簡介：南華大學(xué)碩士學(xué)位論文人胃癌細胞高侵襲亞系的篩選及其生物學(xué)特性的研究姓名周志姣申請學(xué)位級別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師朱建思200705014人胃癌細胞高侵襲亞系的篩選及其生物學(xué)特性的研究人胃癌細胞高侵襲亞系的篩選及其生物學(xué)特性的研究碩士研究生周志姣導(dǎo)師朱建思教授中文摘要目的目的采用TRANSWELL小室篩選胃癌細胞高侵襲亞系并研究其生物學(xué)特性。旨在進一步探討胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移機制。方法方法利用TRANSWELL小室篩選高侵襲力胃癌細胞亞系。并通過HE染色觀察母亞兩系細胞形態(tài)；WESTERNBLOT檢測兩系細胞ECADHERIN和TIMP1蛋白變化并對各條帶進行灰度分析；TRANSWELL檢測細胞遷移能力變化；用免疫組化SABC法觀察母亞兩系細胞NM23H1蛋白表達情況并對其結(jié)果進行定性、定位及圖象分析；流式細胞術(shù)檢測細胞周期以及繪制細胞生長曲線。結(jié)果結(jié)果利用TRANSWELL小室反復(fù)篩選十次，從MKN28細胞中篩選出高侵襲力胃癌細胞亞系MKN28S10。母亞兩系細胞形態(tài)上無明顯差異，細胞均呈多邊形，大小不均，核漿比大，核圓形、橢圓形；但亞系中ECADHERIN、TIMP1蛋白表達同母系相比顯著降低MKN28S10中E–CADHERIN蛋白表達的相對灰度值為042003，較MKN28細胞（相對灰度值為090004）明顯降低（P＜005）而MKN28S10的TIMP1蛋白表達的相對灰度值（052006）較MKN28的TIMP1蛋白表達089005）明顯降低（P＜005）免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示亞系中NM23H1的表達明顯低于母系P005亞系NM23H1的平均光密度（71811881）較母系（127121568）明顯降低（P005）；顯微鏡下細胞計數(shù)示亞系遷移至膜背面的數(shù)量10025050視野較母系6175206視野明顯增多P005，細胞運動能力明顯增強；細胞周期檢測表明MKN28S10細胞S期細胞比例為667，高于MKN28細胞在此期的DNA相對含量。而且，亞系細胞增殖指數(shù)PI（746）明顯高于母系（648）；亞系體外生長速度快于母系。

簡介：論文題EI￡BL二呈基圈皇厶前到腿疸L叢Q壘￡細胞生物堂紅盤相差眭砑窒答辯委員會主席答辯委員會成員王忠論文答辯日期2Q壘生5月28目溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文1

簡介：類號分級密國際進類號十分（UDC）第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)位論文伊班膦酸鈉對口腔內(nèi)有成骨潛能細胞生物學(xué)功能的影響及MICRNA相關(guān)機制初探題題（名和副名）周強（作者姓名）導(dǎo)教師指姓名陳永進教授導(dǎo)教師單指位第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院請學(xué)級別申位博士專業(yè)名稱口腔臨床醫(yī)學(xué)論文提交日期201104答辯日期201105論時間文起止2008年9月至2011年4月學(xué)單位授予位第四軍醫(yī)大學(xué)伊班膦酸鈉對口腔內(nèi)有成骨潛能細胞生物學(xué)功能的影響及MICRNA相關(guān)機制初探研究生周強學(xué)科專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院導(dǎo)師陳永進教授關(guān)鍵詞伊班膦酸鈉牙周膜干細胞增殖成骨分化中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2010年4月

簡介：博士學(xué)位論文論文題目生長抑制特異蛋白GAS2在慢性粒細胞白血病中異常高表達的生物學(xué)意義研究研究生姓名周海俠指導(dǎo)教師姓名吳德沛教授專業(yè)名稱內(nèi)科學(xué)（血液?。┭芯糠较虬籽》肿又虏C制論文提交日期2014年3月

