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文檔簡介
1、試驗(yàn)從不同日齡健康雞群的嗉囊、十二指腸、膽囊、空腸、回腸和盲腸內(nèi)容物中分離產(chǎn)氣莢膜梭菌,確定其基因型。此外,從健康雞回腸分離篩選到一株對產(chǎn)氣莢膜梭菌具有良好拮抗性、耐熱、耐酸和耐膽鹽的芽孢桿菌。最后,將分離的芽孢桿菌用于動物試驗(yàn),研究其對產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的壞死性腸炎雞群生長性能、免疫器官指數(shù)、回腸菌群及其多樣性的影響。其主要內(nèi)容包括:
1.產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離鑒定:采用CW卵黃卡那霉素和紫牛乳培養(yǎng)基,從21、28、35、42
2、、49日齡健康雞群的組織內(nèi)容物中分離,其中十二指腸、膽囊、空腸、回腸內(nèi)容物未分離到產(chǎn)氣莢膜梭菌,嗉囊和盲腸的內(nèi)容物分離得到27株產(chǎn)氣莢膜梭菌,檢出率為9.0%。
2.產(chǎn)氣莢膜梭菌的基因型:分離的27株產(chǎn)氣莢膜梭菌經(jīng)Multi-PCR都只擴(kuò)增出a條帶,毒素基因分型結(jié)果均為A型。REP-PCR和ERIC-PCR兩種分型方法均表明不同日齡、不同組織來源的產(chǎn)氣莢膜梭菌亞型差異明顯,而同一日齡、相同組織的亞型較單一,交叉有少數(shù)其他亞
3、型。
3.芽孢桿菌的篩選:從健康雞空腸、回腸、盲腸內(nèi)容物中分離到5株芽孢桿菌(K1,H1,H2,M1,M2),經(jīng)篩選得到耐受性較好的H2,其分子生物學(xué)鑒定為地衣芽孢桿菌。通過代謝產(chǎn)物抗病原微生物的生物學(xué)性能試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)H2具有很好的抑菌性能,其體外抑菌成分主要是酸性依賴物質(zhì)。
4.動物試驗(yàn):購買健康1日齡鐵腳麻135羽,隨機(jī)分成9組。1組是空白對照,不進(jìn)行感染。2到9組均在15日齡時每只雞灌喂1mL球蟲卵囊(1
4、00萬個/ml),17-20日齡每天灌喂產(chǎn)氣莢膜梭菌1mL CVCC2030(1.0×108CFU/mL),建立感染模型。3、4、5為預(yù)防組,分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.05%、0.1%、0.2%菌粉Ⅰ(含芽孢桿菌H2活菌數(shù)1.0×109CFU/g)。6、7、8為治療組,在0-21日齡飼喂基礎(chǔ)日糧中添加0.05%的菌粉Ⅰ,21日齡后分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.1%、0.2%、0.4%菌粉Ⅱ(含芽孢桿菌H2活菌數(shù)1.0×1010CFU/g),9組
5、在基礎(chǔ)日糧中添加0.1%鹽霉素作為治療對照組。
(1)生長性能:28日齡時添加芽孢桿菌預(yù)防、治療感染雞模型和空白組的末期體重、平均日增重均比感染組高,差異極顯著(P<0.01);料重比比感染組低,差異極顯著(P<0.01)。其中4、8組效果最明顯。
(2)免疫器官指數(shù):28日齡時3、4、5組法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)與感染組的差異極顯著(P<0.01),4組脾臟指數(shù)與3、5組的差異顯著(P<0.05),說
6、明添加0.1%菌粉Ⅰ在基礎(chǔ)日糧中對提高肉雞免疫器官指數(shù)有效。6、7、8組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)與感染組的差異極顯著(P<0.01),法氏囊指數(shù)與感染組的差異顯著(P<0.05)。9組法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)與感染組的差異極顯著(P<0.01),與空白組的差異不顯著(P>0.05)。
(3)回腸菌群:28日齡時,3、4、5組產(chǎn)氣莢膜梭菌、大腸桿菌、腸球菌和總需氧菌數(shù)量顯著下降(P<0.05),乳酸桿菌、雙歧桿菌、類桿菌和總
7、厭氧菌數(shù)量顯著升高(P<0.05)。6、7、8組乳酸桿菌、雙歧桿菌、類桿菌和總厭氧菌數(shù)量顯著升高(P<0.05),產(chǎn)氣莢膜梭菌、大腸桿菌、腸球菌和總需氧菌數(shù)量極顯著下降(P<0.01)。9組各種菌數(shù)與感染組的差異不顯著(P>0.05),結(jié)果表明,芽孢桿菌預(yù)防和治療組都使回腸健康指數(shù)B/E值升高。
(4)PCR-DGGE技術(shù)分析回腸菌群結(jié)構(gòu)及多樣性:28日齡時,空白組、飼喂芽孢桿菌預(yù)防、治療各組與感染組的圖譜條帶差顯極著異(
8、P<0.01),感染組條帶數(shù)僅為19,表明腸道內(nèi)菌群多態(tài)性降低。空白組條帶數(shù)是26.3,3、4、5組條帶數(shù)分別是23.7、31、30.3,說明飼喂芽孢桿菌能夠保護(hù)腸道微生物群,提高雞腸道微生物多態(tài)性,4組效果最好。6、7、8、9組條帶數(shù)分別是23.6、25.3、33.7、21,說明在飼喂芽孢桿菌預(yù)防的基礎(chǔ)上,再添加高劑量的芽孢桿菌治療也能夠保護(hù)腸道微生物群的多態(tài)性,8組效果最好。
(5)回腸形態(tài)檢測:空白組、預(yù)防組、治療組
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