糖皮質激素在應激家禽食欲調控中的作用機制.pdf

1、本試驗采用禁食、熱應激、腦室注射和外周注射糖皮質激素(GCs)的方法，研究了GCs對家禽食欲的調控機制。通過禁食試驗中，初步探討了中樞單磷酸腺苷激酶(AMPK)信號的食欲調節(jié)作用;通過腦室注射GCs，研究了AMPK信號在中樞GCs對家禽采食量調控的作用機制;通過外周注射GCs，研究了GCs影響肉仔雞選擇不同能量日糧的影響及調控機制;通過熱應激處理研究了其降低食欲有關的食欲調節(jié)肽，最終明確了GCs在應激家禽食欲調控中的作用機制。
　

2、　AMPK在以應激家禽食欲調控中的作用。通過禁食初步探討了AMPK在對家禽食欲調控的影響。結果發(fā)現(xiàn):禁食24小時處理顯著升高了肉仔雞下丘腦中AMPKα2、AMPKβ1、AMPKβ2和AMPKγ1的mRNA水平;禁食48小時顯著增加肉仔雞下丘腦中肝激酶(LKB1)和AMPK的蛋白磷酸化水平和刺鼠色蛋白相關蛋白（AgRP）、促黑激素受體4(MC4R)、神經(jīng)肽Y(NPY)、黑皮質素(MCH)、食欲素(Pre-orexin)基因表達。恢復采食后

3、禁食所造成的影響消除。這一結果表明AMPK信號參與家禽的能量代謝，可能是通過AgRP/NPY作用的。因此，我們推測AMPK信號也可能在GCs調節(jié)家禽食欲中發(fā)揮一定的作用，通過腦室注射地塞米松(DEX)后顯著增加了肉仔雞采食量以及下丘腦中NPY、肉堿棕櫚酰轉移酶1(CPT1)、糖皮質激素受體(GR)的基因表達和AMPK、乙酰輔酶A羧化酶(ACC)的蛋白磷酸化水平。結果表明GCs可能與受體結合后通過調節(jié)AMPK信號級聯(lián)，使得NPY表達增加，

4、導致肉仔雞采食量升高。為進一步驗證我們的推測，我們又腦室注射AMPK抑制劑Compound C和GR抑制劑RU486，結果顯示:預先抑制AMPK顯著緩解了DEX導致的肉仔雞采食量增加的現(xiàn)象;同時，DEX對NPY和CPT1基因表達與AMPK和ACC的蛋白磷酸化水平上的影響都恢復到正常水平。預先中樞抑制GR后顯著抑制DEX誘導的高采食量現(xiàn)象，也緩解DEX對NPY和CPT1基因表達與AMPK和ACC的蛋白磷酸化水平上的影響。這些結果說明AMP

5、K信號通路在GCs促進家禽食欲中發(fā)揮一定的作用;此外，GCs對家禽食欲的影響還具有一定的受體依賴性。
　　外周GCs對家禽能量食欲的影響。試驗首先研究了外周GCs對家禽中樞食欲因子的影響，結果發(fā)現(xiàn):連續(xù)外周注射7天皮質酮顯著降低蛋雞的采食量和中樞中POMC和AgRP的表達量，卻顯著增加了中樞中Ghrelin和CART的表達量。這說明升高外周GCs同樣也能影響到家禽中樞食欲因子，為了進一步確定外周GCs對家禽能量食欲的影響，我們研究

6、了在皮質酮作用下肉仔雞對不同能量日糧選擇性的影響，結果發(fā)現(xiàn)皮質酮增加了其對高能日糧的采食。為了確定GCs導致肉仔雞對高能日糧偏愛的原因，我們又設立了皮質酮作用下對肉仔雞分別飼喂高能日糧和低能日糧，結果顯示:在低能日糧飼喂的肉仔雞中，皮質酮顯著增加了下丘腦中促腎上腺激素釋放激素(CRH)基因表達;在高能日糧飼喂的肉仔雞中，皮質酮顯著增加了下丘腦中CPT1基因表達和AMPK、ACC蛋白磷酸化;無論對肉仔雞飼喂何種日糧，皮質酮都顯著增加了下丘

7、腦中NPY基因的表達。這些結果表明GCs誘導肉仔雞對高能日糧的偏愛過程可能與AMPK信號和NPY/CRH信號有關。為了進一步確定我們的推測，我們又在皮質酮作用下腦室注射了AMPK的激活劑(AICAR)和抑制劑(Compound C)，結果顯示:腦室注射AICAR后加重了皮質酮對肉仔雞采食高能日糧誘導效應和對下丘腦中NPY基因和AMPK與ACC蛋白磷酸化的促進作用，卻能顯著緩解皮質酮對中樞CRH的抑制作用;而腦室注射不同劑量的Compou

8、nd C并沒有顯著抑制皮質酮對AMPK的促進效應。這些結果表明GCs促進家禽采食高能日糧過程與中樞AMPK信號有關。此外，GCs作用下伏隔核(NAc)中獎賞系統(tǒng)、海馬中記憶系統(tǒng)和胃腸道中腦腸肽的變化，結果發(fā)現(xiàn):在飼喂高能日糧的肉仔雞中，皮質酮顯著降低了腺胃、十二指腸中Ghrelin的基因表達;高能日糧顯著緩解了皮質酮對肉仔雞NAc內多巴胺的抑制;在正常和低能日糧飼喂的肉仔雞中，皮質酮對顯著抑制海馬中GR的抑制效應越顯著。這些結果表明GC

9、s導致家禽對高能日糧偏愛過程還可能與NAc中獎賞系統(tǒng)、海馬中記憶系統(tǒng)和胃腸道中腦腸肽有關。
　　熱應激對家禽食欲的影響。研究了急性熱應激組(35±1.5℃6個小時)和長期熱應激（環(huán)境溫度為31±1.5℃7天）對家禽食欲的影響。結果表明:熱應激7天顯著降低蛋雞的采食量和下丘腦中CCK的表達，卻顯著升高了中樞中Ghrelin和CART的mRNA水平;急性熱應激顯著抑制了肉雞在6小時內的采食量，而對中樞中各食欲因子的表達影響不顯著。這說

10、明熱應激都降低了家禽食欲，但熱應激的劇烈程度和時間可能影響到中樞食欲因子的表達。
　　綜上所述，中樞AMPK信號可能參與家禽的能量調控，在一定程度上是通過下丘腦中NPY/AgRP神經(jīng)元，并且AMPK信號還參與了中樞GCs對家禽食欲的影響，主要是通過AMPK-NPY神經(jīng)元作用的。外周GCs能夠通過激活下丘腦內AMPK-NPY-CRH信號途徑促進肉仔雞采食高能日糧。此外，外周GCs導致肉仔雞對采食高能日糧偏愛還可能與NAc中獎賞系統(tǒng)、