簡介：目的觀察羅格列酮對體外培養(yǎng)肝星狀細胞（HSC）增殖、凋亡、細胞周期及超微結(jié)構(gòu)的影響；觀察羅格列酮對普通培養(yǎng)的HSC和經(jīng)肝癌條件培養(yǎng)基作用后的HSC表達ASMA、PDGFB的影響，初步探討羅格列酮影響HSC生物學(xué)特性的作用機制。方法⑴MTT檢測不同濃度羅格列酮（0、10、125、15、175、20ΜMOLL）無血清培養(yǎng)基對HSC增殖的影響。⑵流式細胞儀（FCM）檢測不同濃度羅格列酮（0、10、125、15、175、20ΜMOLL）無血清培養(yǎng)基對HSC細胞周期和凋亡率的影響。⑶電鏡（TEM）觀察15ΜMOLL的羅格列酮無血清培養(yǎng)基對HSC超微結(jié)構(gòu)的影響。⑷免疫組化（IHC）半定量檢測1）不同濃度羅格列酮（濃度組別與前者相同）無血清培養(yǎng)基對HSC表達ASMA、PDGFB的影響；2）HSC經(jīng)24H肝癌細胞（HCC）條件培養(yǎng)基（按1∶1、1∶2的比例稀釋）處理，再用15ΜMOLL羅格列酮作用于HSC（另設(shè)空白對照組、單純羅格列酮組和單純24H肝癌細胞條件培養(yǎng)基組），觀察HSC的ASMA、PDGFB表達變化。上述免疫組化結(jié)果用計算機圖像分析技術(shù)進行半定量分析。結(jié)果①MTT結(jié)果顯示羅格列酮對HSC的增殖具有抑制作用，抑制率隨著羅格列酮濃度的增加而增加，兩者呈量效依賴關(guān)系。②FCM結(jié)果顯示經(jīng)不同濃度羅格列酮作用后，HSC的凋亡率、G0G1期細胞比例均隨著濃度的增加而增加，各濃度組凋亡率的增加均具有非常顯著意義（P＜001），羅格列酮濃度高于15ΜMOLL時，G0G1期細胞比例增加具有顯著意義（P＜005）。③透射電鏡觀察，經(jīng)羅格列酮作用后，HSC的生長狀態(tài)受到抑制，部分細胞呈現(xiàn)凋亡相關(guān)的超微結(jié)構(gòu)改變，如細胞體積變小，表面絨毛結(jié)構(gòu)減少或消失，核染色質(zhì)凝集并邊集，核固縮，并可見凋亡小體。④免疫組化結(jié)果顯示羅格列酮作用于HSC后，其ASMA、PDGFB的表達水平隨羅格列酮濃度的增加而減少，且兩者的表達具有緊密相關(guān)性（R0971）；羅格列酮作用于經(jīng)肝癌細胞條件培養(yǎng)基處理后的HSC，其ASMA、PDGFB的表達與空白對照組和單純肝癌細胞條件培養(yǎng)基處理組相比，均有顯著下降（P＜005）。結(jié)論羅格列酮能抑制HSC的增殖、活化。其作用機制可能與阻滯HSC于G0G1期、誘導(dǎo)HSC凋亡及降低HSC的PDGF表達有關(guān)。同時羅格列酮也可抑制癌性條件下的HSC活化和PDGF表達。

簡介：背景介紹與研究目的炎癥反應(yīng)在機體內(nèi)的部分心血管疾病及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)展及轉(zhuǎn)歸過程中發(fā)揮著重要作用，包括T細胞，B細胞及大多數(shù)巨噬細胞在內(nèi)的白細胞均可遷移到病變部位并聚集。通常評價這些疾病的炎癥反應(yīng)需要組織學(xué)檢查，但這種檢查只能觀察到病變部位炎癥存在的靜止情況，不能動態(tài)的觀察炎癥細胞遷移到病變部位的過程，而且具有創(chuàng)傷性。如果能實時并非創(chuàng)性觀察這些疾病的炎癥反應(yīng)，則對疾病的治療及預(yù)后有重要意義。近年來分子影像的迅速發(fā)展使其成為可能。通過超順磁性氧化鐵SPIO對巨噬細胞進行標記，從而示蹤其在體內(nèi)的遷移及分布，能夠動態(tài)非創(chuàng)性的評價體內(nèi)的炎癥反應(yīng)。當SPIO通過靜脈注入體內(nèi)后，隨血液在人體內(nèi)循環(huán)。在體內(nèi)SPIO主要通過肝臟的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)和血液中的吞噬細胞攝取清除，當SPIO被血液中的吞噬細胞攝取后，并不能再從細胞內(nèi)排出，這樣便對吞噬細胞進行了標記，而標記的吞噬細胞可以游走到炎癥所在部位并聚集，在磁共振掃描時，會造成炎癥所在部位的T2弛豫時間縮短，從而在磁共振圖像上顯示為信號降低。一般來講，SPIO主要是由內(nèi)核及包被材料兩部分構(gòu)成，納米顆粒內(nèi)徑從十幾納米到幾百納米。內(nèi)核由FE3O4和或ΓFE2O3構(gòu)成，包被材料的種類很多，包被材料的存在提高了SPIO的穩(wěn)定性及生物相容性，而且有包被材料的存在，還可以便于對SPIO進行進一步的修飾，從而能夠使SPIO具有靶向性或特異性。到目前為止，已有很多學(xué)者利用SPIO來標記被活化的或沒有被活化的巨噬細胞，并對體內(nèi)炎癥反應(yīng)進行評價。這些研究都充分說明利用SPIO標記巨噬細胞對體內(nèi)炎癥反應(yīng)進行評價具有很大優(yōu)勢。雖然如此，由于SPIO包被材料和內(nèi)徑存在很大差異性，在這些研究中所利用的SPIO的包被材料及內(nèi)徑大小均不相同，所以得到的結(jié)果可比性較差。如果能定義一種最佳的SPIO用來標記巨噬細胞，不僅標記效率高，而且生物相容性高，則對進一步的研究有重要意義。但這方面的研究還很少。