簡介：中圖分類號中圖分類號R89；R36；R39碩士學(xué)位論文沉默沉默SEPT9SEPT9基因?qū)θ烁伟┗驅(qū)θ烁伟㎝HCC97MHCC97H細(xì)胞細(xì)胞生物學(xué)特性的影響生物學(xué)特性的影響院（系）、所院（系）、所基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院研究生姓名研究生姓名馬秉福學(xué)科、專學(xué)科、專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)病理學(xué)與病理生理學(xué)導(dǎo)師姓導(dǎo)師姓名稅青林教授二Ο一三年四月年四月1沉默沉默SEPT9SEPT9基因?qū)Ω伟┗驅(qū)Ω伟㎝HCC97MHCC97H細(xì)胞的細(xì)胞的生物學(xué)特性的影響生物學(xué)特性的影響摘要目的根據(jù)SEPT9基因序列設(shè)計并合成相應(yīng)SEPT9SIRNA，探討SEPT9SIRNA對人肝癌細(xì)胞系MHCC97H細(xì)胞生長特異性抑制作用及其凋亡的影響，進一步揭示SEPT9基因在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。方法根據(jù)SEPT9基因核苷酸序列設(shè)計4對針對SEPT9基因的靶序列，由生物公司構(gòu)建4個針對SEPT9基因的SIRNA，同時構(gòu)建不針對任何基因的帶有綠色熒光蛋白基因的SIRNA，預(yù)實驗篩選出一個有效SIRNA，其靶序列為GGCAGCCCATCATGAAGTTCA。培養(yǎng)MHCC97H細(xì)胞，待細(xì)胞生長狀態(tài)良好并達(dá)到指數(shù)生長期時，于轉(zhuǎn)染前一日接種于6孔板（CCK8法檢測MHCC97H細(xì)胞生長抑制情況用96孔板接種），設(shè)實驗組、陰性對照組和空白組。以每孔脂質(zhì)體LIPOFECTAMIM200075UG，重組SIRNA3UG配成轉(zhuǎn)染復(fù)合物，加入各孔MHCC97H細(xì)胞中進行轉(zhuǎn)染（空白組不加任何試劑）。轉(zhuǎn)染后48H熒光顯微鏡下觀察綠色熒光細(xì)胞所占比例，判斷轉(zhuǎn)染效率。①RTPCR法檢測SEPT9MRNA的表達(dá)抑制情況轉(zhuǎn)染后48H，提取各組細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成CDNA，并經(jīng)PCR反應(yīng)擴增，瓊脂糖凝膠電泳，最后凝膠成像分析系統(tǒng)吸光度掃描觀察結(jié)果。②用WESTERNBLOT法檢測SEPT9蛋白質(zhì)的表達(dá)抑制情況轉(zhuǎn)染后48H，提取各組細(xì)胞總蛋白，BCA法測定蛋白濃度，以GAPDH蛋白為內(nèi)對照進行SDSPAGE電泳，半干法轉(zhuǎn)膜，一抗、二抗雜交孵育，化學(xué)發(fā)光液顯影并用紫外凝膠成像分析系統(tǒng)自動曝光，結(jié)果用凝膠成像儀掃描QUANTITYONE440軟件分析，檢測各組

簡介：點擊查看更多體外肌腱細(xì)胞培養(yǎng)及生物學(xué)性能的實驗研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文P16基因的可控表達(dá)及其對膀胱胱癌細(xì)胞的體外生物學(xué)影響姓名金向陽申請學(xué)位級別碩士專業(yè)外科學(xué)泌尿外科指導(dǎo)教師王中琨200051PCRRNARVRBRPMSDSTBSNQFIRISTILVCAMVVPOLYMERASECHAINREACTIONDBONUCLEICACIDREGOVIRUSVECTORRETIONBLASTONAROTATIONPERMINUTESODIUMDODCCOYLSULFATETRISBUFFEREDSALINETUMORNECROSISFACTORTRISAMIMONETHANETUMORINFILTRATIONLYMPHOCYTEVASCULARCCLIADHESIONMOLECULEVACCINIAVIRUSVECTOR2聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)核糖核酸逆轉(zhuǎn)錄病毒載體視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)數(shù)份鐘十二烷基硫酸鈉TDS緩沖生理鹽水腫瘤壞死因子三氨基甲烷腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞血管細(xì)胞粘附因子痘苗病毒載體

