簡介：四川大學(xué)博士學(xué)位論文磁性附著體靜磁場對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞和人牙周膜成纖維細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的基礎(chǔ)研究姓名胥春申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師巢永烈20040420四川大學(xué)2001級(jí)3A腔醫(yī)學(xué)博士專業(yè)學(xué)位論文縮略詞表縮略詞英文全稱中文名稱HGFHUMANGINGIVALFIBROBLASTHUMANPERIODONTALLIGAMENTFIBROBLAST記SLA人牙齲成纖維細(xì)胞人牙周膜成纖維細(xì)胞MTIOD人BPSCAMSFCMPIPCDCDKSMILLITLA345DIMETHYLTHIAZOL2YL25DIPHENYLTETRAZOLIUMBROMIDEDIUMETHYLSULPHOXIDELASERSCANNINGCONFOCALMICROSCOPELENGTHWIDTHRATIOINTEGRATEDOPTICALDENSITYACTINBINDINGPROTEINSCELLADHESIONMOLECULESFLOWCYTOMETRYPROLIFERATIONINDEXPROGRAMMEDCELLDEATHCYCLINDEPENDENTKINASES特斯拉毫特斯拉四甲基偶氮哇鹽二甲基亞楓激光掃描共聚焦顯微鏡長寬比積分熒光強(qiáng)度肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白細(xì)胞粘附分子流式細(xì)胞術(shù)增殖指數(shù)程序性細(xì)胞死亡細(xì)胞周期蛋白依賴激酶

簡介：分類號(hào)密級(jí)UDC學(xué)號(hào)406521611282南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文沉默沉默ΒCATENIN表達(dá)對(duì)人胃癌細(xì)胞生物學(xué)表達(dá)對(duì)人胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響行為的影響SILENCINGΒCATENININFLUENCETHEBIOLOGICALBEHAVISOFGASTRICCANCERCELLS潘安萍培養(yǎng)單位（院、系）南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱熊建萍教授申請(qǐng)學(xué)位的學(xué)科門類醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱腫瘤學(xué)論文答辯日期2014年6月6日答辯委員會(huì)主席評(píng)閱人2014年6月摘要II摘要背景背景胃癌是一種常見疾病，多數(shù)患者被診斷時(shí)已屬晚期，錯(cuò)失手術(shù)的機(jī)會(huì)，導(dǎo)致胃癌患者生存期短，生活質(zhì)量差。近年來，ΒCATENIN被發(fā)現(xiàn)是一種癌癥相關(guān)蛋白，被證明在多種腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)。ΒCATENIN除與癌細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)，還與腫瘤的化療敏感相關(guān)。但是目前對(duì)于ΒCATENIN與腫瘤之間關(guān)系的研究多數(shù)是在腸癌、乳腺、肝癌等中進(jìn)行，對(duì)于胃癌細(xì)胞的研究尚少。本研究希望通過構(gòu)建ΒCATENINRNAI干擾慢病毒感染胃癌AGS、MGC803細(xì)胞株，下調(diào)胞內(nèi)ΒCATENIN的表達(dá)來研究此蛋白對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。目的目的探討通過沉默胃癌AGS、MGC803細(xì)胞株細(xì)胞中ΒCATENIN蛋白的表達(dá)，觀察ΒCATENIN的表達(dá)量下調(diào)對(duì)此兩株胃癌細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲力以及5FU敏感性的影響，并初步探討其分子機(jī)制，為胃癌的診治提供新思路。方法方法1制作慢病毒載體ΒCATENINRNAI433LVΒCATENINRNAI慢病毒液及ΒCATENINNEGATIVELV空載體慢病毒液，分別轉(zhuǎn)染胃癌AGS、MGC803細(xì)胞株。實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)組（感染ΒCATENINRNAI慢病毒的AGSRNAI433、MGC803RNAI433）、陰性對(duì)照組（感染空載慢病毒的AGSNEG、MGC803NEG）、空白對(duì)照組（未處理的AGS、MGC803）。采用QRTPCR及WESTERNBLOT方法分別從MRNA及蛋白水平檢測各組細(xì)胞ΒCATENIN在胞內(nèi)表達(dá)情況；2MTT法分別檢測各組細(xì)胞對(duì)5氟尿嘧啶（5FU）敏感性的差異；3采用TRANSWELL小室法檢測各組細(xì)胞體外侵襲、遷移能力的差異；4流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞周期及凋亡的差異；5WESTERNBLOT檢測各組細(xì)胞ΒCATENIN下游靶基因編碼蛋白和5FU代謝酶的差異。結(jié)果結(jié)果1慢病毒成功感染胃癌細(xì)胞，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。QRTPCR及WESTERNBLOT檢測實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞在MRNA和蛋白水平上較對(duì)應(yīng)陰性對(duì)照組均出現(xiàn)顯著下調(diào)P＜

