磷脂酶D制備磷脂酰甘油的酶學(xué)特性研究.pdf

1、本文研究了磷脂酶D在有機(jī)溶劑中的催化性能和二級(jí)結(jié)構(gòu)，建立了相應(yīng)的檢測方法，并探討了磷脂酶D在有機(jī)溶劑中的構(gòu)效關(guān)系。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下： 以logP為量化指標(biāo)考察了有機(jī)溶劑對(duì)磷脂酶D催化活力的影響，研究結(jié)果顯示logP過高或過低的有機(jī)溶劑都不利于酶促反應(yīng)的進(jìn)行，最佳溶劑為乙醚，其次是乙酸乙酯、氯仿和二氯甲烷。花生磷脂酶D對(duì)底物卵磷脂的來源具有選擇性，對(duì)大豆卵磷脂的催化活力明顯高于雞蛋卵磷脂。通過單因素試驗(yàn)得出較適合的反應(yīng)條件：

2、酶對(duì)底物的質(zhì)量百分比為2％，底物濃度10mg/ml，離子交換樹脂用量100mg/5ml。對(duì)磷脂酶D進(jìn)行預(yù)處理可以不同程度提高有機(jī)溶劑中的酶活力，但磷脂酶D對(duì)Ca2+的需求幾乎是必需的，且對(duì)Ca2+濃度要求較高，過量的Ca2+會(huì)嚴(yán)重抑制酶活力。最佳預(yù)處理方法為：Ca2+濃度80mM，98％KCl(鹽在凍干粉中的比重越高越好)，pH5.58。 測定了磷脂酶D在不同環(huán)境下分子的二級(jí)結(jié)構(gòu)，得出磷脂酶D由水溶液凍干后，分子中的二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生

3、變化，主要表現(xiàn)為α螺旋含量下降和β折疊含量上升。大量的鹽有助于維持磷脂酶D凍干粉和有機(jī)溶劑懸浮液在水溶液中的二級(jí)結(jié)構(gòu)，pH狀態(tài)在凍干粉和懸浮液中得到保留，并反映在對(duì)β結(jié)構(gòu)的維持上。磷脂酶D在有機(jī)溶劑懸浮液中基本保持了凍干狀態(tài)的二級(jí)結(jié)構(gòu)，但是經(jīng)過預(yù)處理的凍干粉中酶分子的二級(jí)結(jié)構(gòu)仍然會(huì)受到有機(jī)溶劑不同程度的影響，其中苯、甲苯、正己烷和乙腈較氯仿、二氯甲烷、乙醚和乙酸乙酯影響更明顯。 建立了HPLC檢測混合磷脂樣品中PG含量的方法和F

4、TIR測定磷脂酶D分子二級(jí)結(jié)構(gòu)的方法，方法準(zhǔn)確可靠。 利用統(tǒng)計(jì)方法研究了磷脂酶D在有機(jī)溶劑中的二級(jí)結(jié)構(gòu)和酶活力的關(guān)系，并建立了磷脂酶D酶分子二級(jí)結(jié)構(gòu)(x1:α螺旋，x2:β折疊，x3:β轉(zhuǎn)角，x4:無規(guī)卷曲)和有機(jī)溶劑(x5:logP)對(duì)酶活力(y:PG濃度)影響的多元線性回歸模型y=63.368+1.491x1-2.213x2-5.207x5和主成分回歸模型y=48.9593+0.0249x1-0.0455x2-0.0061x