簡介：目的人巨細(xì)胞病毒（HUMANCYTOMEGALOVIRUS，HCMV）感染在人群中普遍存在，HCMV感染可引起患兒的神經(jīng)系統(tǒng)及消化系統(tǒng)的多種疾病，已成為引起新生兒疾病和先天畸形的重要感染因素之一，但HCMV先天感染的致病機制尚不清楚。1996年，CHATA等對HCMV實驗室株AD169株、TOWNE株及一株命名為TOLEDO的低傳代分離株進行了核酸序列比較，發(fā)現(xiàn)TOLEDO株在ULB’區(qū)含有19個在AD169株不存在的新基因，分別命名為HCMVUL133、UL134、UL135UL151，此19個基因可能在病毒的復(fù)制、潛伏和對宿主的致病性方面起重要作用。本研究以酵母雙雜交系統(tǒng)為手段篩選與HCMVUL135蛋白相互作用人胎腦文庫的蛋白因子，進而找出HCMV感染導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)疾病的可能途徑。該研究以這一區(qū)域片段作為誘餌蛋白，從人胎腦細(xì)胞文庫中篩選與之結(jié)合的靶蛋白，為進一步深入研究HCMV的致病機制奠定基礎(chǔ)。實驗材料與方法一、實驗材料標(biāo)本為中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院病毒室保存的臨床低傳代分離株H；構(gòu)建表達(dá)載體的相關(guān)試劑；酵母雙雜交實驗相關(guān)試劑；常用實驗設(shè)備如BECKMAN臺式低溫高速離心機、PERKINELMERPCR循環(huán)儀、電穿孔儀（BIAD）、全溫振蕩培養(yǎng)箱等；常用數(shù)據(jù)庫及分析軟件如基因組數(shù)據(jù)庫、蛋白質(zhì)分析數(shù)據(jù)庫、凝膠成像及掃描分析軟件、引物設(shè)計軟件等。二、實驗方法從感染了人巨細(xì)胞病毒的人胚肺中提取HCMVDNA，應(yīng)用PCR技術(shù)以HCMVDNA為模板擴增出UL135基因的序列，將UL135擴增產(chǎn)物與載體PGBKT7同時進行雙酶切后純化、連接，篩選鑒定重組克?。≒GBKT7UL135），測序并分析。應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)篩選人胎腦CDNA文庫中與HCMVUL135編碼蛋白相互作用的蛋白。1、提取文庫質(zhì)粒；2、將含有PGBKT7UL135重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到酵母細(xì)胞AH109中，然后再將提取的文庫質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到含有PGBKT7UL135質(zhì)粒的酵母細(xì)胞AH109中；3、篩選陽性克?。@色反應(yīng)及PCR技術(shù)），回轉(zhuǎn)鑒定，將與HCMVUL135相互作用的CDNA文庫基因測序；4、BLAST分析。結(jié)果采用特異性引物擴增出HCMVUL135基因片段，片段長度為987BP，并成功將HCMVUL135片段克隆到酵母系統(tǒng)的轉(zhuǎn)錄結(jié)合域PGBKT7上，命名為PGBKT7UL135。應(yīng)用PCR技術(shù)鑒定含PGBKT7UL135質(zhì)粒的陽性克隆，然后提取PGBKT7UL135質(zhì)粒，用ECⅠ和BAMHⅠ限制性內(nèi)切酶進行酶切鑒定，測序分析顯示結(jié)果與預(yù)期一致。轉(zhuǎn)化文庫質(zhì)粒到含有PGBKT7UL135的AH109酵母細(xì)胞中并對轉(zhuǎn)化效率進行了測定，在二缺平板上長出260個克隆，計算轉(zhuǎn)化效率026104CFUΜG，符合要求。做顯色反應(yīng)以初篩排除一些四缺培養(yǎng)基生長的假陽性克隆，有95個菌落呈藍(lán)色，將其增值并提取酵母質(zhì)粒。將提取的酵母質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化到大腸桿菌后涂含AMP（氨芐青霉素）平板，PCR鑒定轉(zhuǎn)化的菌落（用文庫的上下游引物，以鑒定所轉(zhuǎn)化的是否為文庫信息），結(jié)果顯示PCR方法鑒定出陽性克隆DNA片段大小在500BP1500BP之間，選出陽性克隆60個，再將陽性克隆質(zhì)?；剞D(zhuǎn)含PGBKT7UL135基因的酵母細(xì)胞AH109中，在二缺和四缺培養(yǎng)基中均生長。測序及BLAST結(jié)果分析顯示有多個克隆與UL135編碼蛋白相互作用，其中2個克隆與THY1（CD90）高度同源，其同源率達(dá)到98％。結(jié)論成功應(yīng)用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選出與HCMVUL135編碼蛋白相互作用的蛋白，其中THY1在HCMV感染致病過程中可能起重要作用。

簡介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文HMGB1對人角膜緣上皮細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的研究姓名羅妍申請學(xué)位級別碩士專業(yè)眼科學(xué)指導(dǎo)教師黃挺20100513中山大學(xué)碩士學(xué)位論文HMGBI對人角膜緣上皮細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的研究表達(dá)，主要在細(xì)胞膜上表達(dá)，為HMGBL對角膜緣上皮細(xì)胞存在生物學(xué)效應(yīng)的猜想提供生物學(xué)基礎(chǔ)。然后，本研究從細(xì)胞增殖、凋亡、遷移三方面研究HMGBL對角膜緣上皮細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)。