簡(jiǎn)介：分類號(hào)B塑2魚(yú)UDC重慶醫(yī)科大學(xué)密級(jí)碩士學(xué)位論文論文題目不同轉(zhuǎn)移潛能喉癌細(xì)胞株的分離及生物學(xué)特性比較作者姓名傅然指導(dǎo)教師姓名職稱、單位名稱胡國(guó)華教授重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院重慶市渝中區(qū)友誼路1號(hào)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士學(xué)科、專業(yè)名稱耳鼻咽喉科學(xué)論文答辯年月2010年5月2010年5月目錄英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照1中文摘要。2英文摘要4論文正文不同轉(zhuǎn)移潛能喉癌細(xì)胞株的分離及生物學(xué)特性比較6第一部分喉癌細(xì)胞系HEP2中不同轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞的分離71材料與方法72結(jié)J冪9I‘I寸論94，J、結(jié)11第二部分不同轉(zhuǎn)移潛能的細(xì)胞生物學(xué)特性檢測(cè)121材料與方法122結(jié)果183討論204，J、結(jié)2L全文總結(jié)。23參考文獻(xiàn)24PFFI蜀28文獻(xiàn)綜述3L蛩定謝。44攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文。45

簡(jiǎn)介：蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文RNAI沉默GALECTIN1基因?qū)Ω伟┘?xì)胞生物學(xué)行為的影響姓名張暉漢申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)外科學(xué)指導(dǎo)教師張有成20100501EFFECTSOFSILENCINGGALECTIN1GENEBYRNAIONTHEBEHAVIOROFHEPATOCYTECARCINOMACELLSABSTRACTOBJECTIVESTOESTABLISHTHEEXPERIMENTCONDITIONOFRNAINTERFERENCETOGALECTIN_1MRNAANDINVESTIGATETHEROLESOFGALECTIN1INTHEREGULATIONOFCELLBIOLOGICALBEHAVIOUROFHEPATOCYTECARCINOMACELLSMETHODSHUMANHEPATOCYTECARCINOMACELLSOFHEPG2WASCULTUREDAT37℃INAC02INCUBATORSPECIALSTEALTHRNAIWASTRANSFECTEDTOHEPATOCYTECARCINOMACELLSTESTRAINTHEEXPRESSIONOFGALECTIN1MRNARTPCRWASUSEDTOTESTTHESILENCINGRATEOFGALECTIN1GENEEXPRESSIONFLOWCYTOMETRYWASUSEDTOEXAMINETHEAPOPTOSISOFHEPG2CELLTHECELLPROLIFERATIONWASEXAMINEDBYMTIASSAYANDTHEINVASIONABILITYWASTESTEDBYMILLICELLCHAMBERSRESULTSAFTERTHETRANSFECTIONFOR48AND72HOURS，COMPAREDTOTHEBLANKCONTROL，THEEXPRESSIONOFGALECTIN1MRNAINHEPG2CELLSDECREASEDTO157％AND123％THECELLPROLIFERATIONRATEWASREDUCEDTO572％ANDTHENUMBEROFCELLSUNDERGOINGAPOPTOSISSIGNIFICANTLYINCREASEDTO225％AFTERTHETRANSFECTIONFOR48HOURSMEANWHILE，THEGALECTIN1MRNAEXPRESSIONRESTRAININGALSESULTEDINANINHIBITIONOFCELLMIGRATIONRATETO531％CONCLUSIONRNAINTERFERENCEBASEDONSIRNACANEFFECTIVELYINHIBITGALECTIN1GENEEXPRESSIONINHEPG2CELLSSILENCINGGALECTIN1GENEHASAN、一一澎鬻、，～

簡(jiǎn)介：分類號(hào)學(xué)號(hào)D200878196學(xué)校代碼10487密級(jí)博士學(xué)位論文ATDC在大腸癌中的表達(dá)及其臨床意義和對(duì)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響學(xué)位申請(qǐng)人鄧軍學(xué)科專業(yè)外科學(xué)（普外）指導(dǎo)教師王國(guó)斌教授答辯日期2012年5月

