細(xì)菌感染的檢查方法與法治原則

1、支 原 體、衣 原 體、立 克 次 體,主講老師：江振友,支原體屬和脲原體屬,支原體（Mycoplasma）,1.能在人工培養(yǎng)基中生長 2.能獨(dú)立生活 3.最小原核細(xì)胞型微生物 4.無細(xì)胞壁 5.二分裂繁殖 6.多形態(tài)性,“油煎蛋樣”菌落,分 類,柔膜體綱(Mollicutes) 支原體目(MycoPlasmatales) 下分3個科： ① 支原體科（MycoPlasm

2、ataceae）； 2個屬: 支原體（Mycoplasma） 脲原體（Ureaplasma） ② 無膽甾原體科（Acholeplasma-taceae）， 生長時不需要外源性膽固醇； ③ 螺原體科（Spiroplasmataceae）， 生長至一定階段呈螺形。,人體分離: 20種， 其中8種是致病或條件致病菌: 肺炎支原

3、體(M.pneumoniae,Mpn) 生殖支原體(M.geuitalium,Mg) 人型支原體(M.hominis,Mh) 發(fā)酵支原體(M.fermentants,Mf) 穿透支原體(M.penetrans,Mpe) 梨支原體(M.pirum,Mpi) 關(guān)節(jié)炎支原體(M.arthritidis,Mart) 解脲脲原體(U.ur

4、ealyticum,Uu),,支原體與細(xì)菌L型比較,肺炎支原體,形態(tài)與結(jié)構(gòu) 大 小:可通過濾器,光鏡下可觀察細(xì)胞壁:無形 態(tài):球形、球桿形、分枝絲狀或念珠狀等細(xì)胞膜: 三層:1.蛋白質(zhì) 2.脂質(zhì)(膽固醇較多) 3.蛋白質(zhì)染 色:姬姆薩染色法:淡紫色或藍(lán)色核 酸:二種(DNA和 RNA),生長繁殖,繁殖方式: 二分裂方式 球體延伸、分節(jié)斷裂、出芽、分枝繁殖周期:3小時營養(yǎng)要求

5、:較高,含動物血清、酵母浸液酸 堿 度:pH7.8～8．0氣體環(huán)境:5％CO2或5％CO2與95％N2溫度與時間:37℃,3d～10d菌落特征: “油煎蛋”狀菌落,表25—2支原體與脲原體的某些生物學(xué)特性,抗原構(gòu)造,主要抗原成分: 1.蛋白質(zhì) P1蛋白抗原:表面抗原 致病:粘附 2.脂質(zhì)中的糖脂 抗體:產(chǎn)生補(bǔ)體結(jié)合抗體 生長抑制抗體

6、 代謝抑制抗體,抵抗力,理化因素:比細(xì)菌敏感(因無細(xì)胞壁)熱:弱, 50℃經(jīng)30min死亡 －20℃可長期保存耐堿酸和有機(jī)溶劑:較敏感(消毒劑、清潔劑)四環(huán)素族、紅霉素、卡那霉素、氯霉素: 敏感 青霉素:不敏感,致病性,外源性感染上呼吸道感染:感冒、咽炎、氣管炎支原體性肺炎 （Mycoplasmal pneumonia）(原發(fā)性非典型肺炎)（primary atypical pneumon

7、ia） 臨床表現(xiàn)和胸部X線: 肺炎鏈球菌引起的典型肺炎不同 類似病毒性肺炎,世界各地,密集人群,兒童及青少年多見秋冬季發(fā)病率高,每隔3～5年出現(xiàn)一次流行飛沫傳播潛伏期2W～3W,感染起病緩慢臨床主要癥狀:發(fā)熱（約39℃）、頭痛、持續(xù)性頑固咳嗽、胸痛等。病人帶菌、排菌狀態(tài)可持續(xù)6W～8W肺外合并癥（神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)及心臟等）發(fā)病率高，嚴(yán)重者可致死致病性:粘附是先決條件 也和超敏反應(yīng)

8、有關(guān)(共同抗原),免疫性,抗體：多種(CF抗體、生長抑制抗體、 殺支原體抗體等) 呼吸道sIgA:有一定作用非特異冷凝集素: 1.和自身免疫有關(guān) 2.患者陽性率為50％， 常用于輔助診斷。,微生物學(xué)檢查法,病原分離特異核酸的檢測血清學(xué)診斷抗原檢測冷凝集試驗(yàn),病原分離,標(biāo) 本：咽拭子或痰液培養(yǎng)基：雙相培養(yǎng)基（含馬血清、酵母浸液） SP-4培養(yǎng)基（

