2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、分類號:分類號:___________密級密級:__________UDC:___________脂肪脂肪酶Lip906Lip906的定向進化及固定化研究的定向進化及固定化研究TheMoleculardirectedevolutionimmobilizationfthelipaseLip906姓名:陳小利學號:2111440066院系:藥學院專業(yè):微生物與生化藥學研究方向:微生物與分子生物學導(dǎo)師姓名:李荷(教授)論文提交日期:2017年

2、4月論文答辯日期:2017年5月學位授予單位:廣東藥科大學二○一七年四月廣東藥科大學碩士研究生學位論文脂肪脂肪酶Lip906Lip906的定向進化及固定化研究的定向進化及固定化研究摘要摘要脂肪酶(lipase,EC3.1.1.3)是一類能夠特異性催化水解三酰甘油的酶,在微生物以及動植物中廣泛存在,但來源于微生物的脂肪酶由于其活性及穩(wěn)定性達不到工業(yè)生產(chǎn)的需求而限制其應(yīng)用,因此諸多蛋白改造技術(shù)應(yīng)運而生。實室前期通過構(gòu)建土壤宏基因組文庫篩選得

3、到的一個全長906bp的新型脂肪酶基因,將其命名為Lip906。由于其熱穩(wěn)定性達不到工業(yè)生產(chǎn)的需求,本研究通過易錯PCR技術(shù)對其分子結(jié)構(gòu)進行改造,通過酶的固定化提高其熱穩(wěn)定性。通過易錯PCR技術(shù)構(gòu)建突變文庫,最終篩選得到酶活提高的突變脂肪酶Lip5D,其發(fā)生了兩個堿基突變,一個為同義突變:G831A;一個為錯義突變:A155G,對應(yīng)的氨基酸改變?yōu)镼52R。突變酶Lip5D的酶活提高4倍,最適反應(yīng)溫度為60℃,最適反應(yīng)pH為7.5;突變酶

4、Lip5D在65C以下保溫2h仍能保持70%左右的相對酶活,在不同pH(3~10)保溫2h后仍能保持60%左右的相對酶活,其溫度穩(wěn)定性與pH穩(wěn)定性都有所提高,表明利用易錯PCR技術(shù)對酶的分子結(jié)構(gòu)進行改造是可行的。游離酶對外界環(huán)境敏感、反應(yīng)過程不好控制且游離酶不能循環(huán)回收利用,本文利用酶的固定化技術(shù)對突變酶Lip5D進行研究。結(jié)果顯示,殼聚糖對突變酶Lip5D游離酶的固定化效果最佳,酶活回收率能達到92%。其最適反應(yīng)溫度為63℃,最適反應(yīng)

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