簡介：牙周炎是侵犯牙齦和牙周支持組織的慢性炎癥性的破壞性疾病，它是引起牙齒缺失的主要原因之一。以前認為牙周炎的發(fā)病與進展主要受細菌及其他環(huán)境因素的影響與調(diào)節(jié)。最近，有充足的證據(jù)表明基因在該病的發(fā)病和進展中起著重要的作用。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)降鈣素基因相關(guān)肽CALCITONINGENERELATEDPEPTIDE，CGRP陽性神經(jīng)纖維廣泛存在于牙周組織中，尤其是牙周炎的起始部位；牙周炎時，牙周組織中的CGRP陽性神經(jīng)纖維顯著增多，并向周圍間質(zhì)釋放；一定濃度的CGRP可促進體外培養(yǎng)的牙周膜成纖維細胞的增殖。另外國外有研究報道CGRP基因存在四個多態(tài)性位點，并且發(fā)現(xiàn)與帕金森氏病和精神病的發(fā)病有關(guān)。在以前一系列的研究中發(fā)現(xiàn)CGRP5247位點存在等位基因雜合子多態(tài)性現(xiàn)象；CGRP5247位點單核苷酸多態(tài)性與廣東人成人重度牙周炎有相關(guān)性。雖然目前對CGRP與牙周炎發(fā)生關(guān)系的研究很多，但是研究CGRP基因多態(tài)性對人牙周膜成纖維細胞生物學(xué)特性的影響仍需實驗驗證。本研究通過構(gòu)建CGRP基因多態(tài)性重組腺病毒，轉(zhuǎn)染人牙周膜成纖維細胞，進一步檢測了CGRP多態(tài)性基因?qū)θ搜乐苣こ衫w維細胞生物學(xué)特性的影響，為進一步研究CGRP基因與牙周炎的關(guān)系提供了細胞學(xué)基礎(chǔ)。第一部分人牙周膜成纖維細胞的原代培養(yǎng)及檢測目的取材培養(yǎng)人牙周膜成纖維細胞并檢測其組織胚胎學(xué)來源方法離體牙取自長海醫(yī)院門診口腔科因正畸而拔出的雙尖牙，年齡1226歲，所選牙齒無齲壞、根尖周疾病及牙周炎。采用酶消化組織貼附的方法進行人牙周膜成纖維細胞原代培養(yǎng)，在原代細胞生長達到一定數(shù)量后，局部消化傳代培養(yǎng)。對第4代細胞進行人牙周膜成纖維細胞的形態(tài)學(xué)觀察和免疫組織化學(xué)鑒定采用SABC法，進行波形絲蛋白和細胞角蛋白染色。結(jié)果原代培養(yǎng)出人牙周膜成纖維細胞，免疫熒光鑒定波形絲蛋白染色顯示陽性，細胞角蛋白染色顯示陰性。結(jié)論成功原代培養(yǎng)出中胚層來源的人牙周膜成纖維細胞。第二部分構(gòu)建降鈣素基因相關(guān)肽CGRP5247單核苷酸多態(tài)性AC的重組腺病毒，轉(zhuǎn)染人牙周膜成纖維細胞并測定細胞內(nèi)CGRP基因及表達蛋白的變化目的制備與鑒定攜帶CGRPA和CGRPC的重組腺病毒并將CGRPA，CGRPC基因轉(zhuǎn)染入人牙周膜成纖維細胞方法以計算機軟件輔助設(shè)計引物擴增CGRPA開放閱讀框序列，通過重疊PCR點突變活動CGRPC開放閱讀框序列；分別將CGRPA和CGRPC插入PSHUTTLE中構(gòu)建腺病毒穿梭質(zhì)粒PSHUTTLECGRPA及PSHUTTLECGRPC，經(jīng)酶切線性化后采用電穿孔法將其與腺病毒骨架質(zhì)粒PADEASY1一起轉(zhuǎn)化到BJ5183大腸桿菌電感受態(tài)細菌中，挑選同源重組質(zhì)粒，酶切線性化后利用脂質(zhì)體法將其轉(zhuǎn)染HEK293細胞包裝成重組腺病毒顆粒，觀察細胞病變效應(yīng)CPE現(xiàn)象，收集細胞反復(fù)凍融、裂解，獲得高滴度重組腺病毒，通過酶切分析及PCR分析，鑒定重組腺病毒是否含有插入的目的序列。ADCGRPA，ADCGRPC重組腺病毒以及對照組ADEGFP分別轉(zhuǎn)染處于對數(shù)生長期的人牙周膜成纖維細胞中，72小時后抽RNA，反轉(zhuǎn)錄為CDNA，用定量PCR和WESTENBLOT等方法測定細胞內(nèi)CGRP基因及表達蛋白的變化。結(jié)果DNA序列測定結(jié)果證實重組質(zhì)粒載體PSHUTTLECGRPA及PSHUTTLECGRPC構(gòu)建正確，插入序列位置正確。PCR及酶切鑒定結(jié)果，重組腺病毒含有目的插入序列。定量PCR結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染了CGRPA，CGRPC基因的人牙周膜成纖維細胞組，CGRP基因含量明顯高于對照組。測序顯示兩實驗組細胞內(nèi)確實含有CGRPA與CGRPC基因序列。結(jié)論成功構(gòu)建ADCGRPA，ADCGRPC重組腺病毒載體，并成功將CGRPA，CGRPC基因轉(zhuǎn)染入人牙周膜成纖維細胞中。第三部分檢測轉(zhuǎn)染了CGRPA，CGRPC基因的人牙周膜成纖維細胞的膠原MRNA與膠原蛋白的表達，細胞增殖能力以及細胞成骨分化目的研究CGRPA，CGRPC基因多態(tài)性對人牙周膜成纖維細胞生物學(xué)特性的影響。