9、提高分離率30％～40％）氣體環(huán)境：5％～10％CO2溫度與時間：37℃，l～2W可疑菌落： 1.糖發(fā)酵 2.溶血性 3.血細(xì)胞吸附 4.特異抗血清生長抑制試驗(yàn)等,特異核酸的檢測,（1）聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)： 優(yōu)點(diǎn)：特異性好 敏感性高 快速、簡便 靶基因：16S RNA基因 P1蛋白基因 方法：套式

10、PCR(nPCR) 復(fù)合PCR 限制性片段長度多態(tài)性分析(RFLP) 隨機(jī)引物PCR(RAPD) （2）基因探針 根據(jù)堿基嚴(yán)格互補(bǔ)配對的特性 特異性強(qiáng)，敏感性不如PCR技術(shù),血清學(xué)診斷,（1）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）： 雙份抗體效價升高4倍以上?診斷（2）間接血凝試驗(yàn)（IHA）： 測抗體, 2—3周高峰（3）酶聯(lián)免疫吸附試

11、驗(yàn)(ELISA)： 測IgM、IgG和IgA 敏感性高（4）間接免疫熒光試驗(yàn)： 檢測IgM、IgG 特異性較強(qiáng),抗原檢測,方法1:間接法或直接法 抗體:熒光標(biāo)記多克隆抗體或單克隆抗體 檢測標(biāo)本:呼吸道分泌物中抗原 86%可陽性 方法2:雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 檢測標(biāo)本:呼吸道分泌物中抗原

12、 可檢出105 CFU /ml 方法3:酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)捕獲法 抗體:抗P1單克隆抗體 檢測標(biāo)本:P1蛋白 可檢出104CFU/ml 特異性強(qiáng),3小時即可,冷凝集試驗(yàn),輔助診斷非典型肺炎針對紅細(xì)胞膜Ⅰ抗原冷凝集素屬IgM 5d～10d出現(xiàn)，2W～3W高峰輔助診斷效價: 64～128倍以上 雙份效價升高4倍以上

13、特異性和敏感性較低,防 冶,藥物:四環(huán)素類(近年來耐藥性增加) 大環(huán)內(nèi)酯類:首選 (紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素) 喹諾酮類疫苗:減毒活疫苗 基因工程疫苗,其它支原體,寄生部位:鼻咽腔及泌尿生殖道粘膜屬于正常菌群,引起條件性感染口腔支原體:慢性呼吸道感染唾液支原體:齒槽溢膿生殖支原體:生殖道、呼吸道和關(guān)節(jié)腔的炎癥, 流產(chǎn)、早產(chǎn)和新生兒肺炎發(fā)酵支原體

14、:類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 AIDS相關(guān)(分離率明顯升高)人型支原體:滲出性咽炎、非淋菌性尿道炎 (nongonococcal urithritis,NGU), 卵巢膿腫、 產(chǎn)褥敗血癥,脲原體屬 (Ureaplasma),從支原體分出的獨(dú)立的新屬 正常菌群:絕大多數(shù) 有致病性:解脲脲原體 （U.urealyticum,Uu) 1954年從NGU患者的病灶處分離

15、 類似肺炎支原體 能水解尿素,生物學(xué)性狀,形態(tài):圓形或球桿狀染色:革蘭染色陰性溫度和酸堿度: 37℃, pH 6.0菌落:很小(15μm～60μm,放大200倍), 稱T株（Tiny colony strain）敏感性: 敏感: 四環(huán)素、氯霉素、慶大霉素、 卡那霉素、0.05% 醋酸鉈、 125μg/ml 5-碘-2’脫氧尿苷

16、不敏感:青霉素生化特性:水解尿素產(chǎn)氨,致病性,存 在: 人和動物的口腔、呼吸道、 泌尿生殖道血清型: 解脲脲原體(Uu)有14個血清型傳播途徑: 性接觸傳播、母嬰傳播所致疾病 (STD) 泌尿生殖道感染: NGU 、盆腔感染、宮頸 炎、陰道炎、輸卵管炎、慢性前列腺 炎、附睪炎、男女不孕癥、反復(fù)流產(chǎn)、 早產(chǎn)、死胎 新生兒疾病:呼吸道病變、肺炎、腦膜炎,引起男性不