簡介：目的NK細(xì)胞作為機(jī)體固有免疫的重要組成部分是機(jī)體抗腫瘤、抗感染的第一道天然防線。其殺傷功能的出現(xiàn)不需要預(yù)先刺激或致敏，無MHC組織相容性復(fù)合物限制性。NK細(xì)胞不僅能夠介導(dǎo)對(duì)腫瘤細(xì)胞的天然殺傷作用，還能夠調(diào)節(jié)特異性和非特異性免疫應(yīng)答。過繼轉(zhuǎn)輸活化的或同種異體的NK細(xì)胞，已經(jīng)應(yīng)用于白血病和某些實(shí)體腫瘤的治療中。白細(xì)胞介素15IL15由多種組織和細(xì)胞亞群產(chǎn)生，與IL2在功能上有許多相似之處，可以誘導(dǎo)CD34的細(xì)胞分化為NK細(xì)胞，并且能夠促進(jìn)NK細(xì)胞的增殖，增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷活性。我們已經(jīng)建立了IL15基因修飾的NK92細(xì)胞系，證實(shí)IL15的基因修飾能夠增強(qiáng)NK92細(xì)胞對(duì)多種腫瘤的殺傷能力。與NK92細(xì)胞相比，NKL細(xì)胞有著不同的殺傷譜，比如，NKL對(duì)于人胃癌細(xì)胞系SGC7901的殺傷能力強(qiáng)于NK92細(xì)胞，因此可以作為NK92的重要補(bǔ)充。NKL細(xì)胞系由ROBERTSON等建立，來源于CD3CD16CD56的大顆粒淋巴細(xì)胞自血病患者的外周血。NKL依賴于IL2生長，具自然殺傷活性和ADCC效應(yīng)，其增殖反應(yīng)也與正常的CD16CD56DIMNK細(xì)胞相似。NKL是NK細(xì)胞系中與原始NK細(xì)胞最為相近的，因此成為過繼免疫治療的又一重要選擇。本文建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HIL15的NKL細(xì)胞系，證明IL15基因修飾的NKL細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖、抗凋亡和對(duì)肝癌細(xì)胞的殺傷作用，并初步探討了其分子機(jī)制。方法1電轉(zhuǎn)將IL15基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染入NKL細(xì)胞系。2CTLL2增殖分析測定細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL15的生物學(xué)活性。3酶聯(lián)免疫吸附分析測定細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL15的濃度。4RTPCR檢測三種NKL細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因和殺傷相關(guān)基因的表達(dá)水平。5CCK方法用于分析三種NKL細(xì)胞在不同濃度IL2和IL15條件下的增殖水平。6流式細(xì)胞術(shù)檢測三種NKL細(xì)胞凋亡、周期以及膜表面NKG2D和NKG2A分子的表達(dá)。7MTT方法檢測三種NKL細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。結(jié)論NK細(xì)胞作為固有免疫的重要組成部分，是抵御病毒感染和腫瘤細(xì)胞的第一道防線，由于無需抗原預(yù)先作用，就可直接殺傷腫瘤和病毒感染的靶細(xì)胞，因此，在腫瘤免疫監(jiān)視和早期抗感染免疫過程中起重要作用。應(yīng)用NK細(xì)胞系成為腫瘤生物治療的重要手段，其中NK92細(xì)胞已經(jīng)進(jìn)入期臨床試驗(yàn)。為了克服NK細(xì)胞系在應(yīng)用中的某些不足，基因修飾已經(jīng)成為增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷活性的主要手段。迄今為止，已有IL2，IL15，SCF，CD20等多種基因用于修飾NK92細(xì)胞，取得重要進(jìn)展。為了獲得臨床應(yīng)用的NK細(xì)胞株，我們成功建立了IL15基因修飾的NKL細(xì)胞株，IL15基因修飾的NKL細(xì)胞株在低劑量IL2和IL15條件下表現(xiàn)出更強(qiáng)的增殖能力，并且在無血清饑餓狀態(tài)下表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗凋亡作用。進(jìn)一步研究表明，在IL15基因修飾的NKL細(xì)胞中，抗凋亡基因BCL2、BCLX1、MCL1表達(dá)水平顯著升高，凋亡基因BIM、NOXA、FAS的表達(dá)水平則降低。更為重要的是NKLIL15細(xì)胞不僅在體外能夠有效殺傷肝癌細(xì)胞HEPG2、H7402、PLCPRF5，亦能顯著增強(qiáng)體內(nèi)對(duì)裸鼠人肝癌移植瘤的抑制作用。這種抗腫瘤效應(yīng)與NKLIL15細(xì)胞IFNΓ、FASL和PERFIN基因的表達(dá)水平提高相關(guān)。因此，人IL15基因修飾的NKL細(xì)胞的生物學(xué)特征更有利于臨床過繼免疫治療的應(yīng)用。

