玉米萎蔫和枯萎病菌膠體金免疫層析技術(shù)研究.pdf

1、玉米內(nèi)州萎蔫病菌和玉米細(xì)菌性枯萎病菌是兩種造成嚴(yán)重農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)損失的植物病原菌。目前，檢測這兩種病原菌的方法主要有分離培養(yǎng)檢測、酶聯(lián)免疫法、PCR，但由于耗時冗長或需要特殊的儀器設(shè)備及技術(shù)人員，難以滿足現(xiàn)場快速篩查的要求。膠體金免疫層析技術(shù)具有操作簡單、快捷、判斷直觀等優(yōu)點(diǎn)已逐漸應(yīng)用于致病菌的快速檢測，但檢測靈敏度相對不高。
　　本研究針對玉米內(nèi)州萎蔫病菌和玉米細(xì)菌性枯萎病菌膠體金免疫層析檢測方法存在的問題，運(yùn)用納米顆粒膠體金增敏的方

2、法，建立了兩種植物致病菌的快速、靈敏的檢測技術(shù)，取得了如下成果。
　　1.采用改良的檸檬酸三鈉還原法，成功確立了40nm膠體金的制備條件;并利用制備好的膠體金，對抗玉米內(nèi)州萎蔫病菌單克隆抗體(4G12)、抗玉米細(xì)菌性枯萎病菌單克隆抗體(2F5)進(jìn)行了膠體金標(biāo)記條件的摸索，確立了單克隆抗體的膠體金標(biāo)記條件:最適pH值為8.0～8.5，最適標(biāo)記量分別為30μg/mL膠體金、15μg/mL膠體金，并制備了相應(yīng)的金標(biāo)抗體。
　　2.

3、以膠體金標(biāo)記抗玉米內(nèi)州萎蔫病菌單克隆抗體4G12作為示蹤物，用固定在檢測線上的抗玉米內(nèi)州萎蔫病菌單克隆抗體4H4作為捕獲抗體，采用雙抗體夾心法，成功制備了玉米內(nèi)州萎蔫病菌膠體金免疫層析快速檢測試紙條。用制備好的試紙條檢測玉米內(nèi)州萎蔫病菌標(biāo)準(zhǔn)菌株時，檢測線出現(xiàn)明顯的紅色條帶，而空白對照呈陰性反應(yīng)，靈敏度增敏前為106cfu/mL、增敏后為105cfu/mL，比雙抗體夾心ELISA法靈敏度高一個數(shù)量級。與其它9株不同屬不同種、同屬不同種的植

4、物病菌交叉性反應(yīng)得出該試紙條特異性良好，重復(fù)性、穩(wěn)定性也良好。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，本方法特異性強(qiáng)，靈敏度高，且操作簡便、結(jié)果判定直觀，可以用于玉米內(nèi)州萎蔫病菌的快速檢測及鑒別診斷。
　　3.以膠體金標(biāo)記抗玉米細(xì)菌性枯萎病菌單克隆抗體2F5作為示蹤物，用固定在檢測線上的抗玉米細(xì)菌性枯萎病菌多克隆抗體作為捕獲抗體，采用雙抗體夾心法，制備了玉米細(xì)菌性枯萎病菌膠體金免疫層析快速檢測試紙條。條件優(yōu)化后的試紙條用于玉米細(xì)菌性枯萎病菌的檢測，靈敏度增