17、孕的原因： ① Uu吸附于精子表面， 使其運(yùn)動受阻， 并蔽蓋了精子識別卵細(xì)胞的部位 ② Uu產(chǎn)生神經(jīng)氨酸樣物質(zhì)， 干擾精子與卵細(xì)胞結(jié)合。 ③ Uu與精子膜有共同抗原， 從而產(chǎn)生抗精子抗體,立克次體屬和巴爾通體屬,立克次體屬,立克次體特征： ① 比細(xì)菌小,能通過濾器,光鏡可見 ② 以節(jié)肢動物為傳播媒介,有儲存宿主 ③ 專性細(xì)胞內(nèi)寄生(胞漿內(nèi)),原核細(xì)胞微生物 ④ 二分裂繁

18、殖 ⑤ 有兩種核酸(DNA和RNA)，酶系統(tǒng)不完整 ⑥ 多數(shù)人畜共患 ⑦ 對抗生素敏感所致疾病:發(fā)熱出疹性疾病對人致病的:立克次體屬 東方次體屬 埃立克體屬 柯克斯體屬,立克次體分類及其致病情況見表26-1,生物學(xué)性狀,大小: (0.3μm-0.6μm)×(0.8μm -2.0μm)形態(tài): 類似球桿菌,多形性 (球形、啞鈴形、長桿狀

19、或絲狀等)染色: Giemsa染色法: 紫色或藍(lán)色 馬氏染色法(Macchiavello stain): 紅色排列: 散在于細(xì)胞漿中、核旁成堆 (斑點(diǎn)熱立克次體在胞漿或核內(nèi)) 培養(yǎng): 專性細(xì)胞內(nèi)(活細(xì)胞內(nèi))寄生培養(yǎng)方法: 雞胚卵黃囊內(nèi)接種 組織細(xì)胞培養(yǎng) 動物接種,抵抗力: 熱、消毒劑: 較弱(56℃,數(shù)分鐘,0.5%石碳酸、 0.5

20、%來蘇,75%酒精中數(shù)分鐘) 抗生素: 敏 感:氯霉素和四環(huán)素 不敏感:磺胺類 低溫、干燥: 較強(qiáng)(-20℃或冷凍干燥半年以上)抗原構(gòu)造： 群特異性抗原,種特異性外膜抗原外斐反應(yīng)(Weil-Felix reaction):斑疹傷寒等立克次體與變形桿菌某些X菌株有共同的耐熱多糖類抗原。利用這些變形桿菌菌株代替立克次體抗原，進(jìn)行定量非特異凝集反應(yīng)（交叉凝集反應(yīng)），以檢測人或動物血清中的相應(yīng)抗體。協(xié)助診斷

21、斑疹傷寒,恙蟲病,滴度超過1:160有意義.,致病性,傳播方式： 普氏立克次體： 頭虱和體虱（腸上皮細(xì)胞） 人是唯一宿主 斑點(diǎn)熱立克次體： 第一宿主是蜱（唾液腺） 第二宿主是嚙齒類動物,致病機(jī)理 過程:侵入->小血管內(nèi)皮細(xì)胞中繁殖-> 破壞細(xì)胞->細(xì)胞腫脹、浸潤、 堵塞血管腔形成血栓 ->皮膚:斑疹 ->實(shí)

22、質(zhì)器官:相應(yīng)臨床表現(xiàn) 毒性物質(zhì):內(nèi)毒素 磷脂酶A,所致疾病1.流行性斑疹傷寒(epidimic typhus) 不屬于人畜共患病 病原體:普氏立克次體(R.prowazekii) 媒介:人虱 宿主:人 季節(jié):冬春季 癥狀:5～21d潛伏期->高熱、頭痛、 肌肉痛等->4～5d:皮疹-> 神經(jīng)、心血管和其

23、他器官 病后免疫:持久,與地方性斑疹傷寒有 交叉免疫,2.地方性斑疹傷寒(endemic typhus) (鼠型斑疹傷寒),屬于人畜共患病病原體:斑疹傷寒立克次體(R.typhus)宿主:鼠為天然貯存宿主傳播方式:鼠蚤或虱->鼠間 ->人->人虱->人疾病:較輕，緩慢，持續(xù)時間短，很少 侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng)病后免疫:持久，并與流行

24、性斑疹傷寒 有交叉免疫,3.恙蟲病(scrub typhus),病原體:恙蟲病東方次體 (O.tsutsuganushi)傳播:寄生于恙螨體內(nèi)，可經(jīng)卵傳代。人若進(jìn)入恙螨的孳生地，可能受感染(亦稱“叢林熱”)癥狀:10～14d潛伏期->突然高熱，被叮咬處:發(fā)紅,丘疹,水皰,潰瘍，周圍紅暈，上有黑色痂皮，稱為焦痂(特征)。附近的淋巴結(jié)腫大，皮疹。治療拖延肺炎、腦炎、DIC。,微生物學(xué)檢查法,(一)血清學(xué)診斷