方法實驗細胞與對照細胞抽提RNA，反轉(zhuǎn)錄CDNA后，用定量PCR和WESTENBLOT測定細胞內(nèi)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白MRNA含量和膠原蛋白表達；用流式細胞儀測定細胞周期，觀察兩基因?qū)毎鲋车挠绊?；鈣鹽染色定性觀察細胞成骨分化。結(jié)果顯示，含有CGRPA基因的細胞，Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白MRNA含量及膠原蛋白的表達明顯高于對照組，含有CGRPC基因的細胞Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白MRNA含量則表達上明顯低于對照組；細胞周期測定結(jié)果顯示，含有CGRPC基因的細胞增殖能力明顯弱于對照組和CGRPA實驗組；鈣鹽染色可于含有CGRPA基因的細胞中發(fā)現(xiàn)棕黑色條帶，但變化不明顯。結(jié)論可以認為多態(tài)性的CGRPC基因抑制膠原蛋白分泌，可能在牙周炎發(fā)病當(dāng)中抑制膠原合成，引起牙周粘附下降，牙齒松動；而多態(tài)性的CGRPC基因可能使細胞增殖受影響，使增殖期牙周膜成纖維細胞減少，影響牙齒與牙槽骨的連接；暫不能說明CGRP基因?qū)毎晒欠只挠绊憽?

簡介：分類號VDC博士學(xué)位論文密級MICRORNA_155在腎透明細胞癌中的表達以及對人腎癌細胞株ACHN生物學(xué)性狀的影響STUDIESONTHEEXPRESSIONOFMIR155INTHERENALCELLCARCINOMAANDTHEEFFECTSONBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFRENALCELLCARCINOMACELLLINEACHN作者姓名學(xué)科專業(yè)院、系所指導(dǎo)教師陳鐵定外科學(xué)泌尿外科湘雅二醫(yī)院楊羅艷教授論文答辯日期班講L蔓答辯委員會主席中南大學(xué)二。一一年五月學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱學(xué)校可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。燃名畢讎繼喻4年五眩日

簡介：視交叉上核SCN是哺乳動物腦內(nèi)調(diào)節(jié)體內(nèi)自激振蕩節(jié)律的主要振蕩器該課題以離體培養(yǎng)的心肌細胞作為研究對象分三個部分逐步對其生物節(jié)律調(diào)節(jié)機制進行研究首先我們將研究中樞神經(jīng)系統(tǒng)活動節(jié)律的探針苯二氮卓類藥物安定和苯二氮卓受體內(nèi)源性調(diào)節(jié)因子、時間保持激素褪黑素分別以10MOLL10MOLL10MOLL三種濃度對體外培養(yǎng)的搏動的心肌細胞進行干預(yù)采用針對心肌細胞運動特點而設(shè)計的圖象分析軟件對心肌細胞運動進行定量分析的電子成像技術(shù)在24H六個時間點當(dāng)?shù)貢r間000004000800120016002000對離體培養(yǎng)的收縮心肌細胞的搏動頻率進行動態(tài)監(jiān)測用時間生物學(xué)單余弦法分析其生物節(jié)律變化情況其次再用褪黑素對離體培養(yǎng)的心肌細胞進行干預(yù)用免疫細胞化學(xué)方法檢測心肌細胞內(nèi)MPER1基因所編碼的蛋白的表達最后采用DNA克隆技術(shù)對抗特異基因的核酶DNA進行克隆核酶DNA再經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄成小片段RNA核酶用小片段RNA核酶瞬時轉(zhuǎn)染離體培養(yǎng)的心肌細胞用分子生物學(xué)技術(shù)RTPCRWESTERNBLOT檢測心肌細胞內(nèi)的MPER1基因MRNA及其所編碼的MPER1基因蛋白的表達因而得出結(jié)論褪黑素及安定作為內(nèi)源性授時因子可以導(dǎo)引離體心肌細胞搏動的近日節(jié)律心肌細胞內(nèi)MPER1基因蛋白表達的近日節(jié)律能被褪黑素所導(dǎo)引核酶可以阻斷離體心肌細胞內(nèi)MPER1基因MRNA及MPER1基因蛋白的表達核酶可以使心肌細胞搏動的近日節(jié)律消失由此證明MPER1基因是心肌細胞內(nèi)振蕩器的主控基因之一心肌細胞細胞水平自激振蕩近日節(jié)律的調(diào)控是內(nèi)源性因素和外源性因素共同作用的結(jié)果說明心血管系統(tǒng)從整體到器官及細胞各自所具有自主變化的內(nèi)源性時間機制并非均由腦內(nèi)振蒎器結(jié)構(gòu)所為整體所表現(xiàn)的近日節(jié)律同步是由外源因素影響及整體經(jīng)多層次整合的共同結(jié)果