簡介：獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的內(nèi)容以外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果，也不包含為獲得江蘇大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名石扦／LL≯0年蟈’歸學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書江蘇大學(xué)、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所、國家圖書館、中國學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社有權(quán)保留本人所送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致，允許論文被查閱和借閱，同時(shí)授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本論文編入中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫并向社會(huì)提供查詢，授權(quán)中國學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社將本論文編入中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫并向社會(huì)提供查詢。論文的公布包括刊登授權(quán)江蘇大學(xué)研究生院辦理。本學(xué)位論文屬于不保密妙／學(xué)位論文作者簽名J彳鐘沙心年。加6J白指導(dǎo)教師簽名尖鑰H夢移手

簡介：目的成纖維細(xì)胞FBS是參與創(chuàng)面愈合的主要細(xì)胞，可合成、分泌膠原蛋白、糖胺多糖等細(xì)胞外基質(zhì)和多種細(xì)胞因子。研究表明，在糖尿病難愈性創(chuàng)面中，F(xiàn)BS增殖能力較正常皮膚和糖尿病急性創(chuàng)面有很大削弱。故提高FBS的增殖能力可能是加速創(chuàng)面愈合的重要方法。糖尿病足潰瘍?cè)谥嗅t(yī)學(xué)屬脫疽范圍，黃芪具有托毒排膿，生肌止血，促進(jìn)壞死細(xì)胞重新生長的作用。臨床研究證實(shí)中藥黃芪可以促進(jìn)糖尿病足潰瘍創(chuàng)面愈合，但其機(jī)制不清楚。本研究利用黃芪多糖APS干預(yù)體外培養(yǎng)的糖尿病足潰瘍FBS，觀察黃芪多糖對(duì)體外培養(yǎng)的糖尿病足潰瘍FBS數(shù)量、形態(tài)及分泌增殖功能、細(xì)胞衰老的影響，從細(xì)胞的角度來探討黃芪多糖促進(jìn)潰瘍創(chuàng)面愈合的機(jī)制。方法1糖尿病足病截肢患者10例，均符合1999年WHO糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中男性6例女性4例，年齡57±82歲，其空腹血糖FBG94±16MMOLL，餐后2小時(shí)血糖P2BG142±24MMOLL，糖化血紅蛋白HBA91±10％，糖尿病足潰瘍病程超過4周，排除下肢靜脈性潰瘍。按WAGNER分級(jí)法在Ⅲ級(jí)6例，Ⅳ級(jí)4例。標(biāo)本取材于患者潰瘍邊緣及截肢最遠(yuǎn)端組織。正常對(duì)照者10例，取自年齡、性別等與前兩組基本相匹配的非糖尿病外傷及骨科截肢患者的手術(shù)切口，無系統(tǒng)性硬化病、腎病等疾病的病例。2取材后用組織塊法培養(yǎng)FBS，經(jīng)免疫組化抗波形蛋白和抗角蛋白染色，證實(shí)為FBS。46代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。3加入不同濃度的黃芪多糖分別為25UGML、10UGML、40UGML、160UGML、640UGML培養(yǎng)以觀察量效關(guān)系，其中160UGML分別培養(yǎng)07天以觀察時(shí)效關(guān)系。4利用MTT比色試驗(yàn)評(píng)價(jià)糖尿病足潰瘍FBS的增殖能力。5通過羥脯氨酸測定了解糖尿病足潰瘍FBS的膠原分泌功能。6利用Β半乳糖苷酶染色陽性率評(píng)價(jià)糖尿病足潰瘍FBS的老化情況。7TRAPPCR測定糖尿病足潰瘍FBS端粒酶活性。結(jié)果1FBS的鑒定培養(yǎng)的FBS6小時(shí)貼壁，呈多角形、長梭形，免疫組化鑒定結(jié)果顯示波形蛋白表達(dá)陽性，角蛋白表達(dá)陰性。2不同濃度的APS于預(yù)48小時(shí)后增加或減少FBS的數(shù)量。3不同濃度的黃芪多糖于預(yù)48小時(shí)后促進(jìn)或抑制FBS的增殖能力。4不同濃度的黃芪多糖干預(yù)48D時(shí)后增加或降低FBS的膠原分泌功能。5不同濃度黃芪多糖對(duì)FBS衰老情況的影響根據(jù)MTT法檢測成纖維細(xì)胞增殖的結(jié)果，得出黃芪多糖的最佳作用濃度及時(shí)間，由于Β半乳糖苷酶SABGAL染色陽性率隨細(xì)胞代齡增加而增加，本實(shí)驗(yàn)儀檢測黃芪多糖160UGML組濃度、第48代成纖維細(xì)胞PSAΒGAL酶染色陽性率。對(duì)照組、DFUS近端APS160UGML組、DFUS遠(yuǎn)端組、正常人組第6天成纖維細(xì)胞SAΒGAL染色陽性率分別為65±2％、45±3％、44±2％、5±1％，對(duì)照組、DFUS遠(yuǎn)端組、DFUS近端APS組成纖維細(xì)胞SAΒGAL染色陽性率明顯高于正常人；對(duì)照組成纖維細(xì)胞SAΒGAL染色陽性率高于DFUS近端APS組；DFUS遠(yuǎn)端成纖維細(xì)胞FBSSAΒGAL染色陽性率略低于DFUS近端APS組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。6糖尿病足潰瘍FBS端粒酶表達(dá)陰性結(jié)論糖尿病足潰瘍處成纖維細(xì)胞增殖能力、膠原合成能力減退，細(xì)胞衰老黃芪多糖在10UGML160UGML濃度范圍內(nèi)能增加體外培養(yǎng)的糖尿病足潰瘍成纖維細(xì)胞數(shù)量、促進(jìn)細(xì)胞增殖、增加膠原合成、延緩細(xì)胞衰老。

