磷脂酶C和磷脂酶D在核黃素誘導煙草懸浮細胞防衛(wèi)反應中的作用.pdf

1、核黃素作為植物防衛(wèi)反應的激發(fā)子，可增強植物對由真菌、卵菌、細菌、病毒等病害的抗性。但是，其防衛(wèi)機制并不清楚。磷脂酶C(phospholipasc C，PLC)信號和磷脂酶D(phospholipase D，PLD)信號途徑在動植物防衛(wèi)反應中起著重要作用。PLC的水解產物二酯酰甘油(diacylglycerol，DAG)和三磷酸肌醇(inositol 1，4，5-trisphosphate，IP3)，以及PLC和PLD的共同產物磷脂酸(p

2、hosphatidic acid，PA)。目前對于PLC信號途徑和PLD信號途徑是否參與了煙草懸浮細胞中核黃素誘導的防衛(wèi)反應還缺乏系統(tǒng)研究。
　　 本文運用藥理學方法研究煙草懸浮細胞，為了確定核黃素激發(fā)的防衛(wèi)反應是否依賴于PLC和PLD途徑。通過采用生物化學、細胞化學、半定量RT-PCR(reverse transcriptasc-polymerase chain reaction，RT-PCR)、熒光定量PCR(Real-ti

3、me，PCR)和高效液相色譜(high performance liquid chromatography，HPLC)等技術測定了一系列防衛(wèi)反應。所得結果如下：
　　 1、煙草懸浮細胞受核黃素誘導后NtPLC1表達量沒有明顯變化，但其它PLC和PLD基因的表達量均明顯增加。NtPLD(NtPLDα2，NtPLDα3，NtPLDβ1和NtPLDδ)基因的表達水平也表現(xiàn)出差異。
　　 2、為了闡明PLC和PLD是否參與了核黃

4、素誘導的煙草懸浮細胞的過氧化氫(H2O2)的產生，用PLC的特異性抑制劑U73122和PLD的抑制劑1-butanol提前處理核黃素誘導的細胞，測定細胞過氧化氫被抑制情況。結果表明U73122(10μmol/L)和1-butanol(0.1％，v/v)對核黃素誘導的過氧化氫產生的抑制率分別為79.5％和62.9％。但是U73343(U73122的類似物)和tert-butanol(1-butanol的類似物)沒有作用。這些結果表明PLC

5、和PLD途徑都參與了核黃素誘導的煙草懸浮細胞的過氧化氫的產生。另外，核黃素還能誘導一氧化氮(nitric oxide，NO)的生成。
　　 3、提前加入PLC抑制劑(U73122)和PLD的抑制劑(1-butanol)處理核黃素誘導的煙草懸浮細胞后，3種防衛(wèi)基因PR(pathogenesis-related)-1a、PR-16及PAL等的表達受到不同程度的抑制。
　　 4、PLC和PLD抑制對核黃素誘導的scopolet