血中不同轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞生物學(xué)特性及其基因差異表達(dá).pdf

1、中山大學(xué)博士后學(xué)位論文血中不同轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞生物學(xué)特性及其基因差異表達(dá)姓名：張剛慶申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士后專業(yè)：外科學(xué)普通外科指導(dǎo)教師：陳規(guī)劃20080510中文摘要只能間接推斷血液中存在轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞，不能進(jìn)一步研究判斷血液中轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞的生物學(xué)特性。免疫磁珠(Immunomagneticbead，IMB)技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新的免疫學(xué)技術(shù)，其基本原理在于用單克隆抗體與磁性微珠結(jié)合，在磁場(chǎng)作用下，使與免疫磁珠特異性相連的細(xì)胞分離開來(lái)，簡(jiǎn)

2、便易行、分離純度高、同時(shí)保留細(xì)胞活性的優(yōu)點(diǎn)。利用免疫磁珠細(xì)胞分離技術(shù)檢測(cè)腫瘤患者外周血液或骨髓中的轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞，它能在100萬(wàn)個(gè)單核細(xì)胞中分離檢測(cè)出一個(gè)腫瘤細(xì)胞，其敏感性與RTPCR方法相同，假陽(yáng)性率卻比RTPCT明顯降低。Taubert等成功地從乳腺癌患者外周血中分離出轉(zhuǎn)移的乳腺癌細(xì)胞，Zigeuner在分離lo‘個(gè)單位單核細(xì)胞中懸浮一個(gè)腫瘤細(xì)胞的研究中，對(duì)免疫磁珠細(xì)胞分離技術(shù)與其它免疫細(xì)胞化學(xué)方法進(jìn)行了比較，后者的檢出率為23％，而免

3、疫磁珠技術(shù)的檢出率可達(dá)933％，同時(shí)分離純化后的癌細(xì)胞活性高，達(dá)85％以上。Waguni等運(yùn)用該技術(shù)富集血中肝癌細(xì)胞，結(jié)果顯示，可在每2ml血中檢測(cè)出110個(gè)肝癌細(xì)胞，在55例肝細(xì)胞癌患者中，29例(53％)可檢測(cè)出循環(huán)肝癌。血液中循環(huán)腫瘤細(xì)胞分離富集后進(jìn)行培養(yǎng)，可使其異質(zhì)性減至最低，轉(zhuǎn)移能力表達(dá)穩(wěn)定，有利于比較研究循環(huán)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性，深入了解腫瘤血液轉(zhuǎn)移的機(jī)制。隨著腫瘤的發(fā)生發(fā)展，其相關(guān)的基因表達(dá)及蛋白質(zhì)功能同樣處于量變和質(zhì)變的

4、動(dòng)態(tài)過(guò)程中。自1995年第一塊cDNA芯片問(wèn)世以來(lái)，它已成為研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中基因開關(guān)及表達(dá)程度是最重要的、強(qiáng)有力的工具。Okabe等采用包含23040個(gè)基因的芯片分析的20例原發(fā)性肝癌和癌旁組織基因表達(dá)差異，證明原發(fā)性肝癌和癌旁組織基因表達(dá)譜具有較大差異，并篩選出多個(gè)上調(diào)和下調(diào)基因。基因芯片技術(shù)對(duì)在整體上了解在癌轉(zhuǎn)移狀態(tài)下瘤細(xì)胞基因表達(dá)譜的變化、分析不同轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細(xì)胞株的基因表達(dá)譜差異，發(fā)現(xiàn)更多與肝癌轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的基因和特異