在本研究中，我們在體外比較了檸檬酸和葡聚糖包被的SPIO對小鼠巨噬細胞的標記效率的不同，并對標記后細胞功能的變化及磁共振成像效應(yīng)進行了評價。從而嘗試了解哪種SPIO更適于標記巨噬細胞，為進一步的生物應(yīng)用提供試驗基礎(chǔ)。材料和方法按照共沉淀法合成檸檬酸及葡聚糖包被的SPIO。分離6周齡左右的雌性ICR小鼠腹腔巨噬細胞。在巨噬細胞與濃度為025MGMLSPIO共同孵育1小時后，通過普魯士藍染色對兩種材料包被的SPIO標記巨噬細胞的效率進行觀察。濃度分別為01、025、05、075、10MGML的SPIO對巨噬細胞進行標記后，采用CALCEINAM法對不同濃度的SPIO標記后的巨噬細胞活性進行評價。巨噬細胞與濃度為05MGML的SPIO共同孵育1小時后，通過細胞劃痕試驗對細胞的遷移能力的變化進行觀察，用IMAGEJ進行像素分析來評價細胞遷移能力的變化。巨噬細胞與濃度為05MGML的SPIO共同孵育1小時后，通過酶聯(lián)標記法測定標記細胞促炎癥因子IL6的24小時分泌量。01、025、05、075、10MGML四種濃度的SPIO與巨噬細胞共同孵育1小時后，用05％瓊脂凝膠固定于96孔板，在PHILIPS30T磁共振全身掃描儀上進行掃描，對不同孵育濃度時弛豫時間的變化進行評價。SPIO孵育濃度對細胞弛豫時間及細胞活性的影響用雙向方差分析，然后進行多重比較分析。SPIO對細胞遷移能力及促炎癥因子的分泌量的影響通過STUDENTT檢驗進行。結(jié)果利用經(jīng)典共沉淀法合成的SPIO為棕黑色膠狀液體，檸檬酸包被的SPIO水合內(nèi)徑約100NM，檸檬酸包被的SPIO水合內(nèi)徑約150NM，納米粒度分布較好4℃保存SPIO穩(wěn)定性好。普魯士藍染色結(jié)果顯示未與SPIO共同孵育的巨噬細胞被染成均質(zhì)紅色，而與SPIO共同孵育1小時后的巨噬細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)藍色鐵顆粒，檸檬酸包被的SPIO明顯比葡聚糖包被的SPIO更易進入到細胞內(nèi)，即標記效率高。細胞的活性測定結(jié)果顯示細胞活性隨SPIO孵育濃度的增加而降低，當SPIO孵育濃度為025MGML起，兩種材料包被的SPIO對細胞均存在毒性作用。另外通過比較同種孵育濃度兩種包被材料的SPIO細胞活性，發(fā)現(xiàn)兩種包被材料的SPIO在相同的濃度時對巨噬細胞的影響無統(tǒng)計學(xué)意義。細胞遷移能力測定結(jié)果顯示兩種包被材料的SPIO標記的細胞的遷移能力無明顯變化，這便說明SPIO不會影響細胞的遷移能力。促炎癥因子分泌量測定結(jié)果顯示檸檬酸包被的SPIO標記的巨噬細胞促炎癥因子的分泌量增大而葡聚糖包被的SPIO標記的細胞則無增大。在磁共振掃描的結(jié)果中顯示檸檬酸包被的SPIO標記的巨噬細胞可以明顯引起T2弛豫時間的降低，而葡聚糖包被的SPIO在最高孵育濃度時才會引起T2弛豫時間的降低。結(jié)論體外試驗證實，檸檬酸包被的SPIO更適于標記巨噬細胞。檸檬酸包被的SPIO相對于葡聚糖包被的SPIO具有更高的巨噬細胞標記效率，更易引起磁共振信號的變化在對細胞功能影響方面，檸檬酸包被的SPIO標記的巨噬細胞的細胞活性及細胞遷移能力的變化與葡聚糖包被的SPIO標記的巨噬細胞相同但促炎癥因子分泌量會增大。

簡介：河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文IL8基因真核表達載體的構(gòu)建及其對OVCAR3細胞生物學(xué)機制的研究姓名趙娟申請學(xué)位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師程建新李萬勝20080301河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師或指導(dǎo)小組的指導(dǎo)下，由本人獨立完成。本學(xué)位論文研究所獲的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué)，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔相應(yīng)的法律責任。研究生簽名磊嘲導(dǎo)師簽名榴學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)簽名誘幸弓月形日河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)。F進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責自負。研究生躲參晴導(dǎo)師躲徽D8年弓。月彩日

