K88菌毛蛋白FaeG基因的克隆、表達(dá)及單克隆抗體的制備.pdf_第1頁(yè)
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1、由產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)引起的仔豬、犢牛和羔羊腹瀉是幼畜的一種最常見(jiàn)病,在世界范圍造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失.ETEC菌株的致病前提是通過(guò)細(xì)菌表面的黏附素與宿主黏膜上皮細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合,從而在該局部組織定居、繁殖、產(chǎn)生毒素或侵入深部損傷或破壞組織,引起疾病或造成隱性感染.該研究根據(jù)已發(fā)表的F4菌株faeG基因序列設(shè)計(jì)引物,用PCR擴(kuò)增法從六株標(biāo)準(zhǔn)F4菌株中擴(kuò)增出0.8

2、kb的faeG基因序列,通過(guò)測(cè)序和序列分析比較,所獲核苷酸序列與已發(fā)表的標(biāo)準(zhǔn)F4菌株序列同源性大于95％,個(gè)別核苷酸差異可能由于菌株不同所致.將不含信號(hào)肽的faeG片段按正確的閱讀框架克隆入pGEX-6p-1載體中的谷胱苷肽-G-轉(zhuǎn)移酶(GST)基因下游,用IPTG誘導(dǎo)實(shí)現(xiàn)其在大腸桿菌中的表達(dá).SDS-PAGE電泳和Western-blotting結(jié)果顯示,表達(dá)的融合蛋白約為53kDa.將原核表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)復(fù)性和谷胱苷肽活化的Sepharo

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