我們采用CCK8法檢測HMGBL對角膜緣上皮細(xì)胞增殖的影響；采用流式細(xì)胞儀、共聚焦熒光顯微鏡檢測蹦GBL對角膜緣上皮細(xì)胞凋亡的影響；采用劃痕實驗探討HMGBL對角膜緣上皮細(xì)胞遷移的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)HMGBL對角膜緣上皮的增殖和遷移存在雙向調(diào)節(jié)作用，即低濃度時表現(xiàn)為促進作用，而高濃度時表現(xiàn)為抑制作用。此外，HMGBL對角膜緣上皮的凋亡存在明顯的促進作用。上述結(jié)果表明高濃度的HMGBL能抑制角膜緣上皮細(xì)胞的增殖和遷移，并促進細(xì)胞的凋亡，因此不利于角膜上皮的修復(fù)，延緩角膜上皮的愈合，可導(dǎo)致炎癥的遷延不愈。最后，本研究探討了HMGBL對角膜緣上皮細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)的影響。通過免疫熒光和ELISA技術(shù)，我們初步發(fā)現(xiàn)HMGBL可以促進VEGF、NFKAPPAB、TNFQ、IL1D的表達(dá)，促進NFKAPPAB的核轉(zhuǎn)位。這說明HMGBL可能通過調(diào)控炎癥因子和促新生血管因子的表達(dá)而參與角膜炎癥的發(fā)生發(fā)展，因此有可能是干預(yù)角膜炎癥的一個治療靶點。綜上所述，本研究首次驗證了角膜緣上皮細(xì)胞存在RAGE受體的表達(dá)，并發(fā)現(xiàn)HMGBL參與了角膜緣上皮細(xì)胞的增殖、凋亡、移行及細(xì)胞因子分泌的調(diào)節(jié)。本研究揭示了HMGBL對角膜緣上皮細(xì)胞存在多種生物學(xué)效應(yīng)，為尋找角膜炎癥的治療靶點提供了線索和科學(xué)依據(jù)。關(guān)鍵詞高遷移率族蛋白1HMGBL；角膜炎癥；RAGE受體；增殖；凋亡Ⅱ

簡介：碩士學(xué)位論文異位再生組織中牙源性干細(xì)胞的生物學(xué)性能研究異位再生組織中牙源性干細(xì)胞的生物學(xué)性能研究李琨培養(yǎng)類別全日制學(xué)位類型專業(yè)學(xué)位一級學(xué)科專業(yè)類口腔醫(yī)學(xué)二級學(xué)科專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)（牙周）研究方向牙周組織再生指導(dǎo)教師陳發(fā)明教授（主任醫(yī)師）培養(yǎng)單位口腔醫(yī)學(xué)院牙周病科二O一四年五月第四軍醫(yī)大學(xué)THEFOURTHMILITARYMEDICALUNIVERSITY分類號R7814UDC61631密級公開第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄縮略語表1中文摘要3ABSTRACT8前言13文獻(xiàn)回顧15正文25實驗一DPSCS和PDLSCS的分離、培養(yǎng)與鑒定251材料252方法263結(jié)果274討論28實驗二利用人牙髓干細(xì)胞、牙周膜干細(xì)胞實現(xiàn)異位組織再生實驗301材料302方法313結(jié)果324討論34實驗三人牙髓干細(xì)胞、牙周膜干細(xì)胞再生前后生物學(xué)性能的比較361材料362方法373結(jié)果444討論49小結(jié)52參考文獻(xiàn)54個人簡歷和研究成果61致謝62

簡介：該研究通過體外構(gòu)建生長板軟骨細(xì)胞、關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞與MSC的間接共培養(yǎng)體系觀察MSC在共培養(yǎng)條件下細(xì)胞生物學(xué)特性的變化試圖回答以下幾個問題1生長板軟骨細(xì)胞旁分泌作用存在對MSC分化的影響2MSC在與生長板軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)條件下基因的表達(dá)規(guī)律3生長板軟骨細(xì)胞旁分泌發(fā)揮作用的可能途徑并分析VEGF在MSC成骨分化中所起的作用通過分子生物學(xué)技術(shù)分析MSC部分特征相關(guān)基因的表達(dá)規(guī)律尋求對修復(fù)機制的認(rèn)識并用于改進臨床治療技術(shù)結(jié)論1生長板軟骨細(xì)胞旁分泌可以促進MSC向成骨方向轉(zhuǎn)化2關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞體外共培養(yǎng)條件下未見誘導(dǎo)MSC向軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化3隨著培養(yǎng)時相的延長MSC成骨特征性基因表達(dá)上升明顯4MSC的VEGF表達(dá)與成骨特征性基因表達(dá)為正相關(guān)加入VEGF抗體不影響MSC的成骨分化及VEGF的表達(dá)