簡介：復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文綠膿桿菌制劑對乳腺癌細胞生物學(xué)特性的影響及機制研究姓名劉哲斌申請學(xué)位級別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師邵志敏20100408綠膿桿菌制劑對乳腺癌細胞生物學(xué)特性的影響及機制研究復(fù)旦大學(xué)博士論文同作用于乳腺癌細胞，作為競爭性作用試劑，來檢測其對PAMSHA作用效應(yīng)的影響。主要采用WST法、ANNEXINVFITC和PI染色流式細胞計數(shù)法、HOECHST33258染色、掃描電鏡、WESTERNBLOT等方法檢測甘露糖共培育對PAMSHA引起的抗增殖、細胞凋亡、細胞周期阻滯等的影響。2、通過WESTERNBLOT檢測PAMSHA作用于乳腺癌細胞后EGFR通路下游主要分子總EGFR、磷酸化EGFR、總AKT、磷酸化AKT、總ERK和磷酸化ERK的表達水平。3、設(shè)計并合成針對人EGFR基因的RNA干擾片段，將SIRNA片段瞬轉(zhuǎn)入乳腺癌細胞中，WESTERNBLOT法驗證片段下調(diào)EGFR表達的有效性。主要觀察EGFR下調(diào)后PAMSHA對EGFR下游通路蛋白表達水平以及細胞增殖水平的影響，以驗證EGFR是否為PAMSHA作用靶點。4、通過WESTERNBLOT以及ELISA方法檢測PAMSHA作用于乳腺癌細胞后侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達的影響。5、裸鼠乳房脂肪墊MAMMARYFATPAD，MFP接種人乳腺癌細胞，探討PAMSHA對裸鼠原位腫瘤生長及肺轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果第一部分1、乳腺癌細胞株MDAMB21HM以及MDAMB468細胞體外培養(yǎng)，PAMSHA對乳腺癌細胞有直接殺傷作用，且有劑量依賴性以及時間依賴性，而對MCF7細胞以及正常乳腺上皮MCF10A相對耐藥。而PA對乳腺癌細胞沒有明顯的殺傷作用。2、PAMSHA在體外能引起GOGL期的細胞比例增高，而S期細胞比例顯著降低。3、PAMSHA作用后能使乳腺癌細胞呈現(xiàn)出大量的圓形漂浮凋亡細胞形態(tài)，產(chǎn)生大量的吞噬體以及自噬體樣空泡，體現(xiàn)為凋亡表現(xiàn)形態(tài)；細胞胞核呈現(xiàn)典型的凋亡細胞形態(tài)特征。4、PAMSHA作用于乳腺癌細胞后凋亡細胞的比率顯著升高。5、PAMSHA對乳腺癌細胞有殺傷作用以凋亡為主，并依賴于CASPASE通路，

簡介：白癜風是一種色素脫失性皮膚病以表皮、粘膜和毛發(fā)的黑素細胞脫失形成的白斑、灰白發(fā)為主要癥狀其發(fā)病機制存在自身免疫學(xué)、氧化應(yīng)激學(xué)、神經(jīng)學(xué)以及遺傳學(xué)等多種假說。近年來國內(nèi)外大量研究表明白癜風的發(fā)病與遺傳因素密切相關(guān)可能是一種多基因遺傳病。據(jù)報道INNVIT基因是與白癜風患者的黑素細胞表達下調(diào)相關(guān)的新基因。通過序列比對發(fā)現(xiàn)INNVIT基因為缺少81BP內(nèi)含子的FBXO11基因。為了探討INNVIT基因在黑素細胞中的生物學(xué)功能明確INNVIT基因在白癜風中的作用本論文構(gòu)建了沉默INNVIT基因的SIRNA及INNVIT基因過表達載體P3XFP120研究INNVIT基因的抑制和過表達對黑素細胞生物學(xué)活性及酪氨酸酶輸出的影響。論文通過設(shè)計構(gòu)建了人工合成的特異性SIRNA同時構(gòu)建了該基因的過表達質(zhì)粒同時分別轉(zhuǎn)染黑素細胞從而研究INNVIT基因抑制和過表達對黑素細胞生物學(xué)功能及黑素細胞酪氨酸酶表達及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輸出的的影響。首先檢測了INNVIT基因MRNA和蛋白的表達SIRNA的抑制作用顯著降低了INNVIT基因MRNA和蛋白的表達量P3XFP120質(zhì)粒的過表達顯著增加了INNVIT基因MRNA和蛋白的表達量。其次INNVIT基因抑制和過表達對黑素細胞增殖、凋亡及遷移相關(guān)生物學(xué)功能的影響。采用SIRNA抑制和質(zhì)粒載體過表達后INNVIT基因的過表達促進了細胞增殖抑制細胞凋亡INNVIT基因的抑制使黑素細胞會出現(xiàn)從G0G1期到S期的細胞周期停滯現(xiàn)象極大地降低了細胞增殖和存活的能力同時顯著增加黑素細胞的早期凋亡水平。細胞遷移能力及酶活性檢測表明SIRNA抑制和過表達INNVIT基因?qū)毎w移力及2金屬蛋白酶MMP9和MMP的表達沒有影響。推測INNVIT基因的抑制主要通過促進細胞凋亡和細胞周期停滯而降低黑素細胞的存活和增殖能力。最后研究了INNVIT基因?qū)谒丶毎麅?nèi)質(zhì)網(wǎng)膨脹與酪氨酸酶的相關(guān)性。