磷脂酶D制備及催化反應(yīng)的初步研究.pdf

1、磷脂廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域，但是，很多情況下天然磷脂難于滿足制品性能方面的要求。磷脂酶D(PLD)是成功制備各種半合成工藝磷脂的關(guān)鍵技術(shù)，因而該酶制劑及應(yīng)用技術(shù)得到重視和發(fā)展。本文對放線菌發(fā)酵產(chǎn)磷脂酶D的性質(zhì)和轉(zhuǎn)磷脂酰反應(yīng)應(yīng)用進行了實驗探索研究。 應(yīng)用硫酸銨沉淀法、乙醇沉淀法、聚乙二醇沉淀法對微生物發(fā)酵生產(chǎn)磷脂酶D進行了初步純化。其中，硫酸銨鹽析法在60％飽和度時提純了8.01倍，回收率為50.9％；乙醇沉淀法在用量體積分數(shù)

2、1.0∶1時提純了8.08倍，回收率為60％；聚乙二醇沉淀法在0.4g/mL時提純了11.2倍，回收率為50.9％。 采用分光光度法檢測不同條件下的磷脂酶D水解活力，發(fā)現(xiàn)磷脂酶D在pH為6，溫度為50℃時活力最高；在pH值為4-8時，酶活性較穩(wěn)定；溫度低于40℃時酶活力較穩(wěn)定。磷脂酶D的保存穩(wěn)定性較好，在4℃下保存30天尚有80％以上的酶活力。 以硅藻土、高嶺土、硅膠G為載體，對磷脂酶D進行吸附固定化，比較三種載體的固定

3、化效果，硅藻土為較為理想的載體。 以谷氨酸、月桂醇、葡萄糖酸內(nèi)酯為原料，合成了一種非離子型表面活性劑谷氨酸二月桂?；ズ颂谴?，用該表面活性劑對酶進行包覆固定化。當表面活性劑質(zhì)量與磷脂酶D的蛋白含量比為2∶1時，包覆率達到最大，為40％。 以PC(磷脂酰膽堿)為底物，對磷脂酶D在有機介質(zhì)中的催化反應(yīng)作了初步研究，研究表明：以磷脂酶D催化的轉(zhuǎn)磷脂酰反應(yīng)和水解反應(yīng)，當受體醇濃度遠遠大于PC濃度時，其動力學(xué)方程符合米氏方程。在水