熒光標(biāo)記試劑制備及在高效液相色譜-質(zhì)譜中的應(yīng)用.pdf

1、高效液相色譜(HPLC)因其強(qiáng)大的分離分析能力已被廣泛應(yīng)用于許多研究和應(yīng)用領(lǐng)域，如化學(xué)、生物化學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、藥物學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)及食品衛(wèi)生、環(huán)保檢測、質(zhì)量控制等。該法也是分析化學(xué)中發(fā)展最快、應(yīng)用最廣泛的領(lǐng)域之一。然而，由于樣品中被測組分本身性質(zhì)及其低含量的限制，并非所有化合物都可直接用于液相色譜分析。熒光檢測具有很高的靈敏度，利用熒光標(biāo)記技術(shù)使本身不發(fā)熒光的化合物(如氨基酸、脂肪胺、脂肪酸等)轉(zhuǎn)化成發(fā)射熒光的衍生物，能夠?qū)崿F(xiàn)高靈敏熒光檢測

2、。本文重點(diǎn)研究了幾種新熒光標(biāo)記試劑的合成和表征，考察了熒光標(biāo)記試劑的光譜性質(zhì)，優(yōu)化了衍生反應(yīng)條件、色譜分離條件，并將建立的方法應(yīng)用于不同生物樣品的分析中。具體工作內(nèi)容如下： 第一章：介紹了熒光原理及熒光標(biāo)記法。簡述了高效液相色譜的發(fā)展及其基礎(chǔ)知識。綜述了熒光標(biāo)記試劑在羧酸類和氨基類化合物的高效液相色譜分析中的應(yīng)用。 第二章：五種熒光標(biāo)記試劑：吖啶酮-9-乙基對甲苯磺酸酯(AETS)、1-[2-(對甲苯磺酸酯)-乙基]-2

3、-苯基咪唑[4，5-f]9,10-菲(TSPP)、2-(9-吖啶酮)-乙酸(AAA)、2-(2-苯基-1-氫-菲[9，10-d]咪唑-乙酸(PPIA)、1.2-苯并-3.4-二氫咔唑-9-乙基氯甲酸酯(BCEOC)的設(shè)計合成、結(jié)構(gòu)表征、光譜性質(zhì)研究，以及TSPP晶體結(jié)構(gòu)解析。 第三章：兩種熒光標(biāo)記試劑AETS和TSPP分別用于脂肪酸的高效液相色譜-質(zhì)譜分析。通過對衍生化條件和色譜分離條件的優(yōu)化，建立了脂肪酸的柱前衍生化高效液相色

4、譜熒光檢測法，并將方法應(yīng)用于土壤、苔蘚、阿拉斯加深海魚油、川西獐牙菜、肋柱花、麻花艽、秦艽樣品的測定，實(shí)現(xiàn)了這些樣品中脂肪酸的高靈敏檢測?？疾炝巳芤褐械沫h(huán)境因素如溶劑極性、溫度、鹵素離子、重金屬離子對TSPP-C8衍生物熒光光譜的影響。 第四章：兩種熒光標(biāo)記試劑AAA和PPIA分別用于脂肪胺的高效液相色譜-質(zhì)譜分析。通過對衍生化條件和色譜分離條件的優(yōu)化，建立了脂肪胺的柱前衍生化高效液相色譜熒光檢測法，并將方法應(yīng)用于土壤、酸奶、大

5、鼠端腦、造紙廠廢水實(shí)際樣品的測定。結(jié)果表明，衍生反應(yīng)條件溫和，衍生產(chǎn)率高，該方法的線性范圍寬，重現(xiàn)性好，靈敏度高。 第五章：1，2-苯并-3,4-二氫咔唑-9-乙基氯甲酸酯(BCEOC)用于氨基酸和神經(jīng)遞質(zhì)的高效液相色譜-質(zhì)譜分析。建立了BCEOC用于五種神經(jīng)遞質(zhì)的熒光標(biāo)記液相色譜分析法，實(shí)現(xiàn)了氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)和含有一級胺與二級胺的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的同時標(biāo)記，對大鼠端腦中的神經(jīng)遞質(zhì)實(shí)現(xiàn)了準(zhǔn)確測定。采用二十種氨基酸的BCEOC柱前衍