掃描電鏡觀察表明SIRNA抑制的黑素細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有明顯的膨脹擴大現(xiàn)象其酪氨酸酶蛋白表達存在極顯著的增加。細胞免疫熒光共定位了酪氨酸酶和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)標記鈣網(wǎng)蛋白發(fā)現(xiàn)抑制組細胞的酪氨酸酶大部分停留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中表明其酪氨酸酶的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輸出發(fā)生阻滯可見抑制INNVIT基因表達影響了黑素細胞的酪氨酸酶從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輸出導(dǎo)致了細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膨脹從而導(dǎo)致細胞生物學(xué)活性異常。以上研究表明本研究為INNVIT基因影響黑素細胞的增殖和凋亡能力提供了有力的證據(jù)并揭示了白癜風黑素細胞酪氨酸酶的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能性輸出障礙的可能機制。

簡介：廈門大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨立完成的研究成果。本人在論文寫作中參考其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表的研究成果，均在文中以適當方式明確標明，并符合法律規(guī)范和廈門大學(xué)研究生學(xué)術(shù)活動規(guī)范試行?！硗猓搶W(xué)位論文為課題組的研究成果，獲得課題組經(jīng)費或?qū)嶒炇业馁Y助，在實驗室完成。請在以上括號內(nèi)填寫課題或課題組負責人或?qū)嶒炇颐Q，未有此項聲明內(nèi)容的，可以不作特別聲明。VNA簽孫剖略／JT游S只叫ET廈門大學(xué)學(xué)位論文著作權(quán)使用聲明MITILLLLLLIILLIJIIIIIIITL吣Y2074214本人同意廈門大學(xué)根據(jù)中華人民共和國學(xué)位條例暫行實施辦法等規(guī)定保留和使用此學(xué)位論文，并向主管部門或其指定機構(gòu)送交學(xué)位論文包括紙質(zhì)版和電子版，允許學(xué)位論文進入廈門大學(xué)圖書館及其數(shù)據(jù)庫被查閱、借閱。本人同意廈門大學(xué)將學(xué)位論文加入全國博士、碩士學(xué)位論文共建單位數(shù)據(jù)庫進行檢索，將學(xué)位論文的標題和摘要匯編出版，采用影印、縮印或者其它方式合理復(fù)制學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于。1經(jīng)廈門大學(xué)保密委員會審查核定的保密學(xué)位論文，于年月日解密，解密后適用上述授權(quán)。2不保密，適用上述授權(quán)。請在以上相應(yīng)括號內(nèi)打段√”或填上相應(yīng)內(nèi)容。保密學(xué)位論文應(yīng)是已經(jīng)廈門大學(xué)保密委員會審定過的學(xué)位論文，未經(jīng)廈門大學(xué)保密委員會審定的學(xué)位論文均為公開學(xué)位論文。此聲明欄不填寫的，默認為公開學(xué)位論文，均適用上述授權(quán)。聲明人簽名杏＼褂移矽L硨5月卅日

簡介：分類號R7352密級公開HEDGEHOGGLIL信號通路在胃癌干樣細胞生物學(xué)行為中的作用及機制研究THFUNCTIONANDMECHANISMOFEUNCTIONANECANIL。NHEDGEHOGGLILSIGNALINGPATHWAYINBIOLOGICALBEHAVIOROFSTEMCELLLIKEGASTRICCANCERCELLS赫￡凌腑答辯委員會主席易孫7％論文答辯日期二V一五年五月彩日解放軍醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文目錄英文縮略詞匯對照7中文摘要9ABSTRACT11前言。15日U舌第一部分胃癌干細胞的分離和鑒定21一引言2～1號I舌二材料與方法22三結(jié)果24四討論27第二部分SHRNA下調(diào)胃癌干樣細胞GLIL基因表達對其克隆形成、細胞增殖、遷徙能力、化療耐受性的影響32一引言32號I舌TJ2二材料與方法33三結(jié)果42四討論50第三部分ZNRF3對HEDGEHOGGLIL信號通路的調(diào)節(jié)作用55一引言55二材料與方法55三結(jié)果62四討論65結(jié)論68文獻綜述69攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況81致謝83

