家蠶整合蛋白β基因的克隆及其表達(dá)分析.pdf

1、整合蛋白（integrin）是一種細(xì)胞表面的跨膜異二聚體蛋白，由α和β亞基組成，在哺乳動物體內(nèi)可以調(diào)節(jié)細(xì)胞粘著、增殖、存活和凋亡、變形、細(xì)胞間接觸、基因表達(dá)、細(xì)胞分化等。昆蟲體內(nèi)的整合蛋白在昆蟲血細(xì)胞對外物的包囊過程中起著重要的作用。 在哺乳動物中整合蛋白是一個較大的基因家族，如人體內(nèi)目前共發(fā)現(xiàn)了18個α亞基和8個β亞基。而在昆蟲中鑒定到的整合蛋白要少一些，特別是β亞基，目前一種昆蟲最多的也只鑒定了兩個（果蠅、岡比亞按蚊）。本項

2、研究選擇鱗翅目模式昆蟲-家蠶（Bombyx mori）為研究對象，從其基因組中鑒定整合蛋白β亞基，并對這些基因的功能進(jìn)行了初步研究。結(jié)果如下： 1.家蠶整合蛋白β亞基的鑒定：利用生物信息學(xué)的方法，從家蠶基因組中鑒定了兩個整合蛋白β亞基，并用RT-PCR法克隆了這兩個β亞基cDNA的全長序列。β1亞基總長度為2670bp，編碼一個由833個氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)。β2亞基總長度為2314bp，編碼一個由747個氨基酸殘基組成的蛋白

3、質(zhì)。家蠶整合蛋白β1和β2亞基基因與其他昆蟲整合蛋白β亞基相似，有I-like結(jié)構(gòu)域和NPxY模體以及四個半胱氨酸重復(fù)序列。 2.構(gòu)建了整合蛋白β亞基的進(jìn)化樹。結(jié)果表明，昆蟲整合蛋白β亞基共分為兩大簇。與果蠅和岡比亞按蚊一樣，家蠶的兩個β亞基也各歸入這兩簇內(nèi)。此外，鑒于果蠅、岡比亞按蚊和家蠶這三種昆蟲中均只發(fā)現(xiàn)了兩個β亞基，我們推測昆蟲體內(nèi)整合蛋白β亞基的數(shù)量較少。 3.家蠶整合蛋白β亞基組織特異性表達(dá)分析：通過半定量R

4、T-PCR檢測家蠶整合蛋白β1和β2亞基在其5齡幼蟲表皮、脂肪體、頭、絲腺、中腸、馬氏管、血淋巴中的表達(dá)情況。結(jié)果表明，β1亞基除不在絲腺和中腸表達(dá)外，在表皮、脂肪體、頭、馬氏管、血淋巴中均有表達(dá)，且表皮表達(dá)量最少，頭部表達(dá)量最多，而在其他組織中表達(dá)量基本相同。β2亞基在表皮、頭、血淋巴中都有表達(dá)，在頭部表達(dá)量相對較少。 4.注射凝膠珠對家蠶整合蛋白β1和β2亞基表達(dá)量的影響：利用熒光定量PCR法檢測了注射凝膠珠后家蠶整合蛋白β