新型熒光試劑的合成及在高效液相色譜-質(zhì)譜中的應(yīng)用.pdf

1、高效液相色譜法(HPLC)自20世紀(jì)60年代崛起，經(jīng)過數(shù)十年的發(fā)展，在理論和實(shí)踐等方面都日趨完善，。應(yīng)用范圍已涉及醫(yī)藥、環(huán)保、生命科學(xué)、石油化工等幾乎所有基礎(chǔ)和應(yīng)用研究領(lǐng)域。該法也是分析化學(xué)中發(fā)展最快、應(yīng)用最廣泛的領(lǐng)域之一。然而，由于樣品中被測(cè)組分本身性質(zhì)及其低含量的限制，并非所有化合物都可直接用于液相色譜分析。熒光檢測(cè)具有很高的靈敏度，利用熒光標(biāo)記技術(shù)使本身不發(fā)熒光的化合物(如氨基酸、脂肪胺、脂肪酸等)轉(zhuǎn)化成發(fā)射熒光的衍生物，能夠?qū)崿F(xiàn)

2、高靈敏熒光檢測(cè)。本文重點(diǎn)研究了幾種新熒光標(biāo)記試劑的合成和表征，考察了熒光標(biāo)記試劑的光譜性質(zhì)，優(yōu)化了衍生反應(yīng)條件、色譜分離條件，并將建立的方法應(yīng)用于不同實(shí)際樣品的分析中。具體工作內(nèi)容如下： 第一章：綜述了HPLC發(fā)展史、分類、色譜儀、應(yīng)用及優(yōu)缺點(diǎn)；介紹了熒光原理、影響熒光強(qiáng)度的因素和化學(xué)衍生法；分析總結(jié)了熒光標(biāo)記試劑在HPLC中的應(yīng)用概況。 第二章：高靈敏熒光衍生試劑4-(1H-菲并[9，10-d]咪唑-2-)苯甲酸(PI

3、BA)的設(shè)計(jì)合成，結(jié)構(gòu)表征。并將該熒光標(biāo)記試劑應(yīng)用于脂肪胺的高效液相色譜．質(zhì)譜分析。通過對(duì)衍生化條件和色譜分離條件的優(yōu)化，建立了脂肪胺的柱前衍生化高效液相色譜熒光檢測(cè)法，并將方法應(yīng)用于腐魚等實(shí)際樣品測(cè)定中。結(jié)果表明，衍生反應(yīng)條件溫和，衍生產(chǎn)率高，該方法的線性范圍寬，重現(xiàn)性好，靈敏度高。 第三章：設(shè)計(jì)合成高靈敏熒光衍生試劑4-(1-甲基-1H-菲并[9，10-d]咪唑-2-)苯甲酸(MPIBA)，并進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征。考查了MPIBA

4、的紫外性質(zhì)及熒光性質(zhì)。將MPIBA進(jìn)行柱前衍生并經(jīng)熒光檢測(cè)對(duì)脂肪胺進(jìn)行了高效液相色譜(HPLC)分離和在線質(zhì)譜定性。衍生物的熒光激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為λ<,ex>=260 nm，λ<,em>=446nm。 80℃下在四氫呋喃(THF)溶劑中用N-乙基-N’-[(3-二甲氨基)丙基]碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)作催化劑，衍生反應(yīng)10min后獲得穩(wěn)定的熒光產(chǎn)物。在Eclipse XDB-C<,8>色譜柱(4.6x 150 mm，5μm)上，采用梯