簡介：ER日對人乳腺癌細(xì)胞復(fù)旦大學(xué)博士論文中文摘要雌激素受體P亞型對人乳腺癌細(xì)胞株生物學(xué)特性的影響及自發(fā)性肺高轉(zhuǎn)移人乳腺癌細(xì)胞系的建立中文摘要第一部分雌激素受體0亞型對人乳腺癌細(xì)胞株生物學(xué)特性的影響目的探討雌激素受體P亞型ERR對人乳腺癌細(xì)胞株生物學(xué)特性的影響及其作用機制。方法通過基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染技術(shù)，構(gòu)建ERR穩(wěn)定表達(dá)的MDAMB435細(xì)胞株，運用MTT流式細(xì)胞儀檢測技術(shù)和TRANSWELL等方法觀察在不同雌激素濃度下，ER0對該細(xì)胞株增殖，浸潤和轉(zhuǎn)移特性的影響采用RTPCR和或WESTERNBLOT明膠酶譜技術(shù)檢測相關(guān)基因CYCLINACYCLINECYCLINDLP21MMPSETS1VEGF及BFGF表達(dá)水平的改變并建立相應(yīng)的人癌裸鼠原位移植瘤模型以驗證體外實驗的觀察結(jié)果。結(jié)果ERB可顯著提高MDAMB435細(xì)胞的增殖速度和浸潤遷徙能力且呈非雌激素依賴性與對照組相比，ER0高表達(dá)的細(xì)胞，其S期比例顯著增多PO01P21MRNA的表達(dá)水平降低3333PO03，蛋白表達(dá)水平降低4742PO02MMP9MRNA的表達(dá)水平增高9131P000，活性增高6730P002ETS1MRNA的表達(dá)水平增高6223PO01蛋白表達(dá)水平增高51O1PO01而各組CYCLINACYCLINECYCLIND1MMP1MMP2MMP7VEGF和BFGF在MRNA水平均未見明顯差異PLO05。動物實驗結(jié)果與體外一致。結(jié)論ERP有促進乳腺癌細(xì)胞增殖，浸潤和轉(zhuǎn)移的作用，降低P21的表達(dá)，增加ETS一1和MMP9的表達(dá)并增強MMP9的活性可能是其潛在的作用機制之一。關(guān)鍵詞乳腺腫瘤雌激素受體0亞型基質(zhì)金屬蛋白酶P21ETS一1ERS對人乳腺癌復(fù)旦大學(xué)博士論文英文摘要ABSTRACTSPARTIEFFECTSOFESTROGENRECEPTOR0ONTHEBIOLOGICALBEHAVIOROFHUMANBREASTCANCERCELLLINEOBJECTIVETOSTUDYEFFECTSOFESTROGENRECEPTORAER灼ONTHEBIOLOGICALBEHAVIOROFHUMANBREASTCANCERCELLLINEMETHODSHUMANER3CDNAWASREINTRODUCEDINTOMDAMB435CELLSBYSTABLETRANSFECTIONEFECTSOFERRUNDERVARIOUSCONSISTENCEOFESTRADIOLONTHEPROLIFERATIONANDINVASIONOFTHECELLSWEREINVESTIGATEDBYMTTFLOWCYTOMETRYANDTRANSWELLCYCLINACYCLINECYCLINDLP21MMPSETS1VEGFANDBFGFWEREDETECTEDBYRTPCRANDORWESTERNBLOTGELATINZYMOGRAPHYHUMANBREASTCANCERWASIMPLANTEDORTHOTOPICALLYASINTACTTISSUEINTONUDEMICETOTESTTHERESULTSOFINVITROSTUDYRESULTSER3WASABLETOINCREASETHEPROLIFERATIONANDINVASIONOFMDAMB435CELLSSIGNIFICANTLYWITHESTRADIOLINDEPENDENTTHESPHASEDISTRIBUTIONOFTHECELLSWITHE“OVEREXPRESSIONWAS4677WHICHWASSIGNIFICANTLYHIGHERTHANTHATOFTHEWILDTYPE2998ANDMOCKCELLS2759P001INER3TRANSFECTEDCELLSTHEEXPRESSIONOFP21DECREASED3333INMRNALEVELSP二003AND4742INPROTEINLEVELSP一002RESPECTIVELYBUTTHEEXPRESSIONOFMMP9INCREASED9131INMRNALEVELSP一000ANDITSACTIVITYWASUPREGULATED6730P二002FURTHERMORETHEMRNAANDPROTEINLEVELSOFETS1INCREASED6223P001AND5101P一001RESPECTIVELYNOSIGNIFICANTDIFERENCEWASOBSERVEDINTHEMRNALEVELSOFCYCLINACYCLINECYCLINDLMMP1MMP2MMP7VEGFANDBFGF

簡介：點擊查看更多干擾素誘導(dǎo)蛋白p204在鼠血管壁細(xì)胞的表達(dá)及IFI16對人臍動脈平滑肌細(xì)胞的生物學(xué)功能研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文RNA干擾靶向沉默STAT1基因?qū)m頸癌細(xì)胞HELA生物學(xué)特性的影響姓名阮莎莎申請學(xué)位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師王澤華趙虹201105華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文3MRNA以及蛋白水平的表達(dá)的表達(dá)水平較轉(zhuǎn)染前明顯降低（P＜005）。