簡介：中南大學(xué)博士學(xué)位論文氯化鈷缺氧誘導(dǎo)對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響姓名劉祺申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)外科學(xué)（普通外科）指導(dǎo)教師李永國20050301博士學(xué)位論文中文摘要肉結(jié)醞癌緇照的生長情況，深入了解竣氧對(duì)縫疑辯癯生物學(xué)特性的影響。第一郝分缺氧誘導(dǎo)對(duì)SW480細(xì)驄生長特性的影峨目的；建立缺氧模型并觀察缺氧對(duì)SW480細(xì)胞增媳能力和化療附受的影響。方法利用氯化鈷COCL2構(gòu)建缺氧誘導(dǎo)模濺，以MTT試驗(yàn)觀察不簡程度缺氧條件對(duì)SW480細(xì)胞存活率，生長瞧線和胖瘸化療耐受的影響。結(jié)果1一定程度的缺氧氯化鈷濃度200UMO／1，可默刺激SW480綱脆增整，使辯數(shù)生長期提前；2靛氧誘導(dǎo)辯純療的影響沒有顯著性麓異，但有增加化療耐麓的趨勢。結(jié)論缺氧可戳裁激結(jié)揚(yáng)瓣癌纓魏璜疆，薺霹麓瓣瓣瘩綴藏純療其有一定蕊傈護(hù)終用。第二懿分缺氧對(duì)LTLFLA、SURVIVIN、1TO，1MRNA表達(dá)囂影響目的觀察缺氧對(duì)腫瘤細(xì)胞HIF1ET、SURVIVIN、HO。L基因MRNA表達(dá)麴影響。方法剩震RTPCR方法測定不闋濃度氯化鏈COCL2誘導(dǎo)缺氧和不同缺氧時(shí)間作用條件卜，SW480細(xì)胞陽田1A、SURVIVIN、HOL基因MRNA的表達(dá)。結(jié)采；1HIFLA、SURVIVIN、HO1基因MRNA表達(dá)隨著氯訖鈷濃度靜增加而增強(qiáng)，譬現(xiàn)比較臻強(qiáng)的劑量依賴性；2HIF1A和SURVIVIN基因MRNA表達(dá)猩缺氧誘導(dǎo)4H后出現(xiàn)離蜂，HO，1靜表達(dá)粼獠誘導(dǎo)辯闖的延長兩逐漸增強(qiáng)；渤HIFLA與SURVIVIN、1401基因MRNA的表達(dá)在缺氧誘導(dǎo)量效關(guān)系和時(shí)效關(guān)系中均存在顯著的正褪關(guān)性。緒論結(jié)合第一部分實(shí)驗(yàn)績采，本實(shí)驗(yàn)露得出以卜I結(jié)論1HIFLA可抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)增殖和增加化LL

簡介：點(diǎn)擊查看更多血小板裂解液對(duì)人間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：南方醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文肺腺癌細(xì)胞中TTF1的表達(dá)、突變分析及其轉(zhuǎn)染對(duì)GLC82細(xì)胞生物學(xué)行為的影響姓名周春輝申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師申洪20080518中文摘要160220區(qū)域有由60個(gè)氨基酸組成的具有絕對(duì)保守性的同源序列。在正常肺組織中，TTF1表達(dá)于成熟的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞和肺導(dǎo)氣部的支氣管上皮細(xì)胞的亞段，而I型肺泡上皮細(xì)胞始終不表達(dá)。TTFL控制著表面蛋白ASPA、表面蛋白BSPB、表面蛋白CSPC和CLARA細(xì)胞分泌蛋白CCSP的表達(dá)。到目前為止，TTF1是唯一控制4個(gè)肺特異性基因的轉(zhuǎn)錄因子。WILLEMSEN等的研究發(fā)現(xiàn)，一23歲男子因TTF1基因在859860位發(fā)生雜合性插入突變，導(dǎo)致舞蹈癥、智力發(fā)育遲緩、原發(fā)性甲狀腺機(jī)能減退以及慢性肺疾病。他們稱此疾病為腦一甲狀腺～肺綜合征。此患者最終死于肺大細(xì)胞癌。KANGY等在小鼠模型中發(fā)現(xiàn)，TTF一1表達(dá)減少與鼠肺癌的發(fā)生有關(guān)，但癌變的具體機(jī)制尚不清楚。因此，肺癌發(fā)生是否與TTF1基因異常表達(dá)有關(guān)受到廣大學(xué)者的關(guān)注。TTFL在肺癌中的研究表明，肺癌類型不同，TTF1的表達(dá)也各異。目前認(rèn)為，TTF1是肺腺癌和肺小細(xì)胞癌的標(biāo)志物。研究表明，除甲狀腺癌和肺腺癌外，TTF1很少表達(dá)于其它部位的原發(fā)腺癌或轉(zhuǎn)移腺癌。因此TTF一1對(duì)于胸腔積液中轉(zhuǎn)移性肺腺癌的鑒別診斷具有很高的應(yīng)用價(jià)值。但是關(guān)于TTF1在胸腔積液轉(zhuǎn)移性肺腺癌中表達(dá)的量變規(guī)律，其基因突變與原發(fā)灶1ITFI基因突變位點(diǎn)及類型是否相同，與肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移是否相關(guān)，其能否作為肺癌患者胸水中的腫瘤標(biāo)志物尚不十分清楚。因此本研究擬通過檢測T1FL蛋白及MRNA在惡性胸腔積液不同組織來源的轉(zhuǎn)移性腺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況，通過定量測試T1F一1蛋白和MRNA的表達(dá)強(qiáng)度，從蛋白及MRNA水平探討TTF1作為胸腔積液中轉(zhuǎn)移性肺腺癌特異性標(biāo)志物的臨床應(yīng)用價(jià)值；應(yīng)用PCRSSCP法與DNA測序相結(jié)合分析胸水轉(zhuǎn)移性肺腺癌細(xì)胞TTF1第L、2外顯子基因突變情況，探討TTF一1基因突變?cè)诜蜗侔┌l(fā)生、發(fā)展中的作用；構(gòu)建綠色熒光蛋白真核細(xì)胞表達(dá)載體PEGFPTTF一1，通過轉(zhuǎn)染人肺腺癌細(xì)胞系GLC82，觀察外源性TTF1基因表達(dá)對(duì)GLC一82細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。方法Ⅱ

