油茶DGAT1基因的全長cDNA克隆與原核表達.pdf

1、油茶(Camellia oleifera)是我國南方重要的木本油料樹種，茶油中富含油酸、亞油酸等不飽和脂肪酸，為優(yōu)質(zhì)食用油。但油茶種子含油率低，直接影響油茶的發(fā)展和經(jīng)濟效益的發(fā)揮。三酰甘油(TAG)是油茶最主要的儲存脂類，而二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶(DGAT)是TAG合成的Kennedy途徑中唯一的限速酶，其主要作用是催化二酰甘油加上?；舅嵝纬扇８视?，可見DGAT酶對TAG的累積起著直接作用。因此開展油茶DGAT基因的克隆和功能分析，對

2、揭示油茶油脂合成的分子機制有重要意義。本論文主要研究結(jié)果如下：
　　 (1)油茶DGAT1基因的分離鑒定。在GeneBank中以DGAT為關(guān)鍵詞進行搜索，選出5條產(chǎn)油植物DGAT1的氨基酸序列和全長cDNA序列，通過比對分析，在保守區(qū)設(shè)計了一對簡并引物。以國家審定油茶優(yōu)良品種--‘華碩’的近成熟種子胚乳為材料提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA，通過RT-PCR擴增出了一條大小約500bp的條帶，測序得到506bp的部分cDNA序列

3、。并在網(wǎng)上進行BLAST比對分析，確認所得片段為油茶DGAT1部分基因片段。
　　 (2)油茶DGAT1基因的全長cDNA克隆及生物信息學分析。根據(jù)油茶DGAT1基因的部分cDNA序列信息，設(shè)計了3條油茶DGAT1基因5’RACE特異引物和兩條3’RACE用的特異引物。以‘華碩’的近成熟胚乳為材料提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄制備RACE ready cDNA，進行5’RACE和3’RACE擴增。拼接的序列在NCBI中BLAST確認為油茶

4、DGAT1基因的全長cDNA序列，該基因命名為co-dgatl。通過Vector NTI9.0等生物軟件的分析，此cDNA序列長1893bp，包含1個1548bp完整的CDS及121bp5’UTR和229bp3’UTR，編碼515個氨基酸。應(yīng)用一系列生物信息學進行預(yù)測分析，結(jié)果顯示：其蛋白分子量為58.44 k Da，理論等電點為8.70，其中正電荷氨基酸殘基數(shù)目為46，負電荷氨基酸殘基數(shù)目為38；CODGAT1蛋白質(zhì)不穩(wěn)定系數(shù)為46.