結(jié)論結(jié)論STAT1SHRNA表達(dá)載體有效抑制宮頸癌HELA細(xì)胞株中STAT1的表達(dá)，成功建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染STAT1SHRNA真核表達(dá)載體細(xì)胞株STAT1SHRNAHELA及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒細(xì)胞株MOCKHELA，為后續(xù)實驗奠定基礎(chǔ)?！娟P(guān)鍵詞】【關(guān)鍵詞】STAT1；RNA干擾；宮頸癌HELA細(xì)胞株第三部分第三部分RNA干擾靶向沉默干擾靶向沉默STAT1后HELA細(xì)胞株細(xì)胞株生物學(xué)行為的研究生物學(xué)行為的研究目的目的探討RNAI靶向沉默STAT1后HELA細(xì)胞株增殖，侵襲，遷移能力等生物學(xué)行為的變化。方法方法運用MTT法檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染STAT1SHRNA真核表達(dá)載體前后宮頸癌HELA細(xì)胞的增殖水平，運用TRANSWELL小室法檢測其遷移和侵襲能力的變化。結(jié)果（結(jié)果（1）實驗組（穩(wěn)定轉(zhuǎn)染STAT1SHRNA真核表達(dá)載體的細(xì)胞株STAT1SHRNAHELA）與轉(zhuǎn)染試劑組（穩(wěn)定轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒細(xì)胞株MOCKHELA）空白對照組（HELA細(xì)胞）相比較，其增殖水平于培養(yǎng)第7天開始有統(tǒng)計學(xué)差異，實驗組細(xì)胞增殖水平增高（P＜005）。（2）體外遷移實驗中，實驗組穿膜細(xì)胞數(shù)為（2566115）個，轉(zhuǎn)染試劑對照組穿膜細(xì)胞數(shù)為（1833152）個，空白對照組穿膜細(xì)胞數(shù)為（161）個。實驗組穿膜細(xì)胞數(shù)多于對照組（P＜005），對照組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞005）。3體外侵襲實驗中，實驗組穿膜細(xì)胞數(shù)為（101）個，轉(zhuǎn)染試劑對照組穿膜細(xì)胞數(shù)為（533058）個，空白對照組穿膜細(xì)胞數(shù)為（41）個。實驗組穿膜細(xì)胞數(shù)多于對照組（P＜005），對照組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞005）。結(jié)論結(jié)論靶向STAT1基因的SHRNA能夠促進HELA細(xì)胞增殖，增強HELA細(xì)胞的遷移侵襲能力。STAT1可能是宮頸癌潛在的抑癌基因?！娟P(guān)鍵詞】【關(guān)鍵詞】STAT1；RNA干擾；增殖；遷移；侵襲；宮頸癌細(xì)胞株HELA

簡介：點擊查看更多真皮來源成體多能干細(xì)胞的生物學(xué)性狀與促進創(chuàng)傷修復(fù)的實驗研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：分類號密級國際十進分類號（UDC）第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)位論文人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤中MACC1基因的表達(dá)及其RNAI對生物學(xué)特性的影響（題名和副題名）賀亞龍（作者姓名）指導(dǎo)教師姓名章翔教授（主任醫(yī)師）指導(dǎo)教師單位第四軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科申請學(xué)位級別博士專業(yè)名稱外科學(xué)（神外）論文提交日期201204答辯日期201205論文起止時間2009年9月至2012年4月學(xué)位授予單位第四軍醫(yī)大學(xué)人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤中人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤中MACC1基因的表達(dá)基因的表達(dá)及其及其RNAI對生物學(xué)特性的影響對生物學(xué)特性的影響研究生賀亞龍學(xué)科專業(yè)外科學(xué)（神外）所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科導(dǎo)師章翔教授（主任醫(yī)師）輔導(dǎo)教師關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞MACC1；腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤；增殖；侵襲；慢病毒；RNA干涉中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2012年4月