簡介：背景和目的慢性疼痛的治療是目前人類尚未解決的難題之一，嚴重地影響了人類的生活質(zhì)量，由于目前臨床使用的鎮(zhèn)痛藥物存在的缺陷，療效不能令人滿意。生物鎮(zhèn)痛由于其模擬人體生理分泌的獨有的特點，具有明顯的優(yōu)勢，是未來疼痛治療的新方向，而轉(zhuǎn)基因細胞移植鎮(zhèn)痛（TRANSPLANTATIONOFTRANSGENEICCELLSFANALGESIA）則是其中的最具有的發(fā)展?jié)摿Φ姆较颉９撬栝g充質(zhì)干細胞（BONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELLSBMSCS）來源豐富，組織相容性好，免疫原性低，具有多向分化潛能，是較為理想的移植細胞。內(nèi)源性阿片肽腦啡肽，廣泛分布于外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)CENTRALNERVOUSSYSTEMCNS，是一種重要的鎮(zhèn)痛介質(zhì)。本研究擬利用RTPCR法構(gòu)建人前腦啡肽基因（PROENKEPHALINPENK）的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體，建立能表達前腦啡肽基因及分泌腦啡肽蛋白的人骨髓間充質(zhì)干細胞系并對其進行生物學(xué)特性的鑒定，為疼痛的基因治療的實驗研究奠定基礎(chǔ)。材料和方法1攜帶人前腦啡肽基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建從人腎上腺嗜鉻細胞瘤組織中提取總RNA，RTPCR法擴增出前腦啡肽基因全長CDNA，經(jīng)測序正確后，核酸內(nèi)切酶ECI、SALI酶切PCR產(chǎn)物，定向克隆入PBABEPURO載體，重組質(zhì)粒PBABEPENK經(jīng)酶切及測序鑒定。2人前腦啡肽基因修飾的人骨髓間充質(zhì)干細胞系的建立及其生物學(xué)特性研究采用直接貼壁法從人骨髓標本中分離HMSCS。采用脂質(zhì)體介導(dǎo)將重組質(zhì)粒PBABEPENK轉(zhuǎn)染包裝病毒細胞株P(guān)HOENIX293T細胞，收集病毒上清，將其感染人骨髓間充質(zhì)干細胞，經(jīng)過嘌呤霉素篩選得穩(wěn)定表達PENK的骨髓間充質(zhì)干細胞細胞系。選用連續(xù)傳代培養(yǎng)人前腦啡肽基因修飾的人骨髓間充質(zhì)干細胞系的和未轉(zhuǎn)化的人骨髓間充質(zhì)干細胞，觀察傳代、凍存和復(fù)蘇對細胞形態(tài)及生長的影響；比較兩種細胞的生長特性和繪制生長曲線；流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染兩組細胞的表面標志CD44，CD29，CD34，CD45的表達。將轉(zhuǎn)染前后細胞分別行成脂誘導(dǎo)及成骨誘導(dǎo)，誘導(dǎo)后脂肪細胞油紅染色，成骨細胞茜素紅染色觀察。分別用RTPCR方法檢測PENK基因的表達、免疫熒光法及酶聯(lián)免疫吸附測定ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAY，ELISA法測定亮氨酸腦啡肽LEUENKEPHALINLEK）的表達。3統(tǒng)計分析實驗結(jié)果以均數(shù)±標準差（SDX±或均數(shù)±標準誤（XSX±表示。定量資料經(jīng)正態(tài)和方差齊性檢驗后，組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析及雙因素析因分析，組間兩兩比較采用LSD方法分析，以P結(jié)果1重組質(zhì)粒PBABEPENK經(jīng)ECI、SALI酶切及測序鑒定正確，重組質(zhì)粒包含人PENK基因完整編碼區(qū)。2轉(zhuǎn)染后細胞系可在體外連續(xù)傳代至20代以上；傳代、凍存和復(fù)蘇對細胞形態(tài)及生長無影響（P0386）。與第4代HMSCS相比，轉(zhuǎn)染后細胞的生長情況沒有明顯差異（P0873）。流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染前后細胞表明標志沒有明顯差異CD29（P0136）、CD44（P0352）表達均（），而CD34（P0466）、CD45（P0474）表達均（）；轉(zhuǎn)染前后細胞均可在體外培養(yǎng)條件上誘導(dǎo)分化為脂肪細胞及成骨細胞，與第4代HMSCS相比，轉(zhuǎn)染后細胞成脂分化能力沒有明顯差異（P0944）。RTPCR及免疫熒光法證實HMSCPENK中PENK基因表達水平升高且細胞內(nèi)LEK含量升高，ELISA法檢測到細胞培養(yǎng)液上清中LEK表達量增高（P結(jié)論1成功構(gòu)建了含人前腦啡肽原基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。2成功構(gòu)建了人前腦啡肽原基因修飾的人骨髓間充質(zhì)干細胞系，可在體外能長期培養(yǎng)并維持分裂增殖能力，保留了原始人骨髓間充質(zhì)干細胞特征性的分化表型及多向分化能力，該細胞系可在體外穩(wěn)定表達和分泌腦啡肽，可將其作為轉(zhuǎn)基因細胞移植鎮(zhèn)痛的種子細胞做更進一步的研究。

