棉花病毒誘導的基因沉默體系的建立及其在棉花抗黃萎病中的應用.pdf

1、棉花黃萎病是一種由大麗輪枝菌引起的對棉花危害較大的世界性病害之一。近幾年來，黃萎病在我國南北方棉區(qū)蔓延迅速，為害也在逐年加重，成為棉花生產(chǎn)中的主要障礙。目前對棉花黃萎病抗性的分子機理研究仍不是很清楚，發(fā)掘抗黃萎病優(yōu)異基因可加速棉花抗病育種進程。而基于病毒誘導的基因沉默方法將目標基因沉默并觀察其對棉花黃萎病抗性的影響，在研究棉花抗黃萎病的分子機制中有著重要的意義。本研究系統(tǒng)開展了棉花病毒誘導的基因沉默體系的建立及其在棉花抗黃萎病中的應用。

2、
　　主要研究結果如下:
　　1.構建棉花CLA1（Cloroplastos alterados 1 gene）基因的沉默載體，利用TRV病毒載體建立基于病毒誘導的棉花基因沉默體系(VIGS)。通過農(nóng)桿菌注射法觀察不同濃度的農(nóng)桿菌對沉默效率的影響，明確農(nóng)桿菌濃度在0.1～3.0之間都可以獲得良好的沉默效果，通過對30個不同來源的棉花品種進行VIGS體系對受體的選擇性分析，結果表明VIGS誘導的棉花功能基因沉默體系受受體遺傳背

3、景影響不大。病毒基因TRV-RNA2的RT-PCR分析證明子葉接種病毒侵染后，該病毒可到達受體的根、莖、葉等器官，說明該技術可應用于不同組織器官來源基因驗證的廣譜性。
　　2.MAPK級聯(lián)途徑與多種生物和非生物脅迫的反應相關。本研究克隆了棉花絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號轉(zhuǎn)導途徑中兩個基因GhMAPK，GhMAPKKK。構建沉默載體，通過病毒誘導的基因沉默的方法證明GhMAPKKK在棉花抗黃萎病過程中具有一定的作用。通過RT-