簡介：分類號密級國際十進分類號（UDC）第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)位論文RHBMP7對牙髓細胞的生物學(xué)作用及牙髓損傷修復(fù)作用的初步研究（題名和副題名）陳寵（作者姓名）指導(dǎo)教師姓名倪龍興教授（主任醫(yī)師）指導(dǎo)教師單位第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院牙體牙髓病科申請學(xué)位級別醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)名稱口腔內(nèi)科學(xué)（牙體）論文提交日期200904答辯日期200905論文起止時間2007年11月至2009年5月學(xué)位授予單位第四軍醫(yī)大學(xué)RHBMP7對牙髓細胞的生物學(xué)作用及牙髓損傷修復(fù)作用的初步研究研究生陳寵學(xué)科專業(yè)口腔內(nèi)科學(xué)（牙體）所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院牙體牙髓病科導(dǎo)師倪龍興教授（主任醫(yī)師）輔導(dǎo)教師汪平副教授（主任醫(yī)師）資助基金項目關(guān)鍵詞骨形成蛋白；細胞培養(yǎng)；移植；鈣化；免疫組化；蓋髓中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2009年5月

簡介：浙江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院博士學(xué)位論文MICRNAS調(diào)節(jié)肺癌細胞生物學(xué)行為的研究姓名王國付申請學(xué)位級別博士專業(yè)生物信息學(xué)指導(dǎo)教師鄭樹20090101浙江大學(xué)博士學(xué)位論文2009MICRORNAS調(diào)節(jié)肺癌細胞生物學(xué)行為的研究研究目的1了解MIRNH是否參與肺癌侵襲與轉(zhuǎn)移的調(diào)控；2了解MIRNA調(diào)控肺癌侵襲與轉(zhuǎn)移的分子機制；3了解肺癌細胞中MIRNA的表達是否與表皮生長因子受體EPIDERMALGROWTHFACTORRECEPTOR，EGFR信號通路的活化有關(guān)；4探討EGFR信號通路相關(guān)的MIRNA的功能。研究方法1應(yīng)用MIRNA芯片和實時定量RTPCR了解高、低轉(zhuǎn)移巨細胞肺癌細胞801D和95C之間MIRNH的差異表達以及篩選EGFR信號通路相關(guān)的MIRNH；2MIRNH的功能分析TRANSWELLINSERT、體外劃痕愈合實驗、微管形成實驗、增殖和凋亡分析、細胞周期分析等了解MIRNA對肺癌細胞生物學(xué)行為的影響。3生物信息學(xué)方法預(yù)測及WESTERNBLOT和熒光素酶報告基因試驗驗證其對靶基因的調(diào)控作用。4基因芯片檢測及GENE0TOLOGYGO分析MIRNA對腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達的影響；研究結(jié)果1巨細胞肺癌細胞中MIR183的表達MIRNA芯片檢測顯示在高轉(zhuǎn)移巨細胞肺癌細胞801D和低轉(zhuǎn)移巨細胞肺癌細胞95C之間共有92個MIRNA的表達存在顯著差異。其中

簡介：背景和目的血管新生內(nèi)膜形成是PTCA和支架術(shù)后RS的病理基礎(chǔ)VSMC的遷移則是新生內(nèi)膜形成的關(guān)鍵步驟必須首先突破ECM的束縛方能穿過內(nèi)彈力膜發(fā)生遷移形成新生內(nèi)膜ECM的穩(wěn)定是維持血管壁完整性的重要基礎(chǔ)MMPS及其組織抑制因子TIMPS是維持ECM穩(wěn)態(tài)最重要的蛋白酶家族血管損傷后受損血管局部的VSMC在各種細胞因子的刺激下發(fā)生細胞表型的改變由收縮型轉(zhuǎn)變?yōu)楹铣尚头置诖罅康腗MPS打破了維持ECM穩(wěn)態(tài)的MMPSTIMPS動態(tài)平衡分泌到胞外的MMPS使ECM蛋白發(fā)生降解從而解除了ECM對VSMC的束縛打通了VSMC遷移的道路因此MMPS可能在新生內(nèi)膜形成過程中扮演了分子開關(guān)的角色由此可見維持MMPS與TIMPS之間的動態(tài)平衡是十分重要的近年來的一些研究證實血管損傷時局部過表達TIMPL、TIMP2和TIMP3均可明顯減少VSMC遷移、抑制新生內(nèi)膜增生TIMP4作為TIMPS家族的新成員表達具有心臟特異性目前關(guān)于TIMP4生物學(xué)功能的研究報道較少是否也會對VSMC的遷移與增殖產(chǎn)生影響尚未見報道該實驗構(gòu)建了攜帶TIMP4基因的重組腺病毒載體通過轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的大鼠VSMC研究增強其表達對VSMC增殖、遷移等生物學(xué)行為的影響以進一步明確TIMP4的生物學(xué)活性為TIMP4在RS防治研究中的應(yīng)用提供理論依據(jù)和實驗證據(jù)方法①采用位置特異性重組方法構(gòu)建攜帶人TIMP4基因表達序列的復(fù)制缺陷型5型腺病毒載體經(jīng)293細胞擴