豬a-干擾素單克隆抗體的制備及其特性鑒定.pdf

1、IFN-α（interferon alpha，IFN-α）是在特定誘生劑的作用下由細(xì)胞產(chǎn)生的一種具有生物活性的糖蛋白，可誘導(dǎo)同種動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)生廣譜的抗病毒活性。目前已發(fā)現(xiàn)近百種疫病能通過動(dòng)物傳染給人，其中很多為病毒性傳染病，有些目前尚未發(fā)現(xiàn)合適的疫苗和藥物來預(yù)防和治療，有些對(duì)病毒的生物學(xué)特性仍未研究清楚。IFN-α是抗病毒能力最強(qiáng)的干擾素，但無論是醫(yī)學(xué)還是獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)FN-α臨床應(yīng)用仍然極為有限，因此開展IFN-α單克隆抗體的研制，為評(píng)

2、價(jià)機(jī)體抗病毒水平以及IFN-α作用機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)，對(duì)推動(dòng)IFN-α在臨床上廣泛應(yīng)用具有重要作用。 本研究運(yùn)用雜交瘤細(xì)胞技術(shù)，以重組豬IFN-α蛋白免疫BALB/c小鼠，無菌條件下制備小鼠免疫脾細(xì)胞，與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0細(xì)胞融合，通過通過GST和GST-pIFN-a雙重篩選和多次克隆化培養(yǎng)，成功獲得了3株能分泌抗IFN-α的單克隆雜交瘤穩(wěn)定細(xì)胞株。用單克隆抗體亞型鑒定試劑盒鑒定其亞型，確定1株單克隆抗體為IgG2a，2株單克隆

3、抗體為IgG2b。將分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株的染色體計(jì)數(shù)，發(fā)現(xiàn)雜交瘤細(xì)胞株染色體平均數(shù)為92條，而骨髓瘤細(xì)胞株染色體平均數(shù)僅為66條，從遺傳角度證明確實(shí)獲得了雜交瘤細(xì)胞株；雜交瘤細(xì)胞腹水和細(xì)胞上清經(jīng)ELISA檢測(cè)，腹水中3株雜交瘤分泌單抗的效價(jià)均可達(dá)1：105，而細(xì)胞上清的效價(jià)可達(dá)到1：104；單抗的抗原結(jié)合位點(diǎn)分析表明，3株單抗的抗原結(jié)合位點(diǎn)基本一致；SDS-PAGE結(jié)果顯示，3株單抗的重鏈分子量均在60ku以上，輕鏈分子量在30