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多人臍帶來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究及其對(duì)移植物抗宿主病作用的初步探討.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：四川大學(xué)碩士學(xué)位論文大鼠牙囊細(xì)胞體外培養(yǎng)方法的改良及生物學(xué)特性的初步研究姓名葉國(guó)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師吳亞菲20070501聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得四川大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。本學(xué)位論文是本人在四川大學(xué)讀書(shū)期間在導(dǎo)師指導(dǎo)下取得的，論文成果歸四川大學(xué)所有，特此聲明。申請(qǐng)人指導(dǎo)教師Ⅻ卞閨P＼學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解四川大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)四川大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。學(xué)位論文作者簽名V十閨導(dǎo)師簽名≯，一1’簽字目期年月日簽字日期年月日＼學(xué)位論文作者畢業(yè)后去向、工作單位通訊地址聯(lián)系方式郵政編碼

簡(jiǎn)介：分類號(hào)學(xué)號(hào)M200975221學(xué)校代碼10487密級(jí)碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文下調(diào)下調(diào)PMS2基因后基因后A2780細(xì)胞細(xì)胞體外生物學(xué)功能的研究體外生物學(xué)功能的研究學(xué)位申請(qǐng)人劉子昳學(xué)科專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師王澤華教授答辯日期2012年4月獨(dú)創(chuàng)性聲明獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明，本學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果的總結(jié)。盡我所知，除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果。對(duì)本文的研究做出貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本人將承擔(dān)本聲明引起的一切法律后果。學(xué)位論文作者簽名日期年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在_____年解密后適用本授權(quán)書(shū)。本論文屬于不保密□。（請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期年月日日期年月

簡(jiǎn)介：上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文靶向PEROXIREDOXINⅠ/Ⅱ誘導(dǎo)白血病細(xì)胞分化的化學(xué)生物學(xué)研究姓名劉傳緒申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師陳國(guó)強(qiáng)20120428上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文劉傳緒靶向PEROXIRCDOXINI／II誘導(dǎo)白血病細(xì)胞分化的化學(xué)生物學(xué)研究IC50，1．5HM和PRXII表面IC50，15¨M過(guò)氧化物酶的活性。進(jìn)一步的分子動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)表明腺花素與PRXI結(jié)合強(qiáng)于與PRXII結(jié)合。6在維甲酸敏感及耐藥的急性早幼粒白血病細(xì)胞中，腺花素能很快上調(diào)C／EBPL3的轉(zhuǎn)錄水平及蛋白水平。C／EBPL3作為造血系統(tǒng)中的重要轉(zhuǎn)錄因子在髓系分化中發(fā)揮了重要作用。干擾PRXI或PRXII出現(xiàn)同樣效應(yīng)。