香蕉枯萎病菌生理小種檢測技術研究.pdf

1、香蕉枯萎病(Banana vasicular wilt)又稱香蕉巴拿馬病是香蕉的毀滅性病害，其病原菌為古巴尖鐮孢菌4號小種(Fuaarium oxysporum f.sp. cubense Race4)已列為我國的檢疫對象。研制香蕉枯萎病菌生理小種的快速準確檢測技術對預防病害擴散蔓延，保障我國香蕉產(chǎn)業(yè)的安全具有積極意義。 經(jīng)過2006年至2008年的研究，取得以下主要結果： 對香蕉根系及蕉園土壤的真菌區(qū)系分析結果表明：尖

2、孢鐮孢(F. oxysporum)、茄病鐮孢(F. solani)、尖孢鐮孢芬芳變(F.oxysporum var. redolens)、半裸鐮孢(F.semitectum)、串珠鐮孢(F.moniliforme)和木賊鐮孢(F.equiseti)為常見鐮刀菌。ITS區(qū)序列分析表明：可通過測定鐮刀菌rDNA-ITS序列進行鐮刀菌種水平上快速鑒定。蕉苗植株和土壤所攜帶其他真菌有小克銀漢霉(Cunninghamella)，曲霉屬(Asper

3、gillus)，擬青霉屬(Paecilomyces)，木霉(Trichoderma)等。 建立了以KM鑒別培養(yǎng)基為基礎的雙重選擇檢測香蕉枯萎病菌4號生理小種的技術。該方法對香蕉枯萎病菌4號小種選擇性強、鑒別特征明顯，成本低廉，便于操作，適合基層生產(chǎn)單位應用。以香蕉枯萎病菌1號生理小種菌株FOCABB361及香蕉枯萎病菌4號生理小種菌株FOCAAA315為標準檢測菌株，構建香蕉枯萎病菌生理小種VCG檢測的技術體系。為香蕉枯萎病菌生

4、理小種檢測和鑒定提供了便捷的方法。 通過香蕉枯萎病菌基因組DNA提取方法比較，確定了以分生孢子為材料提取香蕉枯萎病菌基因組DNA的方法，該方法提取的基因組DNA純度高，且重復性極佳，適合香蕉枯萎病菌分子生物學研究。 對香蕉枯萎病菌1號和4號生理小種的ITS區(qū)序列進行比對。結果表明，香蕉枯萎病菌1號生理小種和香蕉枯萎病菌4號生理小種的ITS1序列同源性為100％，ITS2存在3個堿基的差異。雖然香蕉枯萎病菌生理小種間存在致

5、病力差異，但是由于香蕉枯萎病菌生理小種間ITS區(qū)的序列同源性高，利用ITS序列難以鑒別香蕉枯萎病菌生理小種。 對香蕉枯萎病菌RAPD條件進行優(yōu)化，獲得最適反應體系及RAPD-PCR反應條件。并對香蕉枯萎病菌遺傳多樣性進行分析，結果表明：來自同一地區(qū)的香蕉枯萎病菌菌株在親緣關系上相距較近；香蕉枯萎病菌1號生理小種與4號生理小種間的在分子水平上具有一定的差異性，4號生理小種間的遺傳分化較為豐富。 構建了香蕉枯萎病菌生理小種I

6、TS-SCAR雙重PCR檢測體系，該方法可以同時檢測香蕉枯萎病菌1號和4號生理小種。ITS-SCAR雙重PCR檢測檢測結果經(jīng)形態(tài)學與生物學、鑒別寄主、rDNA-ITS區(qū)序列分析，證實ITS-SCAR雙重PCR檢測技術可應用于未顯癥的染病蕉苗及田間植株的檢測。應用ITS-SCAR雙重PCR檢測技術，在1次PCR擴增中能同時檢測出香蕉枯萎病菌1號和4號生理小種，又能對1號生理小種和4號生理小種進行鑒定?？朔藛我灰镞M行PCR檢測時產(chǎn)生的條