J亞群禽白血病病毒gp85重組干酪乳桿菌表達及其免疫效果的研究.pdf

1、J亞群禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus subgroup J，ALV-J)是1988年首次在肉用型雞中分離得到，主要引發(fā)雞的髓細胞組織增生和腎瘤。該病已經迅速蔓延到許多國家，給世界養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的損失。目前還沒有商品化的疫苗用于防治ALV-J感染，國外主要通過凈化種雞群的辦法來防控ALV-J。但是由于養(yǎng)殖的大環(huán)境已經污染，所以只依靠凈化來完全控制ALV-J感染是不可能的。最近幾年，許多專家學者也都嘗試研制ALV-J

2、滅活苗和弱毒苗，但是由于滅活病毒的同時也破壞了其誘導產生抗體的能力，而且該病毒的抗原結構復雜，要想得到理想的弱毒苗十分困難。因此，研制新型有效的ALV-J疫苗勢在必行。
　　由于大多數病毒和細菌都是通過黏膜侵入動物機體，所以利用活載體呈遞抗原到黏膜組織，從而誘導黏膜免疫應答來抵抗大量的細菌病毒的入侵的這種途徑是十分有效的。近年來乳酸菌口服疫苗已成為研制的熱點，利用乳酸菌作為表達外源保護性抗原基因的活載體菌株，能將乳酸菌的生物學功能

3、和外源抗原基因的免疫原性相結合，同時乳酸菌作為正常生理性細菌，又符合新型疫苗的安全、方便、廉價等特點。
　　本研究的目的是探究原核表達J亞群禽白血病病毒gp85囊膜蛋白誘導雛雞產生保護性抗體及抗ALV-J感染的作用。本研究利用PCR技術從J亞群禽白血病病毒env基因中擴增出gp85囊膜糖蛋白基因;將其克隆至大腸-乳酸桿菌穿梭表達載體pMG36e中，轉入干酪乳酸桿菌，并使其表達。利用Western-blot、流式細胞技術和間接免疫熒

4、光檢測蛋白的表達含量和活性，并將含重組質粒的干酪乳酸菌口服或滴鼻免疫SPF雞，免疫接種后檢測不同時間段抗體水平;同時在免疫7周后，對試驗雞進行攻毒保護性試驗。結果表明，重組干酪乳桿菌pMG36e-gp85/L.casei免疫雛雞后能夠產生明顯的抗體水平;對照組病毒血癥平均檢出率為86％，而口服組和滴鼻組病毒血癥平均檢出率為40％和55.2％;由此可見，構建的重組干酪乳桿菌pMG36e-gp85/L.casei對禽白血病病毒具有一定的抵抗