與體外抑帶LJPRXFII酶活相一致的是腺花素在細(xì)胞內(nèi)引起中度H202上調(diào)。H202的清除劑N．乙酰．L．半胱氨酸可以完全阻斷腺花素誘導(dǎo)的白血病細(xì)胞分化及C／EBPL3的A2調(diào)。我們也發(fā)現(xiàn)中度H202上調(diào)可以快速活化ERKL／2，且ERKL／2的特異性抑制劑PD98059也可以阻斷腺花素誘導(dǎo)的白血病細(xì)胞分化及C／EBPIB的上調(diào)。于是我們提出PRXI／IIH202．ERKL／2．C／EBPL3信號(hào)通路參與腺花素誘導(dǎo)白血病細(xì)胞分化?？偵纤?，我們的研究報(bào)道腺花素作為第一個(gè)開(kāi)發(fā)PRXI／II靶向治療藥物的天然產(chǎn)物，且PRXI／II在急性早幼粒白血病的發(fā)病學(xué)及治療學(xué)存在重要的研究?jī)r(jià)值。關(guān)鍵詞腺花素，急性早幼粒性白血病，細(xì)胞分化，化學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)，過(guò)氧化還原酶I和II，過(guò)氧化氫2

簡(jiǎn)介：河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文四個(gè)H22克隆細(xì)胞株的RAPD特征及H22H8D8傳代細(xì)胞的生物學(xué)特性研究姓名王險(xiǎn)峰申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師劉福英20060301中文摘要RANDOMAMPLIFIEDPOLYMORPHICDNA，RAPD可適用于任何一種未知基因核苷酸序列的生物學(xué)研究，并且它能客觀地反映生物整個(gè)基因組的特征。近年來(lái)已有大量應(yīng)用RAPD技術(shù)研究物種遺傳多樣性的報(bào)道，但運(yùn)用RAPD技術(shù)研究腫瘤細(xì)胞株遺傳特性的報(bào)道尚不多見(jiàn)。本研究擬從47條引物中篩選出能夠較好的區(qū)分4個(gè)H22克隆細(xì)胞株的特異性引物，以對(duì)4個(gè)122克隆細(xì)胞株進(jìn)行R鉀D特征分析研究。同時(shí)建立腫瘤動(dòng)物模型，從體內(nèi)、體外兩方面觀察比較H22H8D8傳代細(xì)胞的遺傳穩(wěn)定性。為進(jìn)一步比較分析其遺傳背景提供基礎(chǔ)資料。方法一、選用47條隨機(jī)引物對(duì)4個(gè)克隆細(xì)胞株H22H8D8、H22H2C4、H2212G4、H22一H2E10進(jìn)行凡心D特征的分析研究。1腫瘤細(xì)胞的復(fù)蘇、培養(yǎng)從液氮罐中取出凍存管，迅速置于38℃水浴使其融化；無(wú)菌操作下取出細(xì)胞懸液至離心管中，補(bǔ)加10M1GKN液，1000轉(zhuǎn)／分離心5分鐘，去除上清液，重復(fù)一次該步驟。用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后移入培養(yǎng)瓶中，置于5℃C02培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液；按12的比例傳代細(xì)胞，傳代間隔一般是1次／天。2基因組DNA的制備用傳代細(xì)胞系作供體細(xì)胞，集細(xì)胞總數(shù)在L108個(gè)，用PBS液洗滌及TE緩沖液重懸細(xì)胞，加入DNA裂解液，55℃過(guò)夜，TRIS飽和酚及氯仿異戊醇241分別抽提，然后加入醋酸鈉及無(wú)水乙醇沉淀得到基因組DNA，75％的乙醇洗滌后，TE溶解備用。3RAPD特征分析應(yīng)用47條引物對(duì)4個(gè)H22細(xì)胞克

簡(jiǎn)介：中圖分類號(hào)R78學(xué)科代號(hào)100302Y979881單位代碼10661研究生學(xué)號(hào)2003094基舞爭(zhēng)擎瓏碩士研究生畢業(yè)論文凍存對(duì)骨髓基質(zhì)細(xì)胞生物學(xué)特性影響的實(shí)驗(yàn)研究EFFECTSOFCRYOPRESERVATIONCONDITIONOILTHEBIOLOGICALPROPERTIESOFBONEMARROWSTROMALCELLS研究生李厚軒專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)口腔內(nèi)科學(xué)導(dǎo)師劉建國(guó)教授閆福華教授指導(dǎo)小組陳超副教授陳群講師研究起止時(shí)間2004年9月至2006年4月二0O六年四月中國(guó)遵義凍存對(duì)骨衄基質(zhì)細(xì)胞生物學(xué)特性影響的實(shí)驗(yàn)研究PDGFPETPGAPLAPLGAPRPEPRRFERANKLRPTCPTGFVEGFPLATELETDERIVEDGROWTHFACTORPOLYETHYLENETEREPHTHALATEPOLYGLYCOLIDEPOLYLACTIDEPOLYLACTIDECOGLYCOLIDEPLATELETRICHPLASMAEPOLYTETRAFLUOROETHYLENERECEPTORACTIVATOROFNFKAPPABLIGANDRAPIDPROTOTYPINGTRICALCIUMPHOSPHATETRANSFORMINGGROWTHFACTORVASCULARENDOTHELIALGROWTHFACTOR3血小板衍生生長(zhǎng)因子聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯聚羥基乙酸聚乳酸聚乳酸羥基乙酸富血小板血漿聚四氟乙烯KB受體活化因子配基快速模板磷酸三鈣轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子

簡(jiǎn)介：分類號(hào)基§塑2￡基Z2§2．．．．一一UDC密級(jí)博士學(xué)位論文胃癌SGC．7901細(xì)胞株側(cè)群細(xì)胞分選及生物學(xué)特性的論文題目墊壟塹窒作者姓名鎣鏊一一指導(dǎo)教師姓名職稱、單位名稱墨塵塑墼堡重鏖匡型盔堂墮星篁三醫(yī)墮迫垡凼型一一申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士學(xué)科、專業(yè)名稱內(nèi)科學(xué)論文答辯年月三壁蘭堡苧旦一一2013年5月目錄英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照??????????????????????????1中文摘要???????????????????????????????。3英文摘要????????????????????????．．．??????．5論文正文胃癌SGC．7901細(xì)胞株側(cè)群細(xì)胞分選及生物學(xué)特性的初步研究????7前言????????????????????????????????????????．7第一部分胃癌SGC．7901細(xì)胞株側(cè)群細(xì)胞分選及生物學(xué)特性的研究????。121．材料???????????????????????????????????????122．方法???????????????????????．．．???????????????143．結(jié)果???????????????????????????????????????174．討論???????????????????????????????????????22第二部分胃癌側(cè)群細(xì)胞耐藥性研究及干細(xì)胞相關(guān)基因檢測(cè)????????。251．材料??????????????????????????????252．方法???????????????????????????????????????273．結(jié)果???????????????????????????????????????334．討論??????????????????????????????????????．38全文總結(jié)??????????????????????????????．．41參學(xué)文獻(xiàn)?????．?????????????????????????．42文獻(xiàn)綜述??????????????????????????????．．47致謝??????????????????????????????????????????．．63博士期間發(fā)表的論文?????????????????????????．64

簡(jiǎn)介：四川大學(xué)博士學(xué)位論文TIMP2基因轉(zhuǎn)染對(duì)C6膠質(zhì)瘤干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響姓名肖其華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)外科學(xué)（神外）指導(dǎo)教師毛伯鏞20070401聲明秉承學(xué)校嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶W(xué)風(fēng)與優(yōu)良的科學(xué)道德，本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他入已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，不包含本人或他人已申請(qǐng)學(xué)位或其他用途使用過(guò)的成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了致謝。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本入承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽導(dǎo)師簽名

