囊素三肽單克隆抗體的制備和初步鑒定.pdf

1、囊素三肽(Bursin，BS)是從法氏囊中提取的一種生物活性物質(zhì)，其分子量大小約為0.354kD。囊素三肽除具有誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞分化的功能外，還可促進(jìn)抗體產(chǎn)生、增強(qiáng)疫苗免疫效果、維持和促使法氏囊的正常發(fā)育、預(yù)防某些病毒感染及抵抗免疫抑制因子等免疫學(xué)功能。本研究利用Sulfo-SMCC法制備出囊素三肽完全抗原，用雜交瘤技術(shù)制備出抗BS單克隆抗體，建立了BS單抗的競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法。 利用Sulfo-SMCC的方法將牛血清白蛋白(

2、BSA)和囊素三肽進(jìn)行偶聯(lián)，成功制備免疫抗原，免疫8周齡雌性Balb/c小鼠，同時(shí)利用卵清蛋白(OVA)和囊素三肽(BS)進(jìn)行偶聯(lián)制備出檢測(cè)抗原，用于小鼠血清效價(jià)的檢測(cè)和篩選陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株。 免疫后的小鼠脾臟細(xì)胞與NSO雜交瘤細(xì)胞融合產(chǎn)生分泌BS單抗的雜交瘤細(xì)胞株，篩選出3F1特異性雜交瘤細(xì)胞株，其產(chǎn)生的單抗命名為3F1-McAb，亞類鑒定為IgM。經(jīng)過(guò)三次有限稀釋法克隆后，含3F1-McAb的雜交瘤細(xì)胞上清液抗BS的間接EL

3、ISA效價(jià)最高為1：100。利用高壓液相色譜(HPLC)進(jìn)行分析，結(jié)果表明：在3.863 min處，有一個(gè)比較明顯的抗原抗體復(fù)合物(BS-3F1-McAb)峰。免疫組化證明，3F1-McAb能與法氏囊中的BS發(fā)生特異性反應(yīng)。競(jìng)爭(zhēng)性抑制ELISA反應(yīng)的結(jié)果表明，人工合成的囊素三肽可以很好的抑制3F1-McAb與OVA-BS抗原之間的反應(yīng)。 用3F1-McAb建立了囊素三肽的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法，對(duì)相關(guān)條件如OVA-BS包被條