增純化制備高滴度病毒轉(zhuǎn)染液將獲贈的對照病毒ADLACZ以相同方法進行擴增和純化②采用組織塊貼壁法原代培養(yǎng)大鼠主動脈VSMC以形態(tài)學(xué)和免疫細胞化學(xué)鑒定③以病毒轉(zhuǎn)染液常規(guī)轉(zhuǎn)染VSMC后應(yīng)用RTPCR、免疫細胞化學(xué)和蛋白免疫印跡等方法分別檢測TIMP4基因在VSMC轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的表達④以酶譜法ZYMOGRAPHY和逆向酶譜法REVERSEZYMOGRAPHY檢測VSMC表達分泌的TIMP4的蛋白活性⑤應(yīng)用帶MATRIGEL基底膜基質(zhì)的MILLICELL培養(yǎng)小室研究TIMP4表達對VSMC遷移的影響應(yīng)用四唑鹽MTT比色實驗、3H標記的胸腺嘧啶核苷3HTDR摻入實驗、流式細胞儀等檢測TIMP4表達對VSMC增殖的影響結(jié)果①應(yīng)用DNA重組技術(shù)成功構(gòu)建了攜帶TIMP4基因的重組穿梭質(zhì)粒載體PDC315TIMP4將其與腺病毒基因組質(zhì)粒PBHGLOX△E13CRE在脂質(zhì)體介導(dǎo)下共轉(zhuǎn)染293細胞通過位置特異性重組經(jīng)PCR法篩選、鑒定成功獲得了攜帶TIMP4基因的人類5型復(fù)制缺陷型腺病毒ADTIMP4構(gòu)建的ADTIMP4通過大量復(fù)制和純化獲得滴度約510PFUML對照病毒ADLACZ經(jīng)擴增、純化獲得滴度為751010PFUMLADTIMP4和ADLACZ的最佳轉(zhuǎn)染復(fù)數(shù)均為100MOI②采用組織塊貼壁法原代培養(yǎng)大鼠主動脈VSMC經(jīng)形態(tài)學(xué)和免疫細胞化學(xué)鑒定證實為VSMC68代時VSMC純度幾近100﹪③通過RTPCR、免疫細胞化學(xué)法和蛋白免疫印跡等方法表明正常培養(yǎng)的VSMC不表達TIMP4ADTIMP4轉(zhuǎn)染VSMC后檢測TIMP4細胞表達率、MRNA和蛋白表達的結(jié)果均證明VSMC成功表達了TIMP4表達率隨轉(zhuǎn)染時間延長逐漸增加轉(zhuǎn)染后2D可達865﹪高水平的表達可維持6D以上④酶譜法和逆向酶譜法結(jié)果證明ADTIMP4轉(zhuǎn)染VSMC后表達分泌的TIMP4具有抑制MMPS的生物學(xué)活性在實驗過程中對檢測TIMP4生物學(xué)活性的酶譜法和逆向酶譜法進行了優(yōu)化⑤ADTIMP4轉(zhuǎn)染VSMC后TIMP4表達可顯著抑制PDGF趨化作用引起的VSMC遷移并且隨轉(zhuǎn)染時間的延長TIMP4表達增多遷移的VSMC數(shù)呈更加減少的趨勢與ADLACZ組相比VSMC遷移數(shù)最大減少787﹪⑥ADTIMP4轉(zhuǎn)染VSMC后TIMP4表達可顯著抑制VSMC增殖與ADLACZ組相比MTT吸光度降低最大達471﹪3HTDR摻入量降低最大達307﹪GG期的VSMC比例顯著增高G1M期和S期細胞比例顯著降低結(jié)論①用構(gòu)建的復(fù)制缺陷型腺病毒ADTIMP4轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的大鼠主動脈VSMC可使TIMP4在VSMC中高效表達并具有生物學(xué)活性②ADTIMP4轉(zhuǎn)染VSMC后TIMP4的表達可顯著抑制VSMC的遷移和增殖③TIMP4對VSMC生物學(xué)行為的影響為RS的基因防治研究提供了新的思路④用改建的PTCA球囊建立了大鼠頸總動脈新生內(nèi)膜增殖模型為TIMP4的體內(nèi)應(yīng)用研究奠定了實驗基礎(chǔ)

簡介：華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文PARP1抑制劑對骨肉瘤細胞生物學(xué)活性的影響及其聯(lián)合順鉑對骨肉瘤細胞生長的抑制作用姓名鄭亞東申請學(xué)位級別博士專業(yè)外科學(xué)（骨外）指導(dǎo)教師吳華201104華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文3培養(yǎng)基培養(yǎng)，另6皿在培養(yǎng)基中分別加入5MM、10MM、20MM的3AB，在培養(yǎng)24H、48H后每組各取一皿，按ANNEXINVFITC凋亡試劑盒說明書操作，上流式細胞儀檢測細胞凋亡率；6將U2OS細胞種于6CM的培養(yǎng)皿中，接種4個皿，其中一皿作為對照組，另三皿分別給予10MM的3AB刺激8H、12H、24H后，按CASPASE3活性測定試劑盒說明書提取蛋白測定CASPASE3的活性；7將U2OS細胞種于6CM的培養(yǎng)皿中，接種4個皿，一皿作為對照，給予完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，另三皿培養(yǎng)基中加入10MM的3AB，分別培養(yǎng)24H、48H、72H后提取細胞總蛋白，WESTERNBLOTTING檢測BCL2、BAX的表達。