簡(jiǎn)介：胚胎干細(xì)胞來(lái)源于胚胎時(shí)期囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，是一種多潛能的干細(xì)胞，能在體外進(jìn)行長(zhǎng)期的自我更新，在體內(nèi)外可以分化為三個(gè)胚層來(lái)源的各種細(xì)胞類型，因而在基礎(chǔ)研究和臨床治療中都有很好的應(yīng)用前景。APODEMUSSYLVATICUS是一種嚙齒類動(dòng)物，與小鼠在進(jìn)化方面兩者差距比較大，與大鼠和小鼠之間的遺傳差距相近。本研究建立了了APODEMUSSYLVATICUS的胚胎干細(xì)胞系，命名為ASES1，具有24對(duì)染色體，能在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)傳代中保持未分化狀態(tài)，在體外自然分化能形成胚體，注射于裸鼠皮下能形成畸胎瘤。該細(xì)胞系表達(dá)多種多能性的分子標(biāo)記，包括堿性磷酸酶、OCT4、NANOG和REX1，但是不表達(dá)SSEA1，SSEA3，SSEA4，TRA160和GCTM2。本研究還成功將GFP和DSRED兩種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染該細(xì)胞系，同時(shí)細(xì)胞仍保持增殖和分化潛能，并用RNA干擾技術(shù)滅活上述兩種基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，證明該細(xì)胞系能進(jìn)行基因操作。ASES的建立為APODEMUSSYLVATICUS發(fā)育和遺傳的研究提供重要的工具，使APODEMUSSYLVATICUS有望成為研究基因功能的新的模式動(dòng)物。本實(shí)驗(yàn)包括兩個(gè)部分1、APODEMUSSYLVATICUS胚胎干細(xì)胞系的建立2、APODEMUSSYLVATICUS胚胎干細(xì)胞系的生物學(xué)特性分析第一部分APODEMUSSYLVATICUS胚胎干細(xì)胞系的建立材料和方法11動(dòng)物飼養(yǎng)APODEMUSSYLVATICUS的飼養(yǎng)條件于小鼠相似，包括飲食、溫度等。12胚胎干細(xì)胞系的建立使用79周的APODEMUSSYLVATICUS進(jìn)行交配。取受精后35天母鼠的子宮，用M2培養(yǎng)液沖洗并收集囊胚，然后接種于預(yù)先接種好的放射后的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞作為飼養(yǎng)層細(xì)胞的24孔板中。囊胚在培養(yǎng)12天后，胚胎會(huì)從透明帶孵出，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)明顯增殖長(zhǎng)大，繼續(xù)培養(yǎng)34天，然后挑取增殖的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)消化吹打成單個(gè)細(xì)胞，接種于新的飼養(yǎng)層細(xì)胞上。47天后即可以觀察到未分化的胚胎干細(xì)胞克隆的生長(zhǎng)。培養(yǎng)條件為37℃，5％CO2和95％濕度。結(jié)果從受精35天的母鼠子宮中獲得5個(gè)囊胚，其中的一個(gè)幾天后長(zhǎng)出大量的類似小鼠胚胎干細(xì)胞的克隆。這些克隆成圓形，邊界清楚?？寺?nèi)的細(xì)胞排列緊密，核漿比例高，有明顯的核仁，命名為ASES1。白血病抑制因子和飼養(yǎng)層細(xì)胞能夠保持培養(yǎng)細(xì)胞的未分化狀態(tài)，這與小鼠的胚胎干細(xì)胞類似。結(jié)論成功從嚙齒類動(dòng)物APODEMUSSYLVATICUS的囊胚獲得了一種新的胚胎干細(xì)胞系，它能在體外長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)，細(xì)胞形態(tài)特征與小鼠胚胎干細(xì)胞類似。第二部分APODEMUSSYLVATICUS胚胎干細(xì)胞系的生物學(xué)特性分析材料和方法21生長(zhǎng)曲線生長(zhǎng)曲線是評(píng)估細(xì)胞生長(zhǎng)特性的有效工具，從生長(zhǎng)曲線可以確定群體倍增時(shí)間。以06105ML的密度接種于六孔板，每12小時(shí)消化細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。以E14細(xì)胞株作為對(duì)照。22干細(xì)胞標(biāo)記的表達(dá)為了檢測(cè)該細(xì)胞的堿性磷酸酶活性，將細(xì)胞固定于4％的多聚甲醛PBS，用堿性磷酸酶的底物BCIPNBT進(jìn)行染色。