簡介：華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文干細(xì)胞關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子OCT4在人膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及對(duì)人膀胱癌EJ細(xì)胞生物學(xué)的影響姓名萬鋒申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)泌尿外科指導(dǎo)教師朱朝輝20110420華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文3的的20倍，是正常膀胱組織的341倍，各組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005）；成功轉(zhuǎn)染OCT4SIRNA的膀胱癌EJ細(xì)胞RTPCR及WESTERNBLOT分別顯示OCT4MRNA和蛋白表達(dá)在相應(yīng)的癌細(xì)胞中明顯下降；與陰性對(duì)照組比較，細(xì)胞增殖明顯抑制P005；同時(shí)細(xì)胞凋亡率增加（5273比117）；RNA干擾組明顯抑制EJ細(xì)胞遷移力和侵襲力1534185比6307173。結(jié)論結(jié)論OCT4的表達(dá)與膀胱癌的分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)但與臨床分期無關(guān)，OCT4的過高表達(dá)可能在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用；OCT4SIRNA可以有效地抑制膀胱癌EJ細(xì)胞OCT4基因的表達(dá)，從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞遷移和侵襲，OCT4SIRNA有效的調(diào)控EJ細(xì)胞惡性生物學(xué)行為。【關(guān)鍵詞】關(guān)鍵詞】膀胱移行細(xì)胞癌；RNA干擾；OCT4基因；膀胱癌EJ細(xì)胞；

簡介：目的研究銀屑病皮膚間充質(zhì)干細(xì)胞SKINDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLS，SMSCS生物學(xué)特性，進(jìn)一步分析銀屑病SMSCS基因表達(dá)譜，了解銀屑病患者皮損微環(huán)境中SMSCS變化，為SMSCS參與銀屑病發(fā)病提供理論依據(jù)。方法應(yīng)用酶消化法分離培養(yǎng)銀屑病組與正常對(duì)照組SMSCS，并傳代、擴(kuò)增，收集第3代SMSCS及其培養(yǎng)上清液，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞免疫表型，分別用成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)體系鑒定細(xì)胞多系分化能力，細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制第3代細(xì)胞生長增殖曲線，ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中EGF、TGFΒ1濃度。應(yīng)用基因芯片技術(shù)對(duì)其MRNA表達(dá)譜進(jìn)行差異基因篩選。RTPCR法對(duì)銀屑病SMSCS部分差異表達(dá)基因進(jìn)行驗(yàn)證分析。結(jié)果①細(xì)胞形態(tài)學(xué)特性倒置相差顯微鏡下觀察銀屑病組與正常對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)均存在異質(zhì)性。②細(xì)胞表面標(biāo)志物測定流式細(xì)胞儀檢測第3代培養(yǎng)細(xì)胞表面抗原CD29、CD44、CD73、CD90及CD105呈高表達(dá)，CD34、CD45及HLADR呈低表達(dá)。③細(xì)胞多向分化潛能測定第3代培養(yǎng)細(xì)胞成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)14D，分別用油紅O、茜素紅S、甲苯胺藍(lán)染色鑒定脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞及軟骨細(xì)胞，結(jié)果均為陽性。④細(xì)胞增殖能力檢測細(xì)胞生長增殖曲線顯示銀屑病組第3代細(xì)胞增殖速度快于正常對(duì)照組。⑤分泌細(xì)胞因子（表皮生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子Β1）水平測定ELISA試劑盒檢測到銀屑病組SMSCS分泌EGF水平高于對(duì)照組P＜005，分泌TGFΒ1水平低于對(duì)照組P＜005。⑥基因譜差異表達(dá)分析銀屑病組與正常對(duì)照組SMSCS基因表達(dá)譜顯著不同，共篩選出1927個(gè)差異表達(dá)基因1090個(gè)基因表達(dá)呈增高趨勢，837個(gè)基因呈降低趨勢其中銀屑病組UHRF1的MRNA水平呈高表達(dá)狀態(tài)（P＜005）。結(jié)論①本實(shí)驗(yàn)建立了穩(wěn)定的銀屑病SMSCS體外分離、培養(yǎng)、鑒定方法，銀屑病組與正常對(duì)照組SMSCS均存在異質(zhì)性②銀屑病SMSCS生物學(xué)活性存在異常③銀屑病SMSCS差異表達(dá)基因分析顯示UHRF1的MRNA水平呈高表達(dá)。表達(dá)上調(diào)的UHRF1可能與銀屑病SMSCS生物學(xué)特性異常有關(guān)。