結(jié)果13AB抑制骨肉瘤細胞U2OS的增殖，抑制率隨3AB濃度的升高而升高，隨時間的延長而升高；23AB抑制骨肉瘤細胞MG63的增殖，抑制率隨3AB濃度的升高而升高，隨時間的延長而升高；33AB促進骨肉瘤細胞U2OS的凋亡，凋亡率隨3AB刺激時間的延長而升高；43AB促進骨肉瘤細胞MG63的凋亡，凋亡率隨3AB濃度的升高而升高，隨時間的延長而升高；53AB刺激8H、12H后CASPASE3活性增加，差異有顯著性，24H后CASPASE3活性與對照組比較無顯著性差異；63AB刺激24H、48H、72H后，BAX表達量逐漸升高，BCL2表達量則在24H及48H輕度升高，72H降低。結(jié)論PARP1抑制劑3AB能抑制骨肉瘤細胞的增殖，促進其凋亡。

簡介：中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文FN14影響TRAF1、TRAF2的結(jié)合調(diào)節(jié)NFΚB信號通路及乳腺癌細胞生物學(xué)行為姓名李琪申請學(xué)位級別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師米小軼20090301TRAF2的結(jié)合量及FNL4分別與TRAFL，TRAF2的結(jié)合量，影響NF．R,B信號通路，同時調(diào)節(jié)乳腺癌細胞的增殖，凋亡，侵襲力。材料與方法1、細胞正常乳腺上皮細胞系MCF一10A，人雌激素受體非依賴性乳腺癌細胞系MDA．MB．231和MDA．MB．435S用含有LO％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37℃，5％C02的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。2、轉(zhuǎn)染按照LIPOFECTAMINE2000說明書操作。3、免疫熒光檢測細胞中FNL4蛋白的表達。4、IU’PCR檢測FNL4MRNA表達情況。5、免疫共沉淀檢測FNL4、TRAFL、TRAF2蛋白之間的結(jié)合。6、WESTERNBLOT檢測乳腺癌細胞系MDA．MB．231、MDAMB一435S轉(zhuǎn)染前后NF．1B信號通路的活化情況。7、流式細胞儀檢測按照細胞凋亡與壞死檢測試劑盒操作說明進行，HOECHST／PI雙標后經(jīng)流式細胞儀檢測凋亡發(fā)生的比例。8、四甲基偶氮唑藍MTT法接種各組細胞至96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)24．120H，按照操作說明進行，用酶聯(lián)免疫檢測儀測量各孔在490NM處的吸光值A(chǔ)490，根據(jù)吸光值繪制細胞增殖曲線。9、TRANSWELL小室檢測接種各組細胞分別至MATRIGEL包被的含有微孔濾膜的TRANSWELL小室，分別培養(yǎng)24H后，4％多聚甲醇固定，蘇木素染色，顯微鏡觀察細胞體外侵襲能力的變化。LO、使用SPSSL4．0統(tǒng)計軟件2

簡介：上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文RASRAS基因在胃癌細胞中的表達及其對胃癌細胞生物學(xué)行為的影響基因在胃癌細胞中的表達及其對胃癌細胞生物學(xué)行為的影響THEEXPRESSIONOFRASGENEINGASTRICCANCERCELLSANDITSBIOLOGICALEFFECTONGASTRICCANCERCELLS姓名劉陽學(xué)號1107249462學(xué)科專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向腫瘤分子生物學(xué)基金項目國家自然科學(xué)基金指導(dǎo)教師王慧萍副研究員韋芳助理研究員李惠明副研究員學(xué)位級別碩士培養(yǎng)單位上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院答辯日期2013年5月7日上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文

簡介：研究背景現(xiàn)代金屬金屬MOM人工髖關(guān)節(jié)置換系統(tǒng)提高了假體的耐磨性和抗疲勞強度，在臨床上表現(xiàn)出優(yōu)良的早中期效果。作為植入材料，不可避免地面對機械物理、電化學(xué)腐蝕等多種因素造成的降解，形成具有化學(xué)活性的產(chǎn)物。大量研究表明，MOM術(shù)后患者血液、尿液中鈷、鉻離子濃度顯著升高。值得一提的是，假體周圍組織中發(fā)現(xiàn)超細直徑的金屬顆粒（6834NM），主要是含鈷基的納米顆粒。病例研究顯示，部分翻修假體周圍出現(xiàn)廣泛滑膜潰瘍伴淋巴細胞、漿細胞浸潤“炎性假瘤”形成含有血管、壞死組織及多核巨細胞的肉芽腫樣改變，且金屬磨屑沉淀其中，局部淋巴結(jié)凝固性壞死。