2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、2-氯丙酸是一種重要的化工中間體,被廣泛應用于醫(yī)藥、染料、農藥等行業(yè)。使用2-氯丙酸脫鹵酶制備光學純2-氯丙酸的有重要的意義。
   本文首先通過易錯PCR手段將S-2-氯丙酸脫鹵酶定向進化,并篩選得到進化酶Deh(Ⅱ)-B2,該酶的最適pH為9.5,最適溫度為60℃,Vmax和Km的值分別為2.63×10-3 mM·min-1和0.75 mM。進化酶的比活比原始酶提高了3.9倍。通過分子模擬和分子對接發(fā)現(xiàn),Deh(Ⅱ)-B2的

2、活化能下降了1.4 kcal/mol,催化殘基Asp10與底物α碳原子的距離縮短了0.3216 nm。在兩者的綜合作用下使酶活力提高。
   其次,通過定點突變改造R-2-氯丙酸脫鹵酶的Asn203位點。發(fā)現(xiàn)當該位點突變?yōu)镾er203時,酶的選擇性由催化R-2-氯丙酸轉化為催化S-2-氯丙酸,比活降到0.101U/mg;當該位點突變?yōu)镚ln203時,酶的選擇性未變,但是比活降低了17%。突變?yōu)槠渌被峋Щ?。同源建模結果表明空

3、間位阻效應和氫鍵作用可以很好的解釋各種突變體的比活變化。
   最后,通過易錯PCR手段將R-2-氯丙酸脫鹵酶定向進化,并篩選得到有效突變子庫,突變子DehD(Ⅳ)-G2和DehD(Ⅳ)-E7的酶活力分別提高24.8%和39.6%。通過SYBYL對酶與底物進行分子對接顯示,DehD(Ⅳ)-G2的活化能下降0.23kcal/mol,DehD(Ⅳ)-E7的活化能下降0.61 kcal/mol。由于酶和底物R-2-氯丙酸的活化能下降,

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