為了進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)的檢測(cè)，用下列一抗進(jìn)行孵育，包括SSEA1，SSEA3，SSEA4，TRA160，GCTM2，OCT4，然后用FITC標(biāo)記二抗與一抗結(jié)合，最后用DARPI對(duì)樣品進(jìn)行染色，在熒光顯微鏡下觀察。用RTPCR檢測(cè)各種基因得表達(dá)。首先從胚胎干細(xì)胞提取RNA，用SENSI逆轉(zhuǎn)錄酶合成互補(bǔ)得CDNA，然后用PCR擴(kuò)增目的基因。目的基因和其引物序列如下OCT4，NANOG，REX1，陽(yáng)性對(duì)照用GAPDH。23核型分析和性別鑒定染色體的準(zhǔn)備如下在胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)液中加入01MGML的秋水仙素溫育一個(gè)小時(shí)，然后胰酶消化，用0075MKCL溶液重懸室溫下放置20分鐘，再在甲醇乙酸混合液3∶1中固定一個(gè)小時(shí)，然后置于玻片上。分散的染色體用1％的姬姆薩染料染色然后拍片，至少要數(shù)20個(gè)出于分裂中期的分散染色體和分析5條G帶的核型。該細(xì)胞株的性別通過(guò)PCR的方法鑒定，目的基因是基因組DNA的Y染色體相關(guān)基因TSPY，陽(yáng)性對(duì)照用X染色體相關(guān)基因POLA1以及GAPDH。24體內(nèi)外分化能力的檢測(cè)體外分化胚胎干細(xì)胞消化成單個(gè)細(xì)胞后接種于不貼壁的培養(yǎng)皿，使用不含白血病抑制因子的培養(yǎng)液，培養(yǎng)兩周后可見(jiàn)大量胚體形成。然后將胚體接種于貼壁的組織培養(yǎng)皿進(jìn)行誘導(dǎo)分化。所得到的分化細(xì)胞用如下幾種抗體進(jìn)行檢測(cè)內(nèi)胚層ALBUMIN，中胚層DESMIN，外胚層NESTIN，GFAP和TUJ1，然后用CY3羊抗鼠的二抗進(jìn)行標(biāo)記。體內(nèi)分化為了檢測(cè)其畸胎瘤的形成能力，取12X106未分化的胚胎干細(xì)胞注射于48周大小的裸鼠皮下，注射后8周取出畸胎瘤用4％的多聚甲醛進(jìn)行固定，常規(guī)石蠟切片和HE染色。25質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染用于轉(zhuǎn)染的兩種質(zhì)粒為PTP6HRGFP和PTP6DSRED2，分別表達(dá)綠色和紅色熒光蛋白。兩種質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶SCA1進(jìn)行線性化。轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞先用無(wú)抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)48小時(shí)，再加入PUROMYCIN終濃度為2UGML進(jìn)行篩選。篩選7天后挑取抗PUROMYCIN的克隆進(jìn)行胰酶消化，然后接種與新的飼養(yǎng)層細(xì)胞上進(jìn)行培養(yǎng)。26RNA干擾在進(jìn)行RNA干擾時(shí)，先將轉(zhuǎn)染HRGFP的細(xì)胞以較低的密度接種于6孔板中，然后用LIPOFECTAMINE2000將雙鏈的SIRNA轉(zhuǎn)染至細(xì)胞內(nèi)，進(jìn)行GFP基因的干擾，設(shè)立陰性對(duì)照。24小時(shí)后再用LIPOFECTAMINE2000進(jìn)行第二次轉(zhuǎn)染。結(jié)果21生長(zhǎng)曲線所測(cè)得的ASES1的群體倍增時(shí)間為12小時(shí)，而E14為17小時(shí)，說(shuō)明該細(xì)胞的增殖速度更快。該細(xì)胞已經(jīng)連續(xù)培養(yǎng)傳代半年P(guān)80，其細(xì)胞形態(tài)和增殖速度都沒(méi)有明顯的改變。22染色體分析和性別鑒定取P24，P63和P80代數(shù)的ASES1細(xì)胞進(jìn)行核型分析，結(jié)果為48條染色體為正常核型，表明該細(xì)胞可在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)同時(shí)保持核型的穩(wěn)定。核型分析觀察到類似Y染色體的存在。設(shè)計(jì)PCR實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增Y染色體相關(guān)基因TSPY，證實(shí)該細(xì)胞含有Y染色體，其核型為48X，Y。23干細(xì)胞分子標(biāo)記的表達(dá)絕大多數(shù)細(xì)胞表達(dá)堿性磷酸酶。檢測(cè)OCT4，SSEA1，SSEA3，SSEA4，TRA160和GCTM2的表達(dá)，只有OCT4為陽(yáng)性。