抗豬γ-干擾素單克隆抗體的制備及定量抗原捕獲ELISA檢測(cè)方法的初步建立.pdf

1、γ-干擾素（IFN-γ）是機(jī)體內(nèi)具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)功能的重要細(xì)胞因子。γ-干擾素主要由激活的T細(xì)胞、激活的NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生。研究表明，內(nèi)源性IFN-γ水平的高低在很大程度上可以反映機(jī)體的細(xì)胞免疫狀態(tài)，對(duì)樣本中的IFN-γ進(jìn)行定量分析，在免疫機(jī)制研究、免疫功能分析、疫苗免疫效果評(píng)估、器官移植、過(guò)敏反應(yīng)以及多種胞內(nèi)病原感染的診斷等方面都具有極其重要的理論價(jià)值和應(yīng)用價(jià)值。 本研究利用在大腸埃希氏菌中表達(dá)的重組豬γ-干擾

2、素（rpIFN-γ）免疫8周齡BALB／c鼠3次后，取脾細(xì)胞與SP2／0骨髓瘤細(xì)胞按標(biāo)準(zhǔn)程序融合后，以間接ELISA和有限稀釋法進(jìn)行篩選，獲得1株能穩(wěn)定分泌抗豬IFN-γ單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，該株單克隆抗體命名為B11株。同時(shí)將rpIFN-γ免疫產(chǎn)蛋雞4次后，收集雞蛋并分離卵黃，經(jīng)過(guò)氯仿抽提和硫酸氨沉淀，獲得卵黃抗體（Icy）粗品。將純化的rpIFN-γ，偶聯(lián)于溴化氰活化的葡聚糖凝膠4B上，利用免疫親和層析進(jìn)一步純化抗原特異性IgY