同時，假體植入時間的延長伴隨外周血淋巴細胞染色體易位率和染色體非整倍體率提高，T細胞、白細胞和骨髓細胞水平下降；部分患者血清中發(fā)現(xiàn)鈷、鉻特異性IGE。體外研究表明，金屬納米顆粒自身尺寸效應(yīng)帶來了有別于宏觀粒子及相應(yīng)離子的生物學(xué)效應(yīng)。因此，探討鈷納米顆粒CONPS對機體免疫系統(tǒng)的生物學(xué)效應(yīng)及其機制具有重要意義。第一部分鈷納米顆粒對外周血T淋巴細胞的細胞毒性和遺傳毒性作用目的研究鈷納米顆粒CONPS對外周血T淋巴細胞的細胞毒性和遺傳毒性作用，同時以鈷離子CO2作為比較研究，初步探討MOM術(shù)后一系列復(fù)雜生物學(xué)反應(yīng)的病因。方法以正常外周血T淋巴細胞作為試驗系統(tǒng)，采用不同濃度的CONPS和CO2對細胞進行處理，在不同時間點利用345二甲基噻唑－2－25二苯基四氦唑溴鹽MTT及乳酸脫氫酶LDH分析方法檢測細胞生存率，利用彗星試驗COMETASSAY及微核試驗MNT檢測細胞DNA和染色體損傷，評估CONPS和CO2的細胞毒性和遺傳毒性。同時，使用ICPMSINDUCTIVELYCOUPLEDPLASMAMASSSPECTROMETRY檢測手段，評估CONPS細胞外釋放離子的情況。結(jié)果1CONPS及CO2對外周血T淋巴細胞的細胞毒性效應(yīng)呈現(xiàn)時間、濃度依賴性。2CONPS、CO2細胞毒性起效濃度分別約為10、50ΜM4HCC50分別為10、50ΜM，說明CONPS的細胞毒性效應(yīng)強于CO2。350、100ΜMCONPS在4、24、48H釋放％分別為512±144、1422±317、3278±270及627±249、1878±429、3881±211，隨著時間的延長離子釋放逐步增加，呈現(xiàn)時間依賴關(guān)系（P＜0001）。各時間點釋放的濃度均小于CO2細胞毒性起效濃度50ΜM，提示CONPS的細胞毒性作用并不依賴于細胞外CO2釋放。4LDH實驗結(jié)果和MTT吻合。5CONPS在3、6ΜM劑量，尾部DNA含量分別為873±460、964±477，OLIVE尾矩分別為216±119、966±473與溶劑對照組尾部DNA含量（146±076）和OLIVE尾矩（035±021）相比均有顯著差異P＜001CO2各劑量組尾部DNA含量和OLIVE尾矩與溶劑對照組相比均無顯著差異P＞005。結(jié)果說明，CONPS可以引起外周血T淋巴細胞DNA鏈斷裂，導(dǎo)致初始DNA損傷；本研究設(shè)計的濃度及染毒時間內(nèi)，未發(fā)現(xiàn)CO2造成T淋巴細胞DNA損傷。6CONPS在6ΜM劑量，微核率BNMN‰為1369±185，與對照組546±128相比有顯著差異P＜005CO2各劑量組微核率與對照組相比均無顯著差異P＞005。說明CONPS可以引起外周血T淋巴細胞染色體損傷；本研究設(shè)計的濃度及染毒時間內(nèi)，未發(fā)現(xiàn)CO2造成T淋巴細胞染色體損傷。結(jié)論1CONPS可以對人免疫細胞產(chǎn)生細胞毒性及潛在遺傳毒性作用，可能是通過自身特殊動力學(xué)行為介導(dǎo)，不依賴于細胞外CO2釋放，且毒性作用強于CO2。2試驗結(jié)果部分解釋了MOM術(shù)后假體周圍炎性假瘤形成、外周血免疫細胞減少及染色體畸變的原因。3本研究無法排除CONPS和CO2是否存在協(xié)同效應(yīng)，有待后續(xù)深入探討。第二部分鈷納米顆粒對外周血T淋巴細胞生物學(xué)效應(yīng)機制的研究目的研究CONPS的表征特性、介質(zhì)中分散情況、是否能進入細胞、細胞處理后的氧化應(yīng)激水平，初步探討CONPS生物學(xué)效應(yīng)的機制。方法以PBS及含血清培養(yǎng)基作為溶劑，利用TEM觀測CONPS分散情況，同時檢測CONPS的粒徑分布。細胞經(jīng)過CONPS處理后固定、脫水、浸、包埋、切片、染色，借助TEM觀測CONPS進入細胞的情況。CONPS和CO2分別對細胞進行染毒，采用熒光分光法檢測細胞內(nèi)活性氧ROS水平、谷胱甘肽還原酶法檢測還原型谷胱甘肽GSH水平、鄰苯二酚氧化法檢測超氧化物歧化酶SOD活力、H2O2還原法檢測過氧化氫酶CAT活力、GSH氧化法檢測谷胱甘肽過氧化物酶GPX活力。結(jié)果1CONPS在不同的溶劑中解聚情況有所區(qū)別5人AB血清RPMI1640培養(yǎng)液為溶劑時解聚效果優(yōu)于PBS溶劑；同時，CONPS的粒徑分布平均為50NM。2細胞胞漿中出現(xiàn)致密CONPS團塊，外形上類似一整體的大尺寸顆粒，其電子密度高于細胞質(zhì)，細胞膜未見破壞，細胞核未見CONPS積聚。3相比較對照組，CONPS處理組相對熒光單位RUF升高具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005），間接說明CONPS可以導(dǎo)致T淋巴細胞內(nèi)ROS明顯升高，自由基蓄積；CO2處理組RUF升高無統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。