最后，用RTPCR方法檢測(cè)OCT4，NANOG和REX1，發(fā)現(xiàn)三種標(biāo)記均為陽(yáng)性。24分化能力體外分化APODEMUSSYLVATICUS胚胎干細(xì)胞在沒(méi)有飼養(yǎng)層細(xì)胞和白血病抑制因子的條件下，在不貼壁的培養(yǎng)皿培養(yǎng)時(shí)可見(jiàn)有胚胎體形成。將胚體接種于貼壁的組織培養(yǎng)皿，從胚體生長(zhǎng)出來(lái)的細(xì)胞在形態(tài)上有明顯的異質(zhì)性。用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法可以檢測(cè)到三個(gè)胚層來(lái)源的細(xì)胞類型。體外分化取出畸胎瘤進(jìn)行石蠟切片和HE染色。結(jié)果可見(jiàn)三個(gè)胚層的細(xì)胞類型，如內(nèi)胚層的呼吸道上皮，腺上皮和腸上皮，中胚層的脂肪和肌肉，外胚層的皮膚細(xì)胞和神經(jīng)元。25質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染PTP6HRGFP和PTP6DSRED2這兩種質(zhì)粒都帶有PUROMYCIN的抗性基因，轉(zhuǎn)染后用PUROMYCIN篩選一段時(shí)間，挑取若干能夠穩(wěn)定表達(dá)熒光蛋白的克隆繼續(xù)擴(kuò)增，選取其中的兩個(gè)克隆作進(jìn)一步的分析ASES1GFP1和ASES1DSRED1。這兩株細(xì)胞在體外培養(yǎng)傳代超過(guò)15代仍然保持典型的未分化狀態(tài)，生長(zhǎng)正常而且熒光表達(dá)也沒(méi)有減弱，還能產(chǎn)生帶有熒光的胚胎體和畸胎瘤，通過(guò)胚層特異分子標(biāo)記檢測(cè)可見(jiàn)存在有三個(gè)胚層的細(xì)胞。26RNA干擾選取能穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光蛋白的ASES1GFP1細(xì)胞株，將特異干擾GFP編碼RNA的SIRNA轉(zhuǎn)染進(jìn)細(xì)胞內(nèi)，48小時(shí)后即可見(jiàn)到綠色熒光蛋白表達(dá)明顯減弱。這說(shuō)明該細(xì)胞能用于SIRNA介導(dǎo)的基因滅活，將有助于基因功能的研究。結(jié)論1該細(xì)胞系增殖速度比小鼠ES更快。2它表達(dá)多種干細(xì)胞分子標(biāo)記，如ALP，OCT4，NANOGREX1，但是不表達(dá)SSEA1，SSEA3，SSEA4，TRA160和GCMT2。3體外長(zhǎng)期培養(yǎng)過(guò)程中保持核型穩(wěn)定和在體內(nèi)外向三個(gè)胚層分化的能力。

簡(jiǎn)介：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文ΒCATENIN對(duì)K562細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力及對(duì)原代CML干祖細(xì)胞體內(nèi)外生物學(xué)功能影響的初步研究姓名王國(guó)蓉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（血液）指導(dǎo)教師邱錄貴翟瓊莉20080501中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院博上研究生學(xué)位論文MMMILLIMOLEMONONUCLEARCEL1ODOPTICALDENSITYPCRRPMRTPCRRQPCRAMPHEMPO單抗CGYDMSOFBS毫摩爾每升單個(gè)核細(xì)胞光密度值POLYMERASECHAINREACTION聚合酶鏈反應(yīng)ROTATEPERMINUTE每分鐘轉(zhuǎn)速REVERSETRANSCRIPTIONPCR逆轉(zhuǎn)錄PCRREALTIMEQUANTITATIVERTPCR實(shí)時(shí)定量PCRAMPICILLINHEMATOXYLINEOSINE氨芐青霉素蘇木素一伊紅MYELOPEROXIDASE髓過(guò)氧化物酶MONOCLONALANTIBODYCENTIGRAYDIMETHYLSULFOXIDEFETALBOVINESERUM第73頁(yè)單克隆抗體厘戈瑞放射劑量單位二甲基亞砜胎牛血清