25、 1.外斐反應(yīng) (非特異性) 診斷:立克次體和東方次體 效價在1：160以上，或病程中效價增長 2.補(bǔ)體結(jié)合(CF)反應(yīng) (特異性) 所用抗原:可溶性抗原(群特異抗原) 洗滌過的顆?？乖?種特異抗原) 診斷:斑疹傷寒群、斑點(diǎn)熱群、恙蟲病、 Q熱(二)立克次體分離鑒定 動物: 小鼠(恙蟲病) 雄性豚鼠(斑疹傷寒)

26、,防治原則,1. 滅虱、滅蚤、滅鼠2. 改進(jìn)環(huán)境、個人衛(wèi)生3. 死疫苗4. 廣譜抗生素有效,巴爾通體屬(Bartonella),特點(diǎn): 1.形態(tài)結(jié)構(gòu)與立克次體相似 2.可以人工培養(yǎng)而非嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生模式種:桿狀巴爾通體(B.bacilliformis),生物學(xué)性狀,形狀:1.血涂片:球形、橢圓形或弓形桿狀；單個或成群,偶見鏈狀2.組織中:內(nèi)皮細(xì)胞原漿中, 單體或圓形團(tuán)塊，G-，常用Giemsa或鍍銀染色法。3.培養(yǎng)中

27、:單鞭毛培養(yǎng)條件:1.需氧2.常用10%兔血清和0.5%血紅蛋白的半固體培養(yǎng)基3.可在無細(xì)胞培養(yǎng)基中生長4.28℃-37℃,10d以上,致病性,自然宿主:人媒 介:節(jié)肢動物（疣腫白蛉）所致疾病: 1.奧羅亞熱-秘魯疣 (Oroya fever-verruca peruviana) 病原體:桿狀巴爾通體 階段:第1階段:發(fā)熱，貧血(奧羅亞熱) 第2階段:以血管損

28、害為基礎(chǔ)的 肉芽腫(秘魯疣) 診斷方法: 1.血涂片 2.用半固體培養(yǎng)基分離培養(yǎng),2.細(xì)菌性血管瘤(bacillary angiomatosis) 病原體: 亨氏巴爾通體(B.henselae) 羅卡利馬巴爾通體(B.rochalimaea) 易感人群: 免疫力低下（尤其AIDS） 病變組織學(xué)特征: 毛細(xì)血管增生等(血管瘤

29、) 培養(yǎng)基: 巧克力色瓊脂 含5%兔血的心腦浸汁瓊脂3.貓抓病(cat-scratch disease) (貓抓熱) 病原體: 亨氏巴爾通體 癥狀: 貓抓傷后2w,發(fā)熱,淋巴結(jié)腫大，破 潰排膿，亦可頭痛、咽痛或出現(xiàn)結(jié)膜炎 特點(diǎn): 自限性疾病 檢查法: 病變組織切片鍍銀染色 免疫熒光染色,衣 原 體 屬,衣原體（Chamydia）,特點(diǎn):1.能通過細(xì)菌濾器,光

30、鏡下可觀察 2.有獨(dú)特發(fā)育周期 3.不能人工培養(yǎng),不能獨(dú)立生活, 為專性細(xì)胞內(nèi)寄生 4.原核細(xì)胞型和病毒的區(qū)別: ⑴ 有細(xì)胞結(jié)構(gòu) ⑵ 細(xì)胞壁類似G- ⑶ 兩種類型的核酸(DNA和RNA) ⑷ 有核糖體 ⑸ 以二分裂方式繁殖,有獨(dú)特的發(fā)育周期 ⑹ 對多種抗生素敏感(四環(huán)素和紅霉素),分 類,存在:人類、哺乳動物及禽類體內(nèi)分類依據(jù):1.抗原構(gòu)

31、造 2.包涵體糖原的有無 3.對磺胺類藥物的敏感性分類(4個種): 1.沙眼衣原體（C. trachomatis）（人） 亞種（1）沙眼生物變種（Biovar trachoma） 14個血清型 （2）性病淋巴肉芽腫變種(Biovar lymphogranunloma venereum,LGV)

32、 4個血清型 （3）鼠生物變種（Biovar mouse） 2.鸚鵡熱衣原體（C. psittaci） （人） 3.肺炎衣原體（C. pneumonia） （人） 4.家畜衣原體(C.pecorum),表27-1 3種致病性衣原體的比較,生物學(xué)性狀,生活周期包括原體和始體兩階段光鏡下：兩種形態(tài)： 原體（elementary body） 始體（initial body