簡介：山東大學(xué)博士學(xué)位論文目錄中文摘要，‘，，一英文摘要，，，，‘，、符號說明，，‘，，，，，第一部分和一在非小細(xì)胞肺癌的表達(dá)與侵襲、轉(zhuǎn)移和預(yù)后之間關(guān)系的研究，，，，，】，，，，，一前言，，，，，，，‘，一材料與方法‘，“‘，，，‘結(jié)果，，，，，，，，，，，，，，討論，，，，，，，‘一結(jié)論，，，，，，，，，一圖表，，，，，，一參考文獻(xiàn)，，，，，，，，第二部分法檢測非小細(xì)胞肺癌患者外周血的冶床意義，，，，，，，，，，」，，‘，一前言，，，，，、，材料與方法，，，，，，，，‘，一結(jié)果，，，，，，，，，‘，、討論，，，，‘，，，，，，，，結(jié)論，，，，，，，，，，，一圖表，，，，、，‘，，，參考文獻(xiàn)，，，，，，‘，，，，，一第三部分非小細(xì)胞肺癌一和一表達(dá)的臨床意義，，，，，，，，，，，，，，，前言，，，，‘，，，，一材料與方法，，，，，，，，，，，山東大學(xué)博士學(xué)位論文非小細(xì)胞肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)研究博士研究生張宏偉博士生導(dǎo)師陳景寒中文摘要第一部分和一在非小細(xì)胞肺癌的表達(dá)與侵襲、轉(zhuǎn)移和預(yù)后之間關(guān)系的研究目的研究血管內(nèi)皮生長因子、。幾，和細(xì)胞粘附分子一一，一在非小細(xì)胞肺癌組織中表達(dá)及其與肺癌侵襲轉(zhuǎn)移和預(yù)后的關(guān)系，探討它們在非小細(xì)胞肺癌發(fā)生、發(fā)展過程中的分子生物學(xué)作用，以及檢測此兩項指標(biāo)對臨床的指導(dǎo)意義。方法采用免疫組化一法檢測例非小細(xì)胞肺癌組織中的和一的表達(dá)水平，并結(jié)合術(shù)后臨床資料和隨訪資料分析。用檢驗分析比較兩組間差別，用一生存曲線計算術(shù)后生存時間，檢測比較組間生存時間的差別。結(jié)果例非小細(xì)胞肺癌組織中，表達(dá)率為其中鱗癌陣，腺癌，二者無顯著性差異二一，凡。，。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)高于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移組，尸，尸。期表達(dá)率為，期，期，期和期差別顯著，護，期和期差別無意義，。術(shù)后轉(zhuǎn)移組表達(dá)率高于無轉(zhuǎn)移組，尹，。陽性表達(dá)患者術(shù)后轉(zhuǎn)移率高于陰性患者術(shù)后轉(zhuǎn)移率，擴科，。陽性表達(dá)的患者年生存率低于陰性表達(dá)患者，。例非小細(xì)胞肺

簡介：分類號VDC博士學(xué)位論文密級重組隉病毒CXCR7一SHRNA對人膀胱癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究THERESEARCHOFTHEEFFECTSOFRECOMBINEDLENTVIRALCXCR7一SHRNAONBIOLOGICALBEHAVIOROFTHEHUMANBLADDERCANCERCELL作者姓名學(xué)科專業(yè)學(xué)院系、所指導(dǎo)教師朱煊臨床醫(yī)學(xué)外科學(xué)湘雅二醫(yī)院趙曉昆論文答辯日期塑盟￡12答辯委員會主席中南大學(xué)二。一二年五月原創(chuàng)性聲明Y2197058IIIIIIIRLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLRLLLLLLLⅧ本人聲明，所呈交的學(xué)位淪文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)R進行的研究L作及取得的研究成果。盡我所知除了淪文中特別加以標(biāo)注干U斂謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為抉得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書LM使FLJ過的材料。與我共同【二作的同志對本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了R』J確的說明。作者簽名N期J二年。￡月苧Z口學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使川學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文，允許學(xué)位淪文被查閱和借閱學(xué)?？梢怨紝W(xué)位A文的全部或部分內(nèi)容可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論史。同州授權(quán)中困科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位侖文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)厙，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。作者簽名導(dǎo)帥簽名衷幔脯型午上_|_；J立幾

