精子載體制備FecB轉(zhuǎn)基因太行山羊技術(shù)的研究.pdf

1、精子介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移是指以精子作為外源基因的載體,在受精時(shí)將外源基因?qū)肼涯讣?xì)胞,使受精卵中含有外源基因,是目前轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究中簡單而高效的方法之一。脂質(zhì)體可用于轉(zhuǎn)基因的研究,利用脂質(zhì)體可以和細(xì)胞膜融合的特點(diǎn),將外源基因送入細(xì)胞內(nèi)部。本實(shí)驗(yàn)利用脂質(zhì)體介導(dǎo)精子轉(zhuǎn)染的方法,研究了精子在介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移過程中精子與外源基因結(jié)合的影響因素,并對精子載體法制備FecB轉(zhuǎn)基因太行山羊進(jìn)行了初步研究。試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 1.精子充分離心洗滌后,再

2、與脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物混合,可顯著提高脂質(zhì)體介導(dǎo)精子轉(zhuǎn)染外源DNA的效率。DNaseI消化前,洗滌組轉(zhuǎn)染精子陽性率為38％,而未處理精液組精子陽性率為14％；DNaseI消化后,洗滌組轉(zhuǎn)染精子陽性率為21％,而未處理精液組精子陽性率為5％,差異極顯著(P<0.01)。
　　 2.脂質(zhì)體介導(dǎo)法可使外源DNA透過細(xì)胞膜內(nèi)化進(jìn)入精子胞質(zhì)或胞核內(nèi),精子轉(zhuǎn)染外源DNA用DNaseI消化后能檢測到精子中外源DNA的存在。太行山羊精子與外源D

3、NA混合培養(yǎng)后,用熒光原位雜交檢測到18.3％的精子結(jié)合有外源DNA,脂質(zhì)體Lipofectamine2000介導(dǎo)后比率增加至38.7％,兩法的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析存在顯著性差異(P<0.01)。
　　 3.利用共培養(yǎng)法轉(zhuǎn)染外源DNA,用DNaseI消化后,能檢測到精子中外源DNA的存在,山羊精子具有自發(fā)的結(jié)合外源DNA的能力。
　　 4.對18只太行山羊母羊進(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)情處理,精子與FecB基因共孵育后,對發(fā)情母羊進(jìn)行輸精,受孕率