A型產(chǎn)氣莢膜梭菌家兔感染模型的建立.pdf

1、近年來(lái)，我國(guó)許多兔場(chǎng)頻繁爆發(fā)兔腹瀉性腸炎，主要由A型產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的一種腸道疾病，給兔養(yǎng)殖戶造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。該病發(fā)病迅速，死亡率高，所以對(duì)該病的預(yù)防工作至關(guān)重要。本試驗(yàn)建立的A型產(chǎn)氣莢膜梭菌的感染模型，不僅為產(chǎn)氣莢膜梭菌病有關(guān)疫苗的效力檢驗(yàn);抗毒素血清的治療效果評(píng)價(jià)提供了感染模型，還為評(píng)估菌株的毒力，產(chǎn)氣莢膜梭菌的致病機(jī)制研究提供參考。
　　通過(guò)細(xì)菌的分離培養(yǎng)，染色涂片鏡檢，分離純化，生化實(shí)驗(yàn)及多重PCR初步診斷臨床病例中分

2、離的產(chǎn)氣莢膜梭菌基因型為A型。從臨床發(fā)病兔的肝臟共分離出4株A型產(chǎn)氣莢膜梭菌，和參考菌株NCTC528經(jīng)過(guò)菌種的復(fù)蘇、增菌和產(chǎn)毒素培養(yǎng)，所產(chǎn)毒素進(jìn)行卵磷脂酶活性實(shí)驗(yàn)和小鼠LD50的測(cè)定和比較。在相同的產(chǎn)毒條件下得到產(chǎn)毒效果比較好的菌株（濟(jì)寧株1）。
　　NCTC528和濟(jì)寧株1菌株經(jīng)過(guò)重新復(fù)蘇、增菌和產(chǎn)毒，所得的培養(yǎng)物用于感染家兔。培養(yǎng)物通過(guò)不同處理方式、不同感染方式接種2kg健康家兔，研究結(jié)果表明:腹腔注射NCTC528除菌毒素

3、（小鼠LD50:24.25;卵磷脂酶活性:24）可在6-8小時(shí)致死家兔;最小致死劑量是3ml;肌肉注射528除菌毒素（小鼠LD50:24.25;卵磷脂酶活性:24）的最小致死劑量是4ml;肌肉注射全菌液（小鼠LD50:25.25;毒素卵磷脂酶活性:25，細(xì)菌濃度1.3×109cfu/ml）最小致死量是5ml，對(duì)腹腔和肌肉注射的感染死亡兔進(jìn)行剖檢病變和組織病理學(xué)病變的觀察，病變主要特征是:腹腔和肌肉注射除菌毒素都出現(xiàn)了胃黏膜脫落和小腸黏膜

4、彌散性出血現(xiàn)象;但胃粘膜有潰瘍?cè)?，盲腸漿膜面有出血病變少見(jiàn)。
　　分別以培養(yǎng)物（細(xì)菌濃度1.3×109 cfu/ml，卵磷脂酶活性效價(jià)25），30ml,40ml，50ml灌服2kg家兔，并飼喂不同飼料配方飼料，僅見(jiàn)短期腹瀉，未見(jiàn)死亡。2Kg家兔回腸注射感染全菌液（細(xì)菌濃度1.6×108 cfu/ml，卵磷脂酶活性為24）5ml、8ml、10ml。部分兔出現(xiàn)腹瀉死亡，不能穩(wěn)定復(fù)制病變，血常規(guī)監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn):攻毒后一周淋巴細(xì)胞比率、血小板總