簡介：血管重塑性疾病發(fā)生發(fā)展的病理生理機制是目前心血管領(lǐng)域研究的熱點問題之一而血管平滑肌細(xì)胞VULARSMOOTHMUSCLECELLVSMC過度增殖在高血壓、動脈粥樣硬化、血管成形術(shù)后再狹窄等血管重塑性疾病形成與發(fā)展中起著重要作用并且隨著研究的深入發(fā)現(xiàn)在再狹窄RCSTCNOSISRS等血管重塑性疾病中存在著細(xì)胞凋亡的變化VSMC增殖與凋亡的動態(tài)平衡決定了血管壁細(xì)胞數(shù)量和新生內(nèi)膜的增生程度。目的細(xì)胞增殖是通過細(xì)胞周期實現(xiàn)的是外界的增殖刺激信號如胰島素樣生長因子、血小板源性生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子Β、上皮生長因子等通過其細(xì)胞膜或胞內(nèi)受體作用經(jīng)過跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)將細(xì)胞外信號傳遞到核內(nèi)啟動增殖相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄最終作用于細(xì)胞周期從而使VSMC發(fā)生過度增殖?？梢姲l(fā)出外界增殖刺激信號是決定細(xì)胞增殖與否的始動因素既往國內(nèi)外學(xué)者研究多關(guān)注內(nèi)皮細(xì)胞損傷引致炎癥反應(yīng)而激活一系列細(xì)胞因子、生長因子、血管活性物質(zhì)等增殖刺激信號進一步引起細(xì)胞增殖而在上述血管重塑性疾病中尤其在RS中由于缺血缺氧及血管成形術(shù)本身的機械損傷受損的VSMC是否能夠同樣誘發(fā)產(chǎn)生增殖刺激信號而作用于其周圍正常的VSMC使其發(fā)生表型轉(zhuǎn)化生物學(xué)行為發(fā)生改變獲得異常增殖的能力尚無報道本研究通過模擬體內(nèi)缺血缺氧環(huán)境而在體外構(gòu)建了VSMC的氧糖剝奪模型并制成其條件培養(yǎng)液作用于正常的VSMC來觀察其對周圍正常的VSMC增殖、凋亡和遷移等生物學(xué)行為的影響并初步探討其作用機制從而不僅為進一步認(rèn)識血管重塑性疾病的發(fā)病機制提供實驗依據(jù)而且可能為該類疾病的有效防治提供一個新的靶點。實驗方法1、氧糖剝奪血管平滑肌細(xì)胞條件培養(yǎng)液制備條件優(yōu)化分為6組對照組10％血清低糖低氧5％血清低糖低氧無血清高糖低氧無血清低糖低氧無血清無糖低氧按分組要求分別配制培養(yǎng)基用前通入5％CO2、10％H2、85％N2混合氣體飽和15MIN即制成低氧溶液。高糖培養(yǎng)基含糖量為25MMOLL低糖培養(yǎng)基含糖量為55MMOLL。將此溶液加入培養(yǎng)板中然后置于厭氧培養(yǎng)箱內(nèi)含5％CO2、10％H2、85％N2混合氣體培養(yǎng)對照組用含10％血清低糖DMEM培養(yǎng)基在37℃、飽和濕度、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)常規(guī)培養(yǎng)。各組分別培養(yǎng)24H、48H、72H3000RPM離心10MIN取培養(yǎng)上清液。采用MTT法和臺盼藍(lán)染色法檢測細(xì)胞活力和增殖情況。按上述實驗結(jié)果確定氧糖剝奪條件并按此條件制備氧糖剝奪VSMC條件培養(yǎng)液簡稱條件培養(yǎng)液。2、實驗分組實驗分為兩組每組采用3個復(fù)孔。對照組無血清培養(yǎng)基組處理組條件培養(yǎng)液處理組。培養(yǎng)VSMC細(xì)胞取對數(shù)生長期的細(xì)胞用于實驗實驗前吸棄培養(yǎng)基上清用PBS清洗3次后分別加入等量的無血清培養(yǎng)基為對照組加入條件培養(yǎng)液作為處理組分別在37℃、5％CO2、飽和濕度條件下培養(yǎng)24、48、72小時。3、條件培養(yǎng)液對VSMC增殖的影響微量培養(yǎng)四唑鹽測定法MICROCULMRETETRAZOLIUMASSAYMTT檢測經(jīng)條件培養(yǎng)液處理后VSMC的增殖能力變化流式細(xì)胞術(shù)FLOWCYTOMETRYFCM檢測條件培養(yǎng)液對VSMC細(xì)胞周期的影響實時定量反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)REALTIMEREVERSALTRANIONPOLYMERASECHAINREACTIONRTPCR、WESTERNBLOT方法檢測VSMC細(xì)胞內(nèi)CYCLINDL的表達(dá)水平酶聯(lián)免疫吸附分析ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAYELISA方法檢測條件培養(yǎng)液中白細(xì)胞介素1IMERLEUKIN1IL1含量及MTR法檢測IL1對VSMC細(xì)胞增殖的影響。4、條件培養(yǎng)液對VSMC凋亡的影響HOECHST染色法進行VSMC凋亡情況的激光共聚焦檢測ELISA方法檢測VSMC內(nèi)CASPASE3和CASPASE9的活性水平RTPCR、WESTERNBLOT方法檢測VSMC內(nèi)BCL2、PARP、CLEAVEDPARP的表達(dá)量。5、條件培養(yǎng)液對VSMC遷移能力的影響TRANSWELL法檢測條件培養(yǎng)液對VSMC遷移能力影響RTPCR、WESTERNBLOT方法檢測經(jīng)條件培養(yǎng)液處理后VSMC內(nèi)MMP2和MMP9的MRNA水平和蛋白水平ELISA方法檢測VSMC對MMP2和MMP9分泌表達(dá)情況。