抗ω-芋螺毒素MⅦA單克隆抗體的制備與鑒定.pdf

1、芋螺毒素（Conotoxin，CTX）是芋螺（Cone snails）分泌的用于捕食和防御的一種具有生物活性的小分子多肽類神經(jīng)毒素，一般含有10~30個氨基酸，大多富含二硫鍵，靶定神經(jīng)系統(tǒng)的離子通道和受體，人和動物被叮咬后一般會出現(xiàn)麻痹、抽搐、驚厥甚至死亡。ω-芋螺毒素MⅦA(ω-CTX MⅦA)含有25個氨基酸殘基，是特異的和可逆的N-型電壓敏感性鈣離子通道的阻斷劑，可當(dāng)做鎮(zhèn)痛劑治療劇烈的和慢性的疼痛。目前還沒有基于單克隆抗體的ω-C

2、TX MⅦA的免疫檢測方法。本研究制備了抗ω-CTX MⅦA的單克隆抗體，為建立ω-CTX MⅦA的免疫檢測方法奠定了基礎(chǔ)，在神經(jīng)系統(tǒng)的鈣離子通道研究中也具有潛在的應(yīng)用價值。
　　在本研究中，GST-CTX融合蛋白作為免疫抗原免疫BALB/c小鼠，Trx-CTX融合蛋白作為檢測抗原包被酶標(biāo)板，檢測和篩選抗ω-CTX MⅦA的抗體。當(dāng)抗血清效價較高時取小鼠脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，制備雜交瘤細(xì)胞。兩次細(xì)胞融合實驗的融合率分別

3、為99.27%和100%，陽性率分別為2.52%和5.03%。用有限稀釋法對篩選到的陽性孔進(jìn)行克隆化，得到了6株陽性雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為9E4、7G10-D9、7G10-C7、4A12、5H10和5G2。
　　對篩選到的6株陽性雜交瘤細(xì)胞株進(jìn)行效價和穩(wěn)定性檢測，最后得到了一株穩(wěn)定分泌ω-CTX MⅦA單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，即4A12。該雜交瘤細(xì)胞有102±2條染色體，分泌IgM類單克隆抗體。制備的腹水效價可達(dá)到1:1280