簡介：答辯委員會主席工查明塾援答辯委員會成員由圭筮數(shù)援奎焦麴援醫(yī)瞳明數(shù)援溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中英文縮略詞表縮略語英文全稱中文全稱ACRBISAGA～心KANOVAAPLBACTINBCABCL2C越P雒EDMSODNAEDTAERFBSGLOHER2幾JNKM魄PKMGN咖S～ⅡTODPBSPKCPMSFPRROSSDSDSPAGETBSTACRYLAMIDEBISACRYLAMIDE丙烯酰胺AMINOGUANIDINE氨基胍AMPACTIVATEDPROTEINKIN笛EAMP依賴性蛋白激酶ANALYSISOFVARIANCE方差分析AMMONIUMPERSULFATE過硫酸銨PACTIN肌動蛋白BICINCHONININCACID聚氰基丙烯酸正丁酯BCELLLYMPHOMA／LEUKEMIA2B細胞淋巴瘤／白血病2CASP越E半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶DIMETHYLSULPHOXIDE二甲基亞砜DEOXYRIBONUCLEICACID脫氧核糖核酸ETHYLENEDIAMINETETRAACETICACID乙二胺四乙酸ESTROGENRECEPTOR雌激素受體FETALBOVINESELTLM胎牛血清GLYOXALASE乙二醛酶HUMANEPIDERMALGROWTHFACTORRECEPTOR2人表皮生長因子受體INTERLEUKIN白介素CJUNNTERMINALKINASE氨基末端激酶MITOGENACTIVATEDPROTEINKIN硒E絲裂原活化蛋白激酶METHYLGLYOXAL丙酮醛MATRIXMETALLOPROTEINASES基質(zhì)金屬蛋白酶MTHYLTHIAZOLYLDIPHENYLTETRAZOLIUMBROMIDE噻唑藍OPTICALDENSITY吸光度PHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖液PROTEINKINASEC蛋白激酶CPHEYLMETHYLSULOLHYLFLUORIDE苯甲基磺酞胺PROGESTERONERECEPTOR孕激素受體REACTIVEOXYGENSPECIES活性氧STANDARDDEVIATION標準差SODIUMDODECYLSULFATEPOLYACRYLAMIDEGEL十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰ELECTROPHORESIS胺凝膠電泳TRISBUFFEREDSALINEANDTWEEN三羥甲基氨基甲烷鹽緩沖液1

簡介：博士學(xué)位論文專業(yè)學(xué)位學(xué)校代碼10023學(xué)號B2012003040肝細胞癌的早期臨床結(jié)局和遠期預(yù)后相關(guān)分子生物學(xué)因素研究RESEARCHOFEARLYCLINICALOUTCOMEANDLONGTERMPROGNOSTICMOLECULARFACTORINHEPATOCEL1ULARCARCINOMA所院姓名指導(dǎo)教師導(dǎo)師小組學(xué)科專業(yè)研究方向完成日期中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院劉發(fā)強吳健雄教授林東昕教授、譚文教授腫瘤學(xué)肝臟腫瘤的外科治療二零一五年五月一令一血，牛血月北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士研究生學(xué)位論文圖索弓圖索引圖1研究技術(shù)路線圖14圖2健康狀況轉(zhuǎn)歸示意圖18圖3決策模型結(jié)構(gòu)示意圖19圖4決策模型分析路線圖21圖5術(shù)后指標變化2328圖6住院天數(shù)和住院費用2829圖7決策模型30圖8決策模型的回乘分析結(jié)果31圖9CEA曲線32圖10單因素敏感性分析的參數(shù)錄入33圖11單因素敏感性分析的TORNADO圖形分析結(jié)果35圖12EENPN組的術(shù