家蠶Elav基因的克隆分析和時空表達研究.pdf

1、胚胎致死異常視覺Elav基因，是果蠅神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和功能異常的致死基因。根據(jù)果蠅ELAV蛋白質(zhì)的氨基酸序列，利用家蠶EST數(shù)據(jù)庫，電子克隆出一條Elav基因的同源基因Bm-Elav。進一步以家蠶大造品種L5-3d的絲腺RNA為模板，RT-PCR方法得到Bm-Elav基因的cDNA序列，其ORF框為807 bp，堿基序列與預測序列一致。通過比較分析NCBI數(shù)據(jù)庫中家蠶的全基因組數(shù)據(jù)，獲得了家蠶Bm-Elav的基因組DNA序列，該序列僅包括一

2、個外顯子而沒有內(nèi)含子。推測的Bm-Elav基因翻譯蛋白質(zhì)有268個氨基酸，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中有3個RRM基序，屬于RRM RNA結(jié)合蛋白家族。 將Bm-Elav基因片段克隆到表達載體pET-28a(+)，構(gòu)建大腸桿菌融合表達質(zhì)粒pET-28a(+)．Bm-Elav；將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL<,21>，IPTG誘導，成功表達了家蠶Bm-Elav基因的融合蛋白，為研究Bm-Elav功能奠定了基礎(chǔ)。 為了探討B(tài)m-Elav基因的功

3、能，調(diào)查了Bm-Elav基因的時空表達。以A3基因為內(nèi)標，根據(jù)構(gòu)建的Bm-Elav基因優(yōu)化半定量RT-PCR方法，調(diào)查了家蠶產(chǎn)下后0.5 h、30 h及活化時期的卵；5齡3 d和6 d、吐絲1 d、蛹期3 d和6 d時期的卵巢和脂肪體；5齡3 d和6 d、吐絲1 d時期的中腸、絲腺和造血器官組織Bm-Elav基因的差異性表達。結(jié)果顯示，家蠶Bm-Elav基因在幼蟲、蛹期的表達沒有時期、組織顯著差異性，而在活化卵中沒有表達。推測家蠶Bm-