6、統(tǒng)計學(xué)分析所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS150統(tǒng)計軟件進行分析計量資料以X±SD表示兩組數(shù)據(jù)間比較采用T檢驗多組數(shù)據(jù)間比較采用單因素方差分析多重比較采用LSD及OUNTST3檢驗。以P＜005作為差異有顯著性。結(jié)果1、無血清無糖低氧條件下VSMC損傷最為嚴(yán)重并且隨處理時間延長損傷進一步加劇。無血清無糖低氧條件下處理24、48、72H臺盼藍(lán)檢測結(jié)果VSMC存活率分別為6788％、4972％、2802％與處理前比較細(xì)胞死亡率為2956％、4000％和5933％。MTT檢測結(jié)果VSMC存活率分別為6823％、4657％、2408％與處理前比較細(xì)胞死亡率為3026％、4244％和6384％。光鏡下觀察無血清無糖低氧條件下處理的VSMC可見細(xì)胞腫脹、變圓出現(xiàn)壞死情況并且隨著處理時間的延長VSMC壞死加劇。故選擇無血清無糖低氧處理72H作為VSMC的氧糖剝奪條件培養(yǎng)液制各條件。2、氧糖剝奪VSMC條件培養(yǎng)液對VSMC增殖的影響MTT法檢測結(jié)果顯示經(jīng)條件培養(yǎng)液培養(yǎng)VSMC24H、48H、72H后細(xì)胞吸光度值分別為對照組的143倍、163倍和171倍尤其在培養(yǎng)48、72H與對照組相比差異具有顯著性P＜005并且隨著條件培養(yǎng)液處理時間的延長VSMC的增殖能力增加明顯P＜005FCM細(xì)胞周期分析顯示條件培養(yǎng)液處理組細(xì)胞周期有所改變G0G1期所占比例降低而S期和G2M期所占比例增加尤其G2M期增加明顯。對照組細(xì)胞周期無明顯變化。表明氧糖剝奪VSMC條件培養(yǎng)液可促進細(xì)胞周期由G0G1期向S期轉(zhuǎn)換及由S期向G2M期轉(zhuǎn)換的進程從而促進VSMC增殖RTPCR及WESTERNBLOT結(jié)果分別提示條件培養(yǎng)液處理組CYELIND1在MRNA及蛋白水平表達(dá)較對照組有所提高。ELISA檢測結(jié)果顯示經(jīng)氧糖剝奪處理的VSMC釋放的IL1水平顯著增加P＜001同時經(jīng)MTT檢測IL1組和條件培養(yǎng)液組分別培養(yǎng)VSMC24H、48H和72H后VSMC細(xì)胞吸光度值分別為0126、0175、0249和0083、0142、0245均高于對照組的0067、0072、0149表明IL1和條件培養(yǎng)液均可促進VSMC的增殖在條件培養(yǎng)液中加入IL1拮抗劑后條件培養(yǎng)液對VSMC增殖的促進作用有所下降細(xì)胞吸光度值分別為0082、0112、0138與對照組相近進一步說明條件培養(yǎng)液中IL1可以促進VSMC細(xì)胞增殖。3、氧糖剝奪VSMC條件培養(yǎng)液對VSMC凋亡的影響ELISA法檢測結(jié)果顯示VSMC經(jīng)條件培養(yǎng)液處理48、72H后VSMC中促凋亡指標(biāo)CASPASE3和CASPASE9的吸光度比值均較對照組降低P＜005RTPCR結(jié)果提示與對照組相比條件培養(yǎng)液使抑制凋亡的指標(biāo)BCL2MRNA表達(dá)增加對凋亡時CASPASE家族的剪切底物PARP蛋白其上游的PARPMRNA表達(dá)無影響。WESTERNBLOT結(jié)果提示與對照組相比條件培養(yǎng)液使BCL2蛋白表達(dá)增加使凋亡時CASPASE家族剪切PARP蛋白后的產(chǎn)物CLEAVEDPARP蛋白的表達(dá)降低說明條件培養(yǎng)液對凋亡有抑制作用同時提示條件培養(yǎng)液對PARP的調(diào)控不是在MRNA水平上而是在蛋白水平上。4、氧糖剝奪VSMC條件培養(yǎng)液對VSMC遷移能力的影響TRANSWELL法測定與對照組比較條件培養(yǎng)液處理組VSMC48、72小時遷移細(xì)胞數(shù)明顯增多P＜005。RTPCR及WESTERNBLOT結(jié)果分別提示在孵育48及72小時處理組VSMC內(nèi)MMP2和MMP9在MRNA水平和蛋白水平均較對照組明顯提高。同時ELISA檢測結(jié)果顯示處理組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MMP2和MMP9的分泌量也較對照組增加。結(jié)論1、成功建立VSMC氧糖剝奪模型制備VSMC氧糖剝奪條件培養(yǎng)液。2、VSMC氧糖剝奪條件培養(yǎng)液能夠促進VSMC的增殖此作用可能通過上調(diào)VSMC中CYCLIND1的表達(dá)促進VSMC細(xì)胞周期由G0G1期向S期轉(zhuǎn)換及由S期向G2M期的轉(zhuǎn)換從而促進VSMC的增殖。3、氧糖剝奪條件培養(yǎng)液可能通過上調(diào)BCL2TURNA表達(dá)和蛋白表達(dá)、下調(diào)CLEAVEDPARP的表達(dá)和CASPASE3、CASPASE9的表達(dá)抑制細(xì)胞凋亡。4、氧糖剝奪條件培養(yǎng)液可能通過上調(diào)MMP2和MMP9的表達(dá)促進VSMC遷移能力增強。