33、） 原體（elementary body） 1.形狀：球形，0.2～0.4μm 電鏡下：核質(zhì)致密和少量核糖體 細(xì)胞壁堅韌 存在于細(xì)胞外 2.功能:（1）有很強(qiáng)的感染性（吸附） （2）發(fā)育成始體：吸附->被吞噬-> 胞膜在原體周圍形成空泡-> 原體在空泡中增大->

34、;始體,始體（initial body） 1.形狀：球形，較原體大(0.8～1.5μm)， 無致密核質(zhì)，有纖細(xì)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)--- 也稱為網(wǎng)狀體（reticulate body） 2.發(fā)育周期:原體->->始體->空泡內(nèi)-> 二分裂->子代原體->包涵體（inclusion body）->原體成熟->釋放->再感

35、染 (24～48h) (無細(xì)胞外周期) 3.是繁殖型，無感染性染色： 1.Macchiavello染色法或Giemsa染色法 原體：紅色或紫色 始體：深藍(lán)色 2.碘染色法：沙眼衣原體原體：褐色 （因包涵體含糖原）,培 養(yǎng),方法：1.雞胚卵黃囊 2.各種傳代細(xì)胞 (Hela細(xì)胞,McCog細(xì)胞) 3.

36、動物實(shí)驗(yàn)：某些可感染小鼠 培養(yǎng)時間：48～72h后觀察：包涵體 原體顆粒 始體顆粒,抗原構(gòu)造,1．屬特異性抗原 成分：脂多糖 方法：CF試驗(yàn)和IF法2．種特異性抗原 成分：外膜蛋白（MOMP） 方法：IF法和中和試驗(yàn)(NT)3．血清型特異性抗原 成分：MOMP 方法：單克隆抗體微量免疫試驗(yàn) 血清型:(1)沙眼生物變種:14個

37、 （A-K、Ba、Da,Ia） (2)LGV: 4個(L1、L2、L2a和L3 ),抵抗力,熱:敏感，60℃10min或37℃48h寒冷：-50℃數(shù)年化學(xué)消毒劑：0.5%石炭酸，24h 75%乙醇，半分鐘抗生素：利福平、四環(huán)素、紅霉素、 磺胺敏感 青霉素:不敏感,致病機(jī)理,致病物質(zhì)：內(nèi)毒素相似的物質(zhì)致病機(jī)理：1.抑制細(xì)胞代謝，使細(xì)胞溶解

38、 2.引起超敏反應(yīng) 3.形成肉芽腫傳播途徑：眼－眼 眼－手－眼 性接觸傳播 產(chǎn)道感染 呼吸道感染 (不通過節(jié)肢動物傳播),所致疾病,1.沙眼（trachoma） （慢性傳染性角結(jié)膜炎） 病原體：沙眼生物變種的A、B、Ba、C血清型 傳播途徑：眼—眼，眼—手—眼 慢性炎癥,可致盲 湯飛凡

39、等（1956年，雞胚接種法）2.包涵體結(jié)膜炎(inclusion conjunctivitis) 病原體：沙眼生物變種中除A和C以外 好發(fā)人群：新生兒（產(chǎn)道感染）(母嬰間） 成人（接觸）,3.泌尿生殖道感染 病原體：沙眼衣原體D-K血清型 是性傳播疾?。╯exually transmited disease,STD） 疾?。耗行裕悍橇芫阅虻姥祝∟GU） 女性：N

40、GU、宮頸炎、盆腔炎 嬰兒：肺炎（產(chǎn)道） 4.性病淋巴肉芽腫 （lymphogranuloma venereum, LGV） 是STD 病原體：沙眼衣原體LGV生物變種 5.上呼吸道感染及衣原體肺炎 （chlamydia pneumonia） 病原體：鸚鵡熱衣原體和肺炎衣原體 (除外沙眼衣原體) 自然宿主：鸚鵡，鳥類 疾?。蝴W鵡熱（呼吸道感染）

41、 肺炎衣原體引起的肺炎只限于人群間,免疫性,細(xì)胞免疫，體液免疫保護(hù)性不強(qiáng)持續(xù)、隱性和反復(fù)感染,微生物學(xué)檢查法,（一）直接涂片鏡檢 Giemsa染色，沙眼還 要做碘液染色，查包涵體（二）酶抗體法檢查抗原 用抗衣原體抗體、 酶標(biāo)抗體IgG（三）分離衣原體 小鼠腹腔、雞胚卵黃囊或 培養(yǎng)細(xì)胞 （四）血清學(xué)診斷 鸚鵡熱和LGV的診斷。 常用CF試驗(yàn)?？贵w效價增高4倍