4CONPS處理組GSH值874±241ΜMMGPROTEIN，相比較對照組GSH值1527±132ΜMMGPROTEIN，差異顯著P＜005；CO2處理組GSH值1362±085ΜMMGPROTEIN，無顯著差異（P＞005）。說明CONPS可以導(dǎo)致T淋巴細胞內(nèi)GSH明顯下降，細胞處于氧化應(yīng)激狀態(tài)。5CONPS處理組SOD、CAT、GPX水平分別為892±057、633±046、615±064UMGPROTEIN，相比較對照組1246±102SOD、1121±060CAT、1187±089GPXUMGPROTEIN，差異顯著P＜005CO2處理組SOD、CAT、GPX水平分別為1071±048、1011±061、1103±129UMGPROTEIN，無統(tǒng)計學(xué)差異P＞005。結(jié)論1CONPS血清懸浮體系穩(wěn)定性較高，有利于機體內(nèi)血液、淋巴液轉(zhuǎn)運及生物學(xué)效應(yīng)作用。2CONPS可以高效便捷地進入T淋巴細胞，而不依賴細胞的吞噬功能。3CONPS可引起外周血T淋巴細胞內(nèi)ROS蓄積，同時破壞細胞抗氧化防御機制，導(dǎo)致自由基的產(chǎn)生與清除處在失衡狀態(tài)，誘導(dǎo)氧化應(yīng)激損傷；亞毒性濃度的CO2短期處理不會引起T細胞氧化應(yīng)激損傷＜CC50。

簡介：該研究以456周的流產(chǎn)人胚胎作為分離肝干細胞的實驗材料因為已經(jīng)知道胎肝在胚胎發(fā)育的第4周開始發(fā)生而且已經(jīng)知道此時的胎肝中的干細胞的含量相對較高經(jīng)過對培養(yǎng)條件的不斷優(yōu)化和克隆化培養(yǎng)最終建立了11個可以在體外長期穩(wěn)定傳代的細胞系并將其命名為HFLSCHUMANFETALLIVERDERIVEDSTEMCELLS這些細胞系具有相似的細胞形態(tài)、增殖能力和分子表型在此基礎(chǔ)上本文對其中的一個細胞系編號FL0312042的基本生物學(xué)特性進行了較為深入的研究發(fā)現(xiàn)該細胞系具有如下特征1HFLSC細胞形態(tài)為均一的小三角形HFLSC細胞體積較小細胞核較大圓形有13個核仁細胞之間有較長的突起相連在傳代過程中該細胞的形態(tài)基本保持不變超微結(jié)構(gòu)觀察發(fā)現(xiàn)該細胞核質(zhì)比極大且細胞質(zhì)中細胞器極少2HFLSC細胞具有強大的增殖能力目前該細胞系已在體外培養(yǎng)達7個月之久傳代25代以上而且其增殖能力相對穩(wěn)定核型分析顯示染色體數(shù)目正常荷瘤實驗表明該細胞系無致瘤性3HFLSC細胞表達多種類型的分子標志4體外誘導(dǎo)分化研究顯示HFLSC細胞具有多潛能性5HFLSC細胞可以參與小鼠損傷肝臟的再生本研究得到了人的肝源性干細胞系并發(fā)現(xiàn)其具有多潛能分化特性有望在進一步的深入研究之后成為一個具有實用價值的細胞系為肝干細胞生物學(xué)的研究提供一個理想的細胞模型也有可能為各種因素所致肝臟疾病的細胞治療、藥物的篩選以及肝臟發(fā)育等多個領(lǐng)域的研究提供一種細胞來源

簡介：蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明L9王5308本人鄭重聲明提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻的個體和集體，均已在文中以明確方式標明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名孵學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定，既學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國家圖書館、中國社科院文獻信息情報中心、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所含萬方數(shù)據(jù)電子出版社、中國學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索。涉密論文口本學(xué)位論文屬在年月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文口論文作者簽名導(dǎo)師簽名，’’EL期趁三呈鱉