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)單位代碼學(xué)號(hào)10114201030958兔角膜緣干細(xì)胞體外無(wú)血清培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究研究生指導(dǎo)老師申請(qǐng)學(xué)位門(mén)類級(jí)別專業(yè)名稱研究方向所在學(xué)校黃曉梅馬蕾副教授醫(yī)學(xué)碩士眼科學(xué)眼屈光及年齡相關(guān)眼第二臨床醫(yī)學(xué)院2012年5月6日山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄摘要IABSTRACTII前言1月U吾材料與方法2結(jié)果4口木‘討侖6結(jié)論9附圖10參考文獻(xiàn)12綜述15參考文獻(xiàn)20個(gè)人簡(jiǎn)介23致謝一24

簡(jiǎn)介：學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得直昌大堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。榭黼圳矧分修忱C勿孓／學(xué)位論文『版權(quán)槿用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解南昌大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所和中國(guó)學(xué)術(shù)期刊光盤(pán)版電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)和中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)中全文發(fā)表，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書(shū)學(xué)位論文儲(chǔ)簽名C手寫(xiě)幸妒罨／鋤簽名C矧_芋矗藿【∥簽字日期≮D、≥年易月弋日簽字日期年月日I|摘要MRNA水平，免疫組織化學(xué)技術(shù)測(cè)定HVTMMP一2蛋白表達(dá)，ELISA測(cè)定HVT培養(yǎng)上清液MMP2的濃度。5、HVT和HUVSMC的凋亡測(cè)定流式細(xì)胞術(shù)。結(jié)果1、藥物最佳作用濃度及時(shí)問(wèn)10NG／ML20HETE作用48H后顯著促進(jìn)HVT、HUVSMC的增殖10RTG／MLHET0016作用48H后顯著抑制HVT、HUVSMC的增殖。2、20HETE抑制HVT的遷移能力HVT單培養(yǎng)時(shí)，與對(duì)照組相比，20HETE組的TRANSWELL小室中HVT的遷移數(shù)目明顯減少；20HETE與HET0016聯(lián)合干預(yù)組的遷移數(shù)目顯著減少；HET0016組的遷移數(shù)目顯著增加。3、20一HETE抑制HVT的浸潤(rùn)能力HVT單培養(yǎng)時(shí)，與對(duì)照組相比，20HETE組，HVTMMP2的轉(zhuǎn)錄水平、蛋白表達(dá)及上清液濃度明顯降低；20HETE與HET0016聯(lián)合干預(yù)組，其轉(zhuǎn)錄水平、蛋白表達(dá)及上清液濃度顯著降低；HET0016組，其轉(zhuǎn)錄水平、蛋白表達(dá)及上清液濃度顯著升高。4、20HETE抑制HVT和HUVSMC的凋亡無(wú)論HVT、HUVSMC單培養(yǎng)，還是HVTHUVSMC共培養(yǎng)，與對(duì)照組相比，20一HETE組，HVT、HUVSMC的凋亡率明顯降低；20HETE與HET0016聯(lián)合干預(yù)組，HVT、HUVSMC的凋亡率顯著降低；HET0016組，HVT、HUVSMC的凋亡率顯著升高。結(jié)論20一HETE作為參與重塑過(guò)程及血管維護(hù)的多個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的上游調(diào)控因子，能夠促進(jìn)絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞、子宮血管平滑肌細(xì)胞的增殖，抑制絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞的浸潤(rùn)能力，抑制絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞、子宮血管平滑肌細(xì)胞的凋亡，并強(qiáng)烈抑制絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞介導(dǎo)的子宮平滑肌細(xì)胞的凋亡。提示20一HETE及HET0016對(duì)子宮螺旋動(dòng)脈重塑主要參與細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，可導(dǎo)致螺旋動(dòng)脈重塑障礙以及血管功能紊亂，引發(fā)子癇前期。關(guān)鍵詞子宮螺旋動(dòng)脈重塑；20羥二十烷四烯酸；子宮血管平滑肌細(xì)胞；絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞；基質(zhì)金屬蛋白酶