強(qiáng)U87細(xì)胞放射敏感性的體內(nèi)外生物學(xué)活性研究1421CPGODN107增強(qiáng)U87細(xì)胞放射敏感性的體外生物學(xué)活性研究1422CPGODN107增強(qiáng)U87細(xì)胞放射敏感性的體內(nèi)生物學(xué)活性研究2123小結(jié)2924討論29第三章CPGODN107聯(lián)合射線對(duì)U87細(xì)胞增殖與死亡的影響3331實(shí)驗(yàn)材料3332實(shí)驗(yàn)方法3433實(shí)驗(yàn)結(jié)果3834小結(jié)4635討論46第四章CPGODN107放射增敏作用機(jī)制的初步研究4941實(shí)驗(yàn)材料4942實(shí)驗(yàn)方法5143實(shí)驗(yàn)結(jié)果5744小結(jié)6345討論63全文結(jié)論67參考文獻(xiàn)68文獻(xiàn)綜述73研究生期間發(fā)表的文章81致謝82

簡(jiǎn)介：目的分析膝關(guān)節(jié)韌帶成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特性和觀察酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子ACIDFIBROBLASTGROWTHFACTAFGF、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子BASICFIBROBLASTGROWTHFACTBFGF、表皮生長(zhǎng)因子EPIDERMALGROWTHFACTEGF和內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子ENDOTHELIALCELLGROWTHFACTECGF對(duì)其增殖行為的影響。方法采用膠原酶消化培養(yǎng)法或組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)原代新西蘭大白兔的膝關(guān)節(jié)前十字韌帶ANTERICRUCIATELIGAMENTACL、內(nèi)側(cè)副韌帶MEDIALCOLLATERALLIGAMENTMCL及人膝關(guān)節(jié)ACL細(xì)胞選擇合適的條件進(jìn)行體外培養(yǎng)觀察膝關(guān)節(jié)韌帶成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特性；在培養(yǎng)液中分別加入AFGF、BFGF、EGF和ECGF以XTT法測(cè)定細(xì)胞的增殖行為。結(jié)果在含體積分?jǐn)?shù)為10胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中細(xì)胞生長(zhǎng)良好、增殖快。在體外培養(yǎng)條件下兔ACL和MCL細(xì)胞形態(tài)相似都具成纖維細(xì)胞表型但MCL細(xì)胞較ACL細(xì)胞生長(zhǎng)快；兩種細(xì)胞合成膠原的總量相同相對(duì)于MCL細(xì)胞ACL細(xì)胞合成的Ⅰ型膠原多而Ⅲ型膠原較少。人ACL細(xì)胞在體外亦具成纖維細(xì)胞表型免疫細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)表明人ACL細(xì)胞Ⅰ、Ⅲ型膠原及纖維連接蛋白表達(dá)呈陽(yáng)性。AFGF、BFGF、EGF和ECGF四種生長(zhǎng)因子對(duì)兔膝關(guān)節(jié)韌帶成纖維細(xì)胞有明顯的促增殖作用在某一濃度范圍內(nèi)對(duì)細(xì)胞增殖的影響與因子的濃度有依賴性超過(guò)其最佳作用濃度后增加因子的濃度促進(jìn)作用不再增強(qiáng)即呈現(xiàn)一平臺(tái)期。結(jié)論1、用膠原酶消化培養(yǎng)法或組織塊培養(yǎng)法在體外可成功培養(yǎng)出膝關(guān)節(jié)韌帶成纖維細(xì)胞。2、兔ACL、MCL細(xì)胞生物學(xué)特性存在差異這些差異有助于解釋二者不同的愈合特性。3、AFGF、BFGF、EGF和ECGF四種生長(zhǎng)因子對(duì)兔膝關(guān)節(jié)韌帶成纖維細(xì)胞有明顯的促增殖作用。

簡(jiǎn)介：】8S9175ATHESISDISSENATIONSUBMITTEDTOZHENGZHOUUNIVERSITYFORTHEDEGREEOFDOCTOREFFECTOFGINSENOSIDER93ONTHEBIOLOGICALBEHAVIOROFLUNGSQUAMOUSCARCINOMASKMES1CELLLINEBYXINWANGSUPERVISORPROFYULINGZHENGONCOLOGYTHEFIRSTAFFILIATEDHOSPITALMAY2010原創(chuàng)性聲明IIIJIIIILIPIIIIILLIIIIII＼1835471本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的科研成果。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者日期年月日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者日期年月日