簡介：第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)位論文（題名和副題名）分類號密級國際十進分類號（UDC）整合素連接激酶在高濃度葡萄糖誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細胞生物學(xué)行為變化中的作用儲昭節(jié)（作者姓名）指導(dǎo)教師姓名惠延年教授主任醫(yī)師指導(dǎo)教師單位第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院眼科申請學(xué)位級別碩士專業(yè)名稱眼科學(xué)論文提交日期200905答辯日期200905論文起止時間2008年5月至2009年5月學(xué)位授予單位第四軍醫(yī)大學(xué)整合素連接激酶在高濃度葡萄糖誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細胞生物學(xué)行為變化中的作用研究生儲昭節(jié)學(xué)科專業(yè)眼科學(xué)所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院眼科導(dǎo)師惠延年教授（主任醫(yī)師）輔導(dǎo)教師周健教授（主任醫(yī)師）資助基金項目本課題為國家自然科學(xué)基金（30672292）及教育部新世紀優(yōu)秀人才支持計劃（NCET2006年度）資助關(guān)鍵詞RNA干擾；整合素連接激酶；高濃度葡萄糖；晶狀體上皮細胞；細胞增生；上皮細胞向間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化；細胞凋亡；細胞死亡中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2009年5月

簡介：上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士畢業(yè)論文1上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文125125I粒子持續(xù)低劑量率照射和粒子持續(xù)低劑量率照射和6060COCOΓ射線射線高劑量率高劑量率照射對非照射對非小細胞肺癌細胞生物學(xué)效應(yīng)影響小細胞肺癌細胞生物學(xué)效應(yīng)影響的比較性研究的比較性研究姓名趙真真姓名趙真真申請學(xué)位級別碩士申請學(xué)位級別碩士專業(yè)影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)專業(yè)影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士畢業(yè)論文3上海交通大學(xué)上海交通大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不、包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名日期年月日

簡介：上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文過表達IRX1基因?qū)ξ赴┘毎飳W(xué)行為的影響姓名劉衛(wèi)仁申請學(xué)位級別碩士專業(yè)外科學(xué)（普通外科）指導(dǎo)教師于穎彥20090401上海交通大學(xué)碩士學(xué)位畢業(yè)論文結(jié)果結(jié)果①REALTIMEPCR結(jié)果顯示IRX1基因在胃正常粘膜上皮呈現(xiàn)高表達，而在胃癌細胞株中低表達或不表達。②成功構(gòu)建IRX1的真核表達載體并轉(zhuǎn)染SGC7901胃癌細胞株。通過G418篩選出穩(wěn)定表達IRX1的細胞，REALTIMEPCR和WESTERNBLOT方法證實實驗組IRX1基因表達上調(diào)。③熒光顯微鏡下證實IRX1蛋白表達于細胞核內(nèi)。④流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)，IRX1過表達對細胞凋亡影響不明顯（P0464）。⑤IRX1基因過表達細胞株增殖能力降低，與親本組SGC7901細胞和SGC7901VECT細胞相比差別具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0036）。⑥SGC7901IRX1體外克隆形成能力較其他兩組細胞降低，SGC7901VECT和SGC7901IRX1形成克隆數(shù)分別為651716和481398，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0026）；形成的克隆直徑明顯小于對照組。⑦IRX1基因轉(zhuǎn)染細胞劃痕愈合速度較對照組慢；TRANSWELL小室侵襲實驗中，侵襲人工基底膜的細胞數(shù)在SGC7901、SGC7901VECT和SGC7901IRX1組分別為16427465，16926957和7497109，具有顯著性差異（P0000）。TRANSWELL小室遷移實驗中，遷移穿過人工基底膜的細胞數(shù)在SGC7901、SGC7901VECT和SGC7901IRX1組分別為1269006、13488561和6056721，具有顯著性差異（P0000）。⑧裸鼠皮下成瘤實驗結(jié)果表明，IRX1基因過表達胃癌細胞株與對照細胞株相比，裸鼠皮下成瘤能力明顯下降（P0001），實驗組腫瘤組織形態(tài)學(xué)顯示核分裂像減少，KI67免疫組織化學(xué)檢測顯示標記指數(shù)降低（P0000）。