香蕉與枯萎病病程相關基因的鑒定.pdf

1、香蕉枯萎病又稱香蕉鐮刀菌枯萎病、香蕉巴拿馬病,俗稱香蕉黃葉病。香蕉枯萎病是一種土傳性的維管束病害,可以通過病苗、病土、帶菌耕作工具、灌溉水等途徑傳播。自1874年在澳大利亞被發(fā)現(xiàn)以來,已經(jīng)在中、南美洲、亞洲等世界各國發(fā)生,并對香蕉產業(yè)造成巨大損失。本研究通過研究香蕉枯萎病菌侵染過程以及篩選與病程相關的基因為進一步研究侵染機制提供一定理論依據(jù),對今后利用香蕉枯萎病抗病基因工程手段培育抗病品種具有重要意義。
　　 為研究香蕉枯萎病菌

2、侵染香蕉根系過程,本實驗利用轉化GFP基因的尖孢鐮刀菌4號生理小種侵染巴西蕉(Musa acuminate L.AAA group cv.Brazilian)苗根系,通過熒光顯微鏡進行鏡檢觀察,直觀的觀察到分生孢子在根系表面的附著、繁殖及侵入過程。根據(jù)觀察結果將枯萎病菌侵染根系的過程分為三個時期:侵染前期,分生孢子吸附于根系表面,在適宜條件下萌發(fā)形成菌絲體,菌絲優(yōu)先沿細胞間隙伸長生長,沒有菌絲侵染至根系內部;侵染中期,菌絲體在細胞間隙大

3、量繁殖,并在根系外圍形成網(wǎng)絡結構,菌絲開始侵入表皮細胞,一些分生孢子在細胞內部大量繁殖,并填滿整個細胞,少量菌絲開始侵入根系皮層;侵染后期,菌絲沿根系表皮細胞生長擴大到更大范圍,形成的網(wǎng)絡結構已經(jīng)將根系完全包裹住,并深入根系內部,大部分菌絲由外向內侵入根系,直至維管束部分,有極少量的菌絲會沿著根系導管生長,菌的侵染可由下至上轉移至假莖中。所以,香蕉枯萎病菌的侵染是菌絲由根系逐漸向內向上傳播的過程,而非之前推測的是由于導管的運輸將菌的孢子

4、運送至香蕉假莖中再進行增殖的過程。
　　 在此基礎上,選取發(fā)病不同時期的對照和侵染香蕉苗根系,提取總RNA,反轉錄為cDNA第一鏈,并以此為模板,采用半定量RT-PCR的方法對本實驗室已經(jīng)構建的香蕉cDNA文庫中的30個基因進行差異表達分析,初步篩選與枯萎病病菌侵染病程相關的基因。結果分析表明,相對于未經(jīng)侵染的對照植株有21個基因有下調表達的趨勢,4個基因有上調表達的趨勢,3個基因無明顯的變化規(guī)律,2個基因的表達沒有明顯變化。<