產(chǎn)氣莢膜梭菌的基因分型及地衣芽孢桿菌對雞壞死性腸炎回腸菌群的影響.pdf

1、試驗(yàn)從不同日齡健康雞群的嗉囊、十二指腸、膽囊、空腸、回腸和盲腸內(nèi)容物中分離產(chǎn)氣莢膜梭菌，確定其基因型。此外，從健康雞回腸分離篩選到一株對產(chǎn)氣莢膜梭菌具有良好拮抗性、耐熱、耐酸和耐膽鹽的芽孢桿菌。最后，將分離的芽孢桿菌用于動物試驗(yàn)，研究其對產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的壞死性腸炎雞群生長性能、免疫器官指數(shù)、回腸菌群及其多樣性的影響。其主要內(nèi)容包括：
　　 1.產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離鑒定：采用CW卵黃卡那霉素和紫牛乳培養(yǎng)基，從21、28、35、42

2、、49日齡健康雞群的組織內(nèi)容物中分離，其中十二指腸、膽囊、空腸、回腸內(nèi)容物未分離到產(chǎn)氣莢膜梭菌，嗉囊和盲腸的內(nèi)容物分離得到27株產(chǎn)氣莢膜梭菌，檢出率為9.0％。
　　 2.產(chǎn)氣莢膜梭菌的基因型：分離的27株產(chǎn)氣莢膜梭菌經(jīng)Multi-PCR都只擴(kuò)增出a條帶，毒素基因分型結(jié)果均為A型。REP-PCR和ERIC-PCR兩種分型方法均表明不同日齡、不同組織來源的產(chǎn)氣莢膜梭菌亞型差異明顯，而同一日齡、相同組織的亞型較單一，交叉有少數(shù)其他亞

3、型。
　　 3.芽孢桿菌的篩選：從健康雞空腸、回腸、盲腸內(nèi)容物中分離到5株芽孢桿菌(K1,H1,H2,M1,M2)，經(jīng)篩選得到耐受性較好的H2，其分子生物學(xué)鑒定為地衣芽孢桿菌。通過代謝產(chǎn)物抗病原微生物的生物學(xué)性能試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)H2具有很好的抑菌性能，其體外抑菌成分主要是酸性依賴物質(zhì)。
　　 4.動物試驗(yàn)：購買健康1日齡鐵腳麻135羽，隨機(jī)分成9組。1組是空白對照，不進(jìn)行感染。2到9組均在15日齡時每只雞灌喂1mL球蟲卵囊(1

4、00萬個/ml),17-20日齡每天灌喂產(chǎn)氣莢膜梭菌1mL CVCC2030(1.0×108CFU/mL)，建立感染模型。3、4、5為預(yù)防組，分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.05％、0.1％、0.2％菌粉Ⅰ(含芽孢桿菌H2活菌數(shù)1.0×109CFU/g)。6、7、8為治療組，在0-21日齡飼喂基礎(chǔ)日糧中添加0.05％的菌粉Ⅰ,21日齡后分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.1％、0.2％、0.4％菌粉Ⅱ(含芽孢桿菌H2活菌數(shù)1.0×1010CFU/g),9組

5、在基礎(chǔ)日糧中添加0.1％鹽霉素作為治療對照組。
　　 (1)生長性能：28日齡時添加芽孢桿菌預(yù)防、治療感染雞模型和空白組的末期體重、平均日增重均比感染組高，差異極顯著(P＜0.01)；料重比比感染組低，差異極顯著(P＜0.01）。其中4、8組效果最明顯。
　　 (2)免疫器官指數(shù)：28日齡時3、4、5組法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)與感染組的差異極顯著（P＜0.01），4組脾臟指數(shù)與3、5組的差異顯著（P＜0.05），說

6、明添加0.1％菌粉Ⅰ在基礎(chǔ)日糧中對提高肉雞免疫器官指數(shù)有效。6、7、8組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)與感染組的差異極顯著（P＜0.01），法氏囊指數(shù)與感染組的差異顯著(P＜0.05)。9組法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)與感染組的差異極顯著(P＜0.01),與空白組的差異不顯著（P＞0.05）。
　　 (3)回腸菌群：28日齡時，3、4、5組產(chǎn)氣莢膜梭菌、大腸桿菌、腸球菌和總需氧菌數(shù)量顯著下降(P＜0.05)，乳酸桿菌、雙歧桿菌、類桿菌和總

7、厭氧菌數(shù)量顯著升高(P＜0.05)。6、7、8組乳酸桿菌、雙歧桿菌、類桿菌和總厭氧菌數(shù)量顯著升高（P＜0.05），產(chǎn)氣莢膜梭菌、大腸桿菌、腸球菌和總需氧菌數(shù)量極顯著下降(P＜0.01)。9組各種菌數(shù)與感染組的差異不顯著(P＞0.05)，結(jié)果表明，芽孢桿菌預(yù)防和治療組都使回腸健康指數(shù)B/E值升高。
　　 (4)PCR-DGGE技術(shù)分析回腸菌群結(jié)構(gòu)及多樣性：28日齡時，空白組、飼喂芽孢桿菌預(yù)防、治療各組與感染組的圖譜條帶差顯極著異(

8、P＜0.01），感染組條帶數(shù)僅為19，表明腸道內(nèi)菌群多態(tài)性降低。空白組條帶數(shù)是26.3,3、4、5組條帶數(shù)分別是23.7、31、30.3，說明飼喂芽孢桿菌能夠保護(hù)腸道微生物群，提高雞腸道微生物多態(tài)性，4組效果最好。6、7、8、9組條帶數(shù)分別是23.6、25.3、33.7、21，說明在飼喂芽孢桿菌預(yù)防的基礎(chǔ)上，再添加高劑量的芽孢桿菌治療也能夠保護(hù)腸道微生物群的多態(tài)性，8組效果最好。
　　 (5)回腸形態(tài)檢測：空白組、預(yù)防組、治療組