簡介：SOOCHOWUNIVERSITY碩士學(xué)位論文論文題目中強(qiáng)度靜磁場對(duì)腫瘤細(xì)胞生長的生物學(xué)效應(yīng)研究研究生姓名張磊指導(dǎo)教師姓名車軼專業(yè)名稱發(fā)育生物學(xué)研究方向胚胎發(fā)育與功能調(diào)控論文提交日期2013年4月中強(qiáng)度靜磁場對(duì)腫瘤細(xì)胞生長的生物學(xué)效應(yīng)研究中強(qiáng)度靜磁場對(duì)腫瘤細(xì)胞生長的生物學(xué)效應(yīng)研究中文摘要中文摘要I中文摘要目的探討中強(qiáng)度靜磁場對(duì)鼠黑色素瘤細(xì)胞B16和人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251生長的生物學(xué)效應(yīng)，為磁場在腫瘤疾病的治療中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法本實(shí)驗(yàn)分三個(gè)部分研究中強(qiáng)度靜磁場對(duì)B16和U251生長的影響。1采用MTT法測定經(jīng)50200MT靜磁場暴露48H和72H后的細(xì)胞存活率，檢測靜磁場暴露對(duì)細(xì)胞活力的影響。2利用流式細(xì)胞術(shù)測定靜磁場暴露48H內(nèi)的細(xì)胞周期分布情況，探討靜磁場影響腫瘤細(xì)胞生長的機(jī)制。3利用生物化學(xué)方法測定靜磁場暴露48H內(nèi)與細(xì)胞氧化防御系統(tǒng)相關(guān)的蛋白酶活性及抗氧化劑水平，檢測靜磁場對(duì)腫瘤細(xì)胞代謝過程的影響，探討其與靜磁場影響腫瘤細(xì)胞生長的機(jī)制的關(guān)聯(lián)。結(jié)果1對(duì)B16和U251進(jìn)行短時(shí)間50200MT靜磁場暴露，可以抑制細(xì)胞生長，但隨著暴露時(shí)間延長，又轉(zhuǎn)為促進(jìn)作用。2100MT和200MT靜磁場暴露對(duì)B16和U251的細(xì)胞周期分布沒有影響。3100MT和200MT靜磁場暴露48H后，B16和U251的GST活性和GSHGSSG水平表現(xiàn)為先上升后下降；SOD活性和TAOC能力先下降后上升；CAT活性基本沒有受到影響。結(jié)論中強(qiáng)度靜磁場可以抑制B16和U251的生長，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激。關(guān)鍵詞中強(qiáng)度靜磁場；腫瘤細(xì)胞；細(xì)胞周期；生長；氧化應(yīng)激作者張磊指導(dǎo)教師車軼

簡介：研究背景腎細(xì)胞癌是泌尿系統(tǒng)常見惡性腫瘤早期腎癌以外科手術(shù)切除為主而晚期轉(zhuǎn)移腎癌因?qū)Ψ?、化療不敏感目前以靶向治療及輔助治療為主。然而多項(xiàng)多中心III期臨床實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)目前的腎癌靶向藥物針對(duì)晚期腎癌患者還存在完全緩解率低的問題臨床療效尚不能令人滿意尋找新的腎癌藥物靶點(diǎn)成為當(dāng)前迫切需解決的問題。果蠅ZESTE基因增強(qiáng)子的人類同源物2ENHANCEROFZESTEHOMOLOG2EZH2是一種轉(zhuǎn)錄抑制因子可明顯抑制抑癌基因或腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)最新研究表明EZH2參與了腎癌的發(fā)生、發(fā)展但其具體作用機(jī)制仍不明。RUNX3是RUNT家族的核心成員RUNX3基因是TGFΒ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路下游的一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子參與TGFΒ介導(dǎo)的生長抑制作用研究表明RUNX3的缺失或失活與乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌和胃癌等腫瘤的發(fā)生相關(guān)通過CHIP實(shí)驗(yàn)證實(shí)在這些腫瘤中EZH2可結(jié)合于RUNX3的啟動(dòng)子區(qū)從而抑制其表達(dá)RUNX3是EZH2的直接調(diào)控靶分子。然而其在腎癌中是否有相同作用還有待進(jìn)一步明確。目的研究EZH2與腎癌臨床病理間的關(guān)系通過體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)明確EZH2對(duì)腎癌細(xì)胞生物學(xué)作用的影響同時(shí)通過尋找EZH2下游的靶基因以明確其具體的調(diào)控機(jī)制。方法通過免疫組化學(xué)法、實(shí)時(shí)定量PCR法和免疫印跡法分別檢測臨床腎癌標(biāo)本中EZH2在蛋白水平和MRNA水平的表達(dá)情況及與腎癌臨床病理間的關(guān)系。