抗B型肉毒毒素Hc結(jié)構(gòu)域單克隆抗體的制備及中和B型肉毒毒素單克隆抗體的篩選.pdf

1、西南大學(xué)碩士學(xué)位論文抗B型肉毒毒素Hc結(jié)構(gòu)域單克隆抗體的制備及中和B型肉毒毒素單克隆抗體的篩選姓名：陳榮昌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：唐云明王慧20090501兩南大學(xué)學(xué)何淪文摘唼隆到pcDNA31／mychis上，然后將質(zhì)粒pcDNA31／mychissytll轉(zhuǎn)染PCI2細(xì)胞。加G418篩選，篩選單克隆細(xì)胞株。提取單克隆細(xì)胞株的總RNA，PCR簽定sytII基因的轉(zhuǎn)錄。Westemblot鑒定表明篩選到的P

2、CI2細(xì)胞系能表達(dá)sytII。用FITC標(biāo)記的標(biāo)記BHc然后與篩選到的穩(wěn)定表達(dá)sytII的PCI2細(xì)胞系孵育，熒光顯微鏡分析表明細(xì)胞被標(biāo)記上了熒光，說明篩選得到的PCI2細(xì)胞系可以作為單克隆抗體阻斷實(shí)驗(yàn)的模型，將此Pcl2細(xì)胞系稱為PCI2sytII。細(xì)胞流式結(jié)果表明得到的三株單克隆抗體能阻斷BHc與PCI2sytII的結(jié)合。單克隆抗體的識(shí)別位點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)表明，Al、A2識(shí)別相I司的表位，而Bl與A1、A2識(shí)別的位點(diǎn)是不一樣的。單一抗體中和

3、實(shí)驗(yàn)表明，篩選得到的單克隆抗體能顯著延長小鼠的死亡時(shí)間，但并不能完全保護(hù)小鼠。而組合抗體的中和實(shí)驗(yàn)表明無論是A1與B1組合，還是A2與Bl都能比單株單克隆抗體顯著延長小鼠的死產(chǎn)時(shí)間。說明本研究制備得到的單克隆抗體有一定的中和活性。ELISA檢測(cè)顯示篩選到的單克隆抗體能特異識(shí)別BoNT／B毒素。木研究篩選到了能Ifl和BoNT／B的單克隆抗體，這三株抗體能特異的識(shí)別BoNT／B，并且能一定程度上保護(hù)小鼠免受BoNT／B的傷害，為肉毒毒素的