)后有并發(fā)癥單因素敏感性分析的最大支付意愿36圖13按WHO的WTP繪制的成本一效果可接受曲線37圖14按本研究確定的WTP繪制的成本一效果可接受曲線38圖15按本研究與WHO的WTP之間的成本一效果可接受曲線39圖16EN保護肝臟、改善肝功能的作用機理41圖17EN縮短住院天數(shù)和降低住院費用效應(yīng)42圖18RNA的分類56圖19MIRNA的生物合成過程與功能57圖20研究流程圖60圖21MIRNA相關(guān)SNP的文獻分析61圖22SEQUENOMSNP位點分型檢測法具體技術(shù)路線圖65圖23KAPLANMEIER生存曲線7072圖24KAPLANMEIER生存曲線SNP74圖25成熟MIRNAL95序列圖77圖26HASMIR195相關(guān)SNP位點圖78

簡介：博士學(xué)位論文學(xué)校代碼10023學(xué)號B2009394W丁7基因表達改變對白血病細胞生物學(xué)特征的影響及相關(guān)機制研究所院姓名指導(dǎo)教師導(dǎo)師小組學(xué)科專業(yè)研究方向完成日期血液病醫(yī)院血液學(xué)研究所李艷秘營昌教授王建祥王敏饒青教授內(nèi)科血液學(xué)白血病臨床與基礎(chǔ)2011年5月中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院清華大學(xué)醫(yī)學(xué)部博士學(xué)位論文中文摘要研究目的觀察WTL基因及蛋白在白血病細胞中的表達及亞細胞定位情況，研究WTL蛋白抑制劑一姜黃素，對白血病細胞尤其是慢粒急變細胞系一K562增殖能力的影響，并探討相關(guān)機制。采用RNA干擾技術(shù)，以WTL特異性SM礬A下調(diào)WTL的表達，觀察細胞的增殖能力、自我更新能力、細胞周期、凋亡及分化等生物學(xué)效應(yīng)，進一步探究WTL與白血病細胞生物學(xué)特征改變相關(guān)的機制。研究方法采用REALTIMEPCR和W色ST咖BLOT方法觀察WTLMI礬A及蛋白在不同白血病細胞系中的表達及亞細胞定位，同時采用免疫細胞化學(xué)方法觀察WTL的亞細胞定位。CLUDMATINIILLMUNOPRECIPITA【TIONDNASELECTIONANDLIGATIONCHIPDSL方法用于尋找WTL可能的轉(zhuǎn)錄調(diào)控靶基因。MTT方法觀察細胞的增殖并繪制增殖曲線、觀察姜黃素對細胞生長的抑制作用及與格列衛(wèi)、依托泊甙VP16的協(xié)同作用，計算增殖抑制率。采用流式細胞技術(shù)檢測細胞周期、凋亡及分化等相關(guān)指標。設(shè)計WTL特異的短發(fā)夾RNA即WTLSILRNA片段，構(gòu)建PLKO1PURO載體，轉(zhuǎn)染293T細胞，包裝慢病毒，感染K562細胞，進而檢測WTL基因下調(diào)后細胞生物學(xué)效應(yīng)的改變，同時分析WTL可能的靶基因一W州BCATELLIN信號通路相關(guān)基因的變化。結(jié)果WTL基因在多種白血病細胞系中表達Ⅳ937細胞除外，尤其以K562細胞高表達；WESTEMBLOT及細胞免疫熒光均提示W(wǎng)TL蛋白在細胞核及胞漿中均有分布，以胞漿中為主。因K562細胞高表達WTL，且為慢粒急變細胞系，對多種常規(guī)化療藥物不敏感，故后續(xù)實驗研究集中在K562細胞進行1、采用WTL蛋白抑制劑一姜黃素處理細胞，發(fā)現(xiàn)其明顯抑制細胞的增殖，呈劑量、時間依賴性，其IC50值在24、48及72小時分別為2815PM、3379“M及3812PM。姜黃素聯(lián)合慢粒治療的靶向藥物一酪氨酸激酶抑制劑格列衛(wèi)，二者具有協(xié)同抗白血病細胞增殖的作用。檢測細胞表面分化抗原發(fā)現(xiàn)，姜黃素處理后CDL3表達明顯增加，CDLLB稍有增加，提示姜黃素有促使細胞向成熟階段分化的潛能；細胞周期分析發(fā)現(xiàn)，姜黃素使G2／M期細胞比例較對照組明顯增高711246VS2850349，而GO／GL期及S期細胞比例減低。2、設(shè)計針對WTL基因的特異SM礬A，下調(diào)K562細胞中WTL基因的內(nèi)源表達，發(fā)現(xiàn)WTLSI刪A干擾組細胞增殖能力減弱、集落形成能力明顯減低，但無明顯細胞凋亡及分化趨勢；細胞周期分析發(fā)現(xiàn)，干擾組G0／GL期細胞比例明顯增加，而S期比例減低；聯(lián)合藥物實驗發(fā)現(xiàn)，WTLSHRNA干擾組細胞對VP16更敏感，其增殖抑制作用強于對照組。3、進一步探討WTL在白血病發(fā)生中的相關(guān)作用機制，CLLIPDSL啟動子芯片分析結(jié)果顯示，WTL參與多種信號通路相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，其中主要包括WNT／3