運(yùn)用RNA干擾技術(shù)沉默EZH2后先以QRTPCR和WESTERNBLOT法在MRNA水平和蛋白水平驗(yàn)證EZH2下調(diào)情況再通過MTT實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)檢測EZH2下調(diào)后對(duì)腎癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響。并通過QRTPCR法檢測EZH2下游分子RUNX3的表達(dá)情況。結(jié)果EZH2和RUNX3蛋白在腎癌組織中的陽性表達(dá)率分別為679％和375在癌旁正常腎組織的陽性表達(dá)率分別為286和673EZH2和RUNX3在腎癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005。SPEARMAN相關(guān)分析顯示二者在腎癌中的表達(dá)呈明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系。EZH2表達(dá)下調(diào)后腎癌細(xì)胞的增殖明顯受抑制凋亡細(xì)胞明顯增多差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義同時(shí)下游分子RUNX3的表達(dá)與EZH2呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論EZH2通過調(diào)控下游分子RUNX3的表達(dá)參與腎癌的發(fā)生、發(fā)展EZH2可能成為新的腎癌治療靶點(diǎn)并為新的靶向藥物研究提供了重要的理論依據(jù)。

簡介：目的觀察TOLL樣受體4在乙肝病毒相關(guān)肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)及對(duì)其生物學(xué)活性的影響。方法1、WESTERNBLOT檢測HEP3B、HEPG2215、HEPG2、SMMC7721及HUH7五種肝癌細(xì)胞中TLR4蛋白表達(dá)情況，選擇TLR4表達(dá)高的HBV陽性肝癌細(xì)胞作為研究對(duì)象。2、構(gòu)建4個(gè)MIRTLR4質(zhì)粒和一個(gè)陰性對(duì)照質(zhì)粒，選擇干擾效果明顯的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染TLR4表達(dá)高的HBV陽性肝癌細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組，陰性對(duì)照組，干擾質(zhì)粒3組及干擾質(zhì)粒4組。通過MTT比色法、克隆平板形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)分別檢測干擾TLR4表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、克隆形成、周期及凋亡的影響。結(jié)果1、TLR4基因在五種肝癌細(xì)胞株中均有表達(dá)，在HEP3B細(xì)胞中表達(dá)最高，其次是SMMC7721、HEPG2215和HEPG2細(xì)胞，而在HUH7細(xì)胞中表達(dá)最低。2、與正常組和陰性對(duì)照組相比，干擾TLR4表達(dá)后，HEP3B細(xì)胞的增殖能力明顯受到抑制P＜005，克隆形成率顯著下降P＜005，S、G2期細(xì)胞比列明顯增加P＜005、G1期細(xì)胞比例減少P＜005，并可促進(jìn)細(xì)胞凋亡P＜005。結(jié)論1、乙肝病毒相關(guān)肝癌細(xì)胞中TLR4表達(dá)上調(diào)。2、在體外干擾TLR4表達(dá)后，HEP3B細(xì)胞系增殖及周期受影響，具體表現(xiàn)為MTT示生長、增殖受限，克隆率下降，凋亡增加，周期阻滯于G2M期。

簡介：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文S100P在人結(jié)直腸癌中表達(dá)的臨床意義及其對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響姓名張?jiān)聦幧暾?qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)內(nèi)科學(xué)消化指導(dǎo)教師魯重美陳原稼20060601中國協(xié)和醫(yī)科人學(xué)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士研究生學(xué)位論文RAGERNASESDSTEMEDTHSWBXGALRECEPTORFORADVANCEDGLYCATIONEND晚期糖基化終產(chǎn)物受體PRODUCTSRIBONUCLEASESODIUMDODECYLSULFATENNN2NTETRAMETHYLETHYLENEDIAMINETRISHYDROXYMETHYLAMINOMETHANEWESTERNBLOWING5BROMO4一CHLORO3INDOLYLD_DGALACTOSIDE2核糖核酸酶十二烷基磺酸鈉N，N，N，NL一四甲基乙二胺三羥甲基氨基甲烷免疫印跡5溴4氯3吲哚一13D一半乳糖苜

簡介：中樞神經(jīng)系統(tǒng)CNS是由神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞組成。近年來CNS中發(fā)現(xiàn)一類新的膠質(zhì)細(xì)胞類型，依據(jù)其表達(dá)NG2硫酸軟骨素多聚糖蛋白的特性，命名為少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞OPCS。一般認(rèn)為OPC屬于少突膠質(zhì)細(xì)胞系，但是不表達(dá)成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞OL的蛋白標(biāo)記。體外培養(yǎng)條件下證實(shí)OPCS也能分化為神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞AST，因而認(rèn)為這類細(xì)胞可能是一種多潛能的干細(xì)胞。在神經(jīng)元軸突髓鞘化形成前，OPCS在CNS廣泛遷移。盡管OPCS可以分化成為成髓鞘的OL，但是在成熟CNS仍有大量未分化的OPCS保持這種不成熟的狀態(tài)。這需要重新認(rèn)識(shí)其細(xì)胞性質(zhì)、與CNS其它細(xì)胞的關(guān)系、以及在前體細(xì)胞之外的功能。許多實(shí)驗(yàn)證實(shí)OPCS在是一種反應(yīng)性膠質(zhì)細(xì)胞，可能在維持神經(jīng)功能和損傷修復(fù)中有作用，從而認(rèn)為，OPCS可能是OL、AST之外大膠質(zhì)細(xì)胞，但是尚缺乏形態(tài)學(xué)和細(xì)胞學(xué)證據(jù)。OPCS可以與谷氨酸能和GABA能神經(jīng)元形成直接的突觸聯(lián)系，可以接受突觸前神經(jīng)元信號(hào)。和神經(jīng)元之間的突觸結(jié)構(gòu)類似，神經(jīng)元OPCS之間的突觸也具有雙脈沖易化現(xiàn)象LTP現(xiàn)象。但是仍不清楚突觸后OPCS不能進(jìn)行信息持續(xù)傳遞的原因。作為少突膠質(zhì)系的OPCS，在缺氧缺血性腦損傷HIBD中細(xì)胞的變化以及在腦損傷的反應(yīng)也不清楚。因此，本文首先應(yīng)用免疫組化技術(shù)研究NG2標(biāo)記的OPCS在正常成年CNS的定位和表達(dá)模式。然后觀察圍生期OPCS的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)及HIBD后的變化。最后觀察生后不同階段，OPCS形態(tài)學(xué)和電生理學(xué)的特點(diǎn)。主要得到以下結(jié)果1OPCS廣泛分布于CNS各腦區(qū)。海馬、白質(zhì)和灰質(zhì)細(xì)胞形態(tài)有差異。在灰質(zhì)OPCS主要分布于非神經(jīng)元層，細(xì)胞呈星形，突起向四周發(fā)散，突起長度多在1040ΜM。與此對(duì)應(yīng)的是，白質(zhì)OPCS胞體狹長，并行的突起向胞體兩極發(fā)出，與神經(jīng)元軸突走向一致。突起長度多在2050ΜM，比灰質(zhì)細(xì)胞稍長。細(xì)胞密度在部分腦區(qū)有集中分布，但是灰質(zhì)與白質(zhì)無顯著差異。2OPCS表現(xiàn)與神經(jīng)元和AST不同的電生理特性。海馬CA1區(qū)輻射層的OPCS有小的內(nèi)向NA電流，大的外向K電流和延遲整流K電流。OPCS表現(xiàn)和神經(jīng)元類似的電壓依賴性NA電流，但是不能在去極化電流刺激下產(chǎn)生動(dòng)作電位。OPCS具有比AST更高的輸入阻抗RIN，但是在靜息水平對(duì)K仍有較大的通透性。在電流鉗模式下，OPCS表現(xiàn)有非線性膜電位反應(yīng)。而AST則僅有被動(dòng)膜電位反應(yīng)。在白質(zhì)和海馬OPCS的靜息電位、膜阻抗和膜電容也不一致。3圍生期缺氧缺血2H，海馬OPCS顯示更活躍的細(xì)胞膜去極化反應(yīng)。細(xì)胞膜特征參數(shù)也有顯著變化，包括膜電容和膜阻抗增加，而靜息電位降低至超極化的水平。瞬時(shí)外向鉀電流和內(nèi)向整流鉀電流幅度增加，而延遲整流鉀電流減少。在不同的刺激模式下，OPCS表現(xiàn)的電流模式?jīng)]有明顯改變，但是電壓依賴性離子通道動(dòng)力學(xué)特性有顯著改變，表現(xiàn)在NA電流、瞬時(shí)外向K電流和尾電流激活加快，幅度增加。應(yīng)用BOLTZMANN擬合各電壓依賴離子通道的半激活電壓和激活斜率因子，均表明HIBD后OPCS興奮性增強(qiáng)。NAK電導(dǎo)率的變化也是如此。然而AST和神經(jīng)元?jiǎng)t不表現(xiàn)如此顯著變化。4OPCS持續(xù)表達(dá)于CNS生后不同發(fā)育時(shí)期。在生后7D海馬和白質(zhì)的OPCS即可以發(fā)出許多分支的突起，而且細(xì)胞數(shù)量在各生后時(shí)期最高。蛋白表達(dá)水平也是如此。由新生發(fā)育至成年，OPCS突起逐漸增加數(shù)量、豐富、分支復(fù)雜、長度增加。電生理特性也顯示隨發(fā)育而呈現(xiàn)瞬時(shí)外向K電流和延遲整流K電流均有增加，但是NA隨發(fā)育成熟增加得更明顯，因此NAK電導(dǎo)率也隨著發(fā)育成熟而增加。發(fā)育至成年，雖然去極化反應(yīng)有所增加，但是NAK電導(dǎo)率遠(yuǎn)小于神經(jīng)元，因而OPCS仍然不能產(chǎn)生細(xì)胞膜動(dòng)作電位反應(yīng)，屬于非興奮細(xì)胞?？傊狙芯繌亩鄠€(gè)方面支持認(rèn)為OPCS可以作為CNS另一類大膠質(zhì)細(xì)胞1生后發(fā)育中突起增長、分支豐富顯示形態(tài)學(xué)的復(fù)雜性；2膜電容和NAK電導(dǎo)比率隨發(fā)育成熟而增加；3獨(dú)特的細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)和在HIBD中的早發(fā)性反應(yīng)；4與神經(jīng)元和